基于PFP荧光共振能量转移原理检测氧化损伤DNA

提出一种基于水溶性共轭聚合物PFP荧光共振能量转移原理检测氧化损伤DNA的方法。通过加入DNA修复酶来识别并切除被氧化的DNA碱基,获得含磷酸基团核苷酸空隙的DNA,再通过羟基引入荧光标记物,加入PFP后可得到PFPDNA复合物,通过荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)进行氧化损伤DNA的检测。对方法的影响因素进行了考查和优化,包括PFP的浓度、DNA修复酶的种类、DNA聚合酶I的用量以及芬顿反应的时间等。研究表明,基于PFP荧光共振能量转移原理检测氧化损伤DNA方法具有灵敏度高和特异性强的优势,可确保检测的准确性,对老年疾病的预防医学具有很好的应用前景。

芦荟提取物对衰老模型鼠抗自由基氧化损伤DNA作用的实验研究

目的 :探讨芦荟延缓衰老的疗效及其可能机理。方法 :利用小鼠吸入臭氧 (O3)制造衰老模型 ,并在其造模过程中以不同浓度的芦荟提取液实施治疗 ,9周后检测小鼠全血超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,肝组织过氧化脂质代谢产物丙二醛 (MDA)的含量 ,并用彗星实验 (CometAssay)检测肝、脾组织细胞DNA氧化损伤的程度。结果 :与模型组相比 ,经芦荟治疗后 ,模型小鼠不仅全血SOD活性及肝组织MDA含量两项指标明显改善并趋向正常 ,而且肝、脾细胞DNA拖尾尾长减短 ,有效地减轻了肝、脾细胞DNA的损伤程度 ,作用较复方丹参片对照组全面。结论 :芦荟能提高机体抗自由基氧化损伤的能力 ,减轻肝、脾细胞DNA损伤程度 。

聚ADP-核糖聚合酶-1在喉鳞状细胞癌细胞DNA氧化损伤及凋亡中的作用

目的探究聚ADP-核糖聚合酶-1(PARP1)在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达及其对LSCC细胞DNA氧化损伤与凋亡的影响。方法收集40例患者的LSCC组织及癌旁组织样本,采用免疫组化染色和qRT-PCR检测LSCC组织与癌旁组织中PARP1的表达。采用不同浓度Menadione诱导LSCC细胞系Hep-2,MTT法检测不同浓度诱导下细胞增殖抑制率。将Hep-2细胞随机分为对照组(正常培养)、Men组(20μmol/L Menadione处理)、Men+PARP1抑制剂组(20μmol/L Menadione+10μmol/L PARP1抑制剂Olaparib共处理)。MTT法计算各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;细胞免疫荧光染色观察各组细胞DNA损伤标记分子γ-H2AX焦点生成情况;Western blot测定各组细胞γ-H2AX、DNA-PKcs、BRCA1、LIG4、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达;Hoechst33258染色观察各组细胞凋亡情况。结果LSCC组织中PARP1阳性表达率及PARP1 mRNA表达均明显高于癌旁组织(P<0.01)。Hep-2细胞经不同浓度Menadione诱导后,细胞增殖抑制率均升高(P<0.05)。与对照组比较,Men组和Men+PARP1抑制剂组的细胞增殖抑制率升高,细胞ROS水平升高,γ-H2AX焦点形成明显增加,γ-H2AX蛋白表达上调,DNA-PKcs、BRCA1、LIG4蛋白表达均下调,细胞出现浓缩、碎裂的蓝色凋亡体,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05),且Men+PARP1抑制剂组以上变化较Men组更明显(P<0.05)。结论PARP1在LSCC组织中高表达,抑制其表达能够进一步加重Menadione诱导的Hep-2细胞DNA氧化损伤,并促进细胞凋亡。

姜黄素在抑制紫外线B诱导的人视网膜色素上皮细胞DNA氧化损伤和凋亡中的作用

目的 探讨姜黄素在紫外线B(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞DNA氧化损伤和凋亡中的作用机制。方法 将人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)随机分为空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、姜黄素组、UVB照射组、UVB+DMSO组和UVB+姜黄素组。CCK-8实验检测姜黄素对UVB照射前后ARPE-19细胞活力的影响;免疫荧光检测DNA氧化损伤标志蛋白磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)的定位;Western blot检测γH2AX、凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)和BCL-2相关X蛋白(BAX)]的表达变化;使用X-rosamine衍生物(Mito-Tracker Red CMXRos)和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的钙离子依赖的磷脂结核蛋白Annexin V(Annexin V-FITC)来检测UVB诱导的ARPE-19细胞线粒体膜电位变化和细胞凋亡情况。结果 与空白对照组相比,DMSO组DMSO处理24 h后的ARPE-19细胞活力无明显改变(P>0.05)。与DMSO组相比,姜黄素组采用15μmol·L^(-1)姜黄素处理24 h后ARPE-19细胞活力轻度升高(P<0.05),表明15μmol·L^(-1)姜黄素对ARPE-19细胞无毒性作用,后续实验采用该浓度处理细胞。与空白对照组相比,UVB照射组ARPE-19细胞活力降低,γH2AX和BAX蛋白表达水平升高,BCL-2蛋白表达水平降低,线粒体膜电位降低,细胞凋亡增加(均为P<0.05)。与UVB照射组相比,UVB+DMSO组ARPE-19细胞活力,γH2AX、BAX以及BCL-2蛋白表达水平均无明显变化(均为P>0.05),线粒体膜电位和细胞凋亡均无明显改变(均为P>0.05)。与UVB+DMSO组相比,UVB+姜黄素组ARPE-19细胞活力升高,γH2AX和BAX蛋白表达水平降低,BCL-2蛋白表达水平升高,线粒体膜电位升高,细胞凋亡减少(均为P<0.05)。结论 姜黄素能减轻UVB诱导的RPE细胞DNA氧化损伤和凋亡,有望为姜黄素在年龄相关性黄斑变性中的作用机制研究提供新的思路。

自由基与DNA氧化损伤的研究进展

自由基与DNA氧化损伤关系密切 ,自由基可引发DNA的碱基损伤 ,链断裂等损伤

丹酚酸抗氧化活性及其对DNA损伤保护作用

目的探讨丹酚酸抗氧化活性及其对DNA氧化损伤的保护作用机制。方法运用自由基反应模型观察丹酚酸对二苯代苦味酰肼自由基(DPPH)和羟自由基的淬灭效应,使用邻菲罗啉(Phen)-CuSO4-VC-H2O2-DNA化学发光体系测定丹酚酸对DNA损伤的抑制作用。高效液相色谱(HPLC)测定丹酚酸的组成。结果丹酚酸水提物(AE)、乙酸乙酯萃取物(EE)、大孔吸附树脂纯化物(RE)和对照维生素(VC)、二丁基羟基甲苯(BHT)对DPPH自由基的半数清除浓度(IC50)分别为141.2,15.3,14.6,15.8和71.5μg/ml。化学发光体系中,丹酚酸的加入能明显抑制并延迟DNA损伤。AE、EE、RE抑制发光50%浓度(IC50)值分别为1 293.6,62.0,49.2μg/ml。丹酚酸清除DPPH自由基能力和对羟自由基攻击的DNA损伤保护作用受丹酚酸组成和丹酚酸B含量的影响。结论丹酚酸属于预防型和断链型抗氧化剂,并可有效清除DPPH和羟自由基,对DNA损伤有明显保护作用。丹酚酸的抗氧化活性及对DNA损伤的保护作用与丹酚酸B含量有关。

环境砷中毒人群皮肤损害与DNA氧化损伤的关联性

选择内蒙古自治区某县长期暴露于高砷饮用水的人群中有皮肤损害者199人(病例组)和无皮肤损害者91人(对照组)作为研究对象,检测饮用水砷、尿砷和DNA氧化损伤的主要标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,以分析慢性砷中毒人群DNA氧化损伤与皮肤损害的相关性.结果表明,砷性皮肤损害组和无皮肤损害组人群尿中8-OHdG水平的中位数(四分位间距)分别为4.9(3.5～6.3)μg/g和5.3(4.1～7.2)μg/g,2组对象尿中8-OHdG水平间差异无统计学意义(P=0.074);多元Logistic回归分析结果显示,在校正了年龄、体质指数(BMI)、吸烟、饮酒和饮用高砷水时间等可能的混杂因素后,皮肤损害组人群尿中8-OHdG水平升高的比值比(OR)为1.1(95%CI:0.6,1.9),提示在砷暴露人群中,有无皮肤损害与8-OHdG水平的差异无统计学意义(P=0.863).慢性砷中毒人群皮肤损害与体内的DNA氧化损伤之间无显著的关联性,无皮肤损害人群同样有DNA氧化损伤的风险.

芡实多糖的提取、抗氧化活性及对质粒DNA氧化损伤防护作用的研究

采用纤维素酶超声辅助法提取芡实多糖,由正交实验获得芡实多糖的最佳提取条件,并探究其体外抗氧化活性及对H2O2光解反应诱导质粒p BR322 DNA损伤的保护作用。结果表明芡实多糖的最佳提取条件为:料液比1∶20(g/m L)、p H3、纤维素酶用量为原料质量的2.0%、超声时间5min、提取时间3h、提取温度40℃,多糖得率为17.04%。芡实多糖清除DPPH·、羟基自由基的能力较好,IC50分别为1.78、6.96mg/m L,清除过氧化氢、超氧阴离子自由基的能力较弱,浓度为10mg/m L时,清除率分别为48.00%、20.32%。芡实多糖对抑制DNA损伤具有显著作用,在多糖水溶液质量浓度为0.08mg/m L时,具有最佳保护作用;在质量浓度大于1.0mg/m L时,对质粒DNA没有保护作用,甚至促进了DNA的损伤。综上所述,芡实多糖具有抗氧化及抑制DNA氧化损伤的能力。

荧光光谱法分析花茶对羟自由基(·OH)诱导的DNA氧化损伤的保护作用

采用荧光光谱扫描法定性定量研究了6种花茶对羟自由基(·OH)诱导的DNA氧化损伤的保护作用.结果表明:桂花茶、复合花茶、绿茶和芍药花茶的保护作用要优于红玫瑰花茶和金莲花茶,且各花茶的保护作用在0～1 mg/mL范围内均随质量浓度的增加而增强.该方法的稳定性和重复性都较好.

阿魏酸钠对大鼠脑缺血-再灌流后氧化性DNA损伤的保护作用

为研究脑缺血 再灌流后氧化性DNA损伤及阿魏酸钠的保护作用 ,采用线栓法制成大鼠大脑中动脉阻塞及再通模型。大脑中动脉再通时静脉注射阿魏酸钠 (15mg/kg) ,用免疫组织化学方法检测脑缺血 2h ,再灌流 4 8h后缺血再灌流组、阿魏酸钠组及对照组脑组织再灌流后氧化性DNA损伤产物 8 羟基脱氧鸟苷(8 OHdG)的表达。结果发现对照组脑区仅见少数散在微弱的 8 OHdG阳性表达 ;缺血再灌流组大脑中动脉阻塞侧额顶叶上部皮质和内侧尾壳核脑区有大量的 8 OHdG阳性表达 ,较对照组显著增加 (P <0 .0 1) ;阿魏酸钠组 8 OHdG阳性表达在脑区分布与缺血再灌流组相似 ,但较缺血再灌流组显著减少 (P <0 .0 1)。上述结果表明脑缺血—再灌流所致的氧化性DNA损伤主要存在于缺血半暗带 ,阿魏酸钠对氧化性DNA损伤具有保护作用。

茶籽多糖抗氧化性及其对DNA氧化损伤的保护作用

采用水提醇沉法从油茶籽中提取多糖,研究了茶籽多糖的单糖及氨基酸组成,并探究了茶籽多糖体外抗氧化性能及其对DNA氧化损伤的保护作用。结果显示,茶籽多糖主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖3种单糖组成;并且含有谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸等17种氨基酸。抗氧化实验表明,茶籽多糖对羟基自由基、过氧化氢、DPPH自由基具有一定的清除能力,其IC50值分别为5.47、4.03、0.54 mg/m L。荧光光度法、紫外分光光度法的研究,表明了茶籽多糖对·OH和H_2O_2引起的DNA氧化损伤具有不同程度的保护作用。

壮阳填精中药联合左旋肉碱治疗特发性弱精子症疗效及对精液质量、DNA氧化损伤指标的影响

目的观察壮阳填精中药联合左旋肉碱治疗特发性弱精子症疗效及对精液质量、DNA氧化损伤指标的影响。方法将120例特发性弱精子症患者随机分为2组,对照组60例给予左旋肉碱治疗,观察组60例在此基础上加用壮阳填精中药治疗,观察2组治疗前后中医证候积分、精液量、精子密度、精子活动率、精子直线运动速度、a+b级精子比例、精浆活性氧(ROS)及精子DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)水平变化情况,统计2组近期疗效和不良反应发生情况。结果 2组治疗后精子活力低下、腰膝酸软、性欲减退、畏寒肢冷、舌质淡苔白及脉沉或细积分均显著低于治疗前(P均<0.05),且观察组治疗后各项积分改善情况均显著优于对照组(P均<0.05);2组治疗后精液量、精子密度、精子活动率、精子直线运动速度、a+b级精子比例均显著提高(P均<0.05),ROS和8-OHd G水平均显著降低(P均<0.05),且观察组治疗后各项指标改善情况均显著优于对照组(P均<0.05);观察组近期治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论壮阳填精中药联合左旋肉碱治疗特发性弱精子症可有效减轻临床症状体征,增加精液量,提高精子活力,下调ROS和8-OHd G水平,并未加重药物不良反应。

辐射诱发细胞内活性氧增高与DNA氧化损伤研究

用60 Coγ射线照射人支气管上皮细胞 (BEP2D)。细胞内过氧化氢 (H2 O2 )和超氧阴离子(O2 · - )分别用分子探针 2’ ,7’ -二氯荧光黄双乙酸盐 (DCFH -DA)和氢化乙锭 (HE)进行标记 ,并通过流式细胞仪测定荧光产物 2’ ,7’ -二氯荧光黄 (DCF)和溴乙锭 (EB)荧光强度进行相对定量分析。DNA氧化损伤产物 8-羟基脱氧鸟嘌呤 (OH8dG)含量用高压液相色谱结合电化学方法 (HPLC-ECD)测定。结果表明 ,60Coγ射线诱发BEP2D细胞内活性氧 (ROS)水平和OH8dG含量均显著增高 ,并有良好的剂量效应关系。进一步分析显示 ,60 Coγ射线照射诱发BEP2D细胞内ROS增高与DNA氧化损伤产物OH8dG含量呈明显正相关 。

对PTEN缺失小鼠成纤维细胞中DNA氧化损伤的研究

背景与目的:研究PTEN缺失细胞中活性氧(ROS)水平、DNA氧化损伤和抗氧化能力的变化。材料与方法:运用化学/荧光发光分析、免疫细胞化学、中性单细胞凝胶电泳技术,分别比较Pten+/+MEFs与Pten-/-MEFs细胞中ROS、8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)水平、DNA双链断裂(DSBs)以及抗氧化能力的差异。结果:Pten-/-MEFs细胞中ROS、8-OH-dG水平明显增高,DSBs增加,抗氧化能力减弱。结论:PTEN可能通过调控细胞内ROS水平拮抗DNA氧化损伤。

α-硫辛酸对H_2O_2诱导的细胞活性氧水平及DNA氧化损伤的影响

[目的]探讨a-硫辛酸(a-lipoic acid,LA)对外源性促氧化剂H2O2诱导中国仓鼠肺细胞(Chinese hamster lung cells,CHL)的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平以及DNA氧化损伤的影响。[方法]①胞质内活性氧检测:用H2O2作外源性促氧化剂诱导细胞活性氧升高,以2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorofluorescin- diacetate,DCFH-DA)作为荧光信号标记物捕获胞质内活性氧,设置两种反应体系:体系Ⅰ为H2O2+LA,作用20min;体系Ⅱ为Fe2++LA,分别作用2、4、8h;借助流式细胞仪检测荧光信号强度。②单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis, SCGE):用H2O2染毒细胞,诱发DNA氧化损伤,同时在反应体系中加入不同浓度LA反应2h,单细胞凝胶电泳分析DNA氧化损伤情况。[结果]ROS:①反应体系Ⅰ:H2O2引发细胞内活性氧骤升,但LA使活性氧水平剂量依赖性降低。②反应体系Ⅱ:Fe2+诱导胞质内活性氧升高,LA能抑制活性氧,降低荧光信号强度。100μmol／L Fe2+诱导细胞活性氧升高,并随时间增加而增强;LA能降低并持续抑制100pmol／I．Fe2-’诱导的活性氧升高,但未表现出明显的浓度依赖性。SCGE: H2O2造成细胞DNA断裂损伤,彗星率、彗星尾长、尾部DNA含量、olive尾矩等指标值均升高;加入LA后使上述各指标值剂量依赖性下降。[结论]LA能清除活性氧,抑制Fe2+诱导的活性氧升高,表现出剂量-反应关系和时间-效应关系;可能的机制为直接清除活性氧、阻断Fe2+介导的Fenton反应。LA发挥抗氧化作用,剂量依赖性降低H2O2诱导的DNA氧化损伤。

肉类烧烤等烹调师DNA氧化损伤监测研究

目的 研究不同种类烹调操作厨师外周血淋巴细胞DNA氧化损伤的作用。 方法 采用高效液相色谱系统结合电化学测定分析法对不同种类烹调操作厨师外周血淋巴细胞DNA中 8-OHdG的含量进行分析。 结果 ①外周血淋巴细胞DNA中的 8-OHdG水平显示 ,肉类烧烤师和煎炸烹调师分别为 ( 2 3 7± 10 3 )和 ( 19 2± 8 5 ) ,明显高于其他粤菜师的 ( 12 6± 5 2 ) (P <0 0 5 ) ;而其他粤菜师与一般服务员的 ( 11 5± 3 6)无显著差异 (P >0 0 5 ) ;②肉类烧烤师外周血淋巴细胞DNA中的 8-OHdG水平与其工龄有关 :③同岗位厨师DNA氧化损伤的效应个体差异较大。 结论 肉类烧烤师和煎炸烹调师的DNA氧化损伤水平高于一般人群 。

淋巴细胞内DNA氧化损伤与Alzheimer病的关系

目的 评价淋巴细胞内 DNA氧化损伤与 Alzheimer病 (AD)的关系。方法 应用高效液相色谱法(HPL C)对 AD患者和健康老年人的淋巴细胞内的 8-羟基脱氧鸟苷 (8-OH-d G)基础含量进行了测定 ,并对部分受试者氧化应激反应前后的 8-OH-d G进行了对照研究。结果 AD患者淋巴细胞内 8-OH-d G的平均基础含量较对照组显著增高 (86.4± 12 .9fm ol/μg DNA / 58.7± 10 .2 fmol/μg DNA,P<0 .0 1) ,急性氧化应激反应后淋巴细胞内的 8-OH-d G含量的改变在两组间无显著差异。结论 AD不仅在脑内而且在外周的细胞 ,均可受氧化应激的影响 ;氧化应激可能参与了

过氧化氢诱导肠上皮干细胞DNA氧化损伤模型的建立

目的：探索建立过氧化氢诱导肠上皮细胞DNA氧化损伤模型，以便在体外进一步研究DNA氧化损伤在大肠癌发生发展中的作用。方法：过氧化氢以RPM11640培养基稀释成100、50、10、5、μmol／L5个浓度，以RPMI1640培养荆作空白对照。作用人胎肠上皮干细胞不同时间（10min、30min、1h、1．5h、12h、24h）后，以MTT法检测细胞生存状况，以免疫组织化学方法检测DNA特异性氧化损伤产物8-羟-2-脱氧鸟苷（8-OhdG），用SPSS10．0软件以线性回归方法检验肠上皮干细胞在不同时间的生存率变化趋势。结果：MTT活性检测结果表明，在10～30min时，各浓度过氧化氢作用后的细胞活性较高，为60％～80％，但随时间推移，细胞活性下降，至24h，降至30％左右，时间趋势检验表明，除100、50μmol／L过氧化氢组和空白对照组外，其余各组的生存率随过氧化氢作用时间的延长，生存率下降，时间趋势差异具统计学意义。过氧化氢作用时间在10～30min内，100、50μmol／L组的细胞活性明显低于1～10μmol／L组20％左右，但在1．0h以上各组，虽然过氧化氢浓度不同，但在同一作用时间内细胞活性无明显差别。过氧化氢处理肠上皮细胞15min后进行8-OhdG免疫组织化学检测，结果除对照组阴性外，其余各组肠上皮细胞在不同浓度过氧化氢作用后的胞核及胞浆染色均呈棕褐色，为阳性。结论：过氧化氢能诱导肠上皮细胞发生DNA氧化损伤，肠上皮细胞DNA氧化损伤模型的条件以1～10μmol／L过氧化氢作用10～30min为宜。

吸烟诱发人血淋巴细胞DNA氧化损伤的研究

目的 :研究吸烟对人血淋巴细胞DNA氧化损伤的作用。方法 :采用高效液相色谱系统结合电化学测定分析法对吸烟和不吸烟的男性健康人外周血淋巴细胞DNA中氧化损伤的生物标志物— 8 羟基 2 脱氧鸟苷 (8 OHdG)的含量进行分析。 结果 :①吸烟者比不吸烟者淋巴细胞DNA中的 8 OHdG显著增高 (P <0 .0 5 ) ,且 8 OHdG的含量与每天吸烟支数呈正相关 ;②吸烟对DNA氧化损伤的效应个体差异较大 ,本测定方法可用于对吸烟高敏感人群的筛选。 结论