RP-HPLC法同时测定血浆中硝苯地平及其代谢产物氧化硝苯地平的浓度

目的建立测定硝苯地平(抗冠心病)及其代谢产物氧化硝苯地平的血药浓度的反相高效液相色谱法。方法色谱柱为Diamosil C18(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-水(62∶38)为流动相,检测波长为237nm,流量为1.0mL·min-1,内标为地西泮。结果硝苯地平和氧化硝苯地平的线性范围分别为2.04～204.00ng·mL-1(γ=0.9957)和2.52～252.00ng·mL-1(γ=0.9954);硝苯地平的提取回收率为(85.29±4.10)%～(90.60±9.36)%;批内、批间精密度分别为1.91%～8.43%和6.48%～9.90%。氧化硝苯地平的提取回收率为(81.90±6.34)%～(88.26±4.89)%,批内、批间精密度分别为6.22%～8.95%和7.92%～9.28%。结论本法快速、准确,重现性好,可同时测定血浆硝苯地平及其代谢产物氧化硝苯地平的浓度。

大鼠血浆中硝苯地平及氧化硝苯地平浓度的LC-MS测定方法

目的建立测定大鼠血浆中硝苯地平及其代谢产物氧化硝苯地平的血药浓度的LC-MS方法。方法以尼群地平为内标,血浆样品经过乙酸乙酯-正己烷(3∶1)液液萃取后,经LC-MS法测定血药浓度。色谱柱为Kinetex C18(50 mm×2.1 mm,2.6μm),柱温40℃,通过纯水与甲醇梯度洗脱,流速0.6 mL/min,进样量1μL。采用正离子扫描模式,定量离子对为m/z 369.1→224.0(硝苯地平)、m/z 345.1→284.3(氧化硝苯地平)和m/z 361.1→67.0(尼群地平)。6只SD大鼠,灌胃给予硝苯地平,于给药后不同时间点眼眶取血,测定各时间点硝苯地平及氧化硝苯地平的血药浓度,用bapp 2.0计算药代动力学参数,以SPSS软件进行统计分析。结果硝苯地平与氧化硝苯地平分别在8.25 ng/mL~5.27μg/mL、6.67 pg/mL~66.67 ng/mL范围内线性关系良好(R^(2)>0.99),批间与批内精密度符合相关规定(RSD<15%),提取回收率均大于90%。方法符合生物分析方法学验证指南的相关要求。结论本实验建立的测定大鼠血浆中硝苯地平及其代谢物氧化硝苯地平血药浓度的LC-MS法简便、快捷、准确,可用于大鼠硝苯地平及代谢物氧化硝苯地平的药动学及有关药物相互作用研究。

人血浆中硝苯地平代谢产物氧化硝苯地平血药浓度的测定

目的:建立人血浆中硝苯地平代谢产物氧化硝苯地平血药浓度的高效液相色谱测定法。方法:以地西泮为内标,采用色谱柱为PhenomenexΜP-ODS C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为30℃,流动相为甲醇-水(65∶35),流速为1.0 mL/min,进样量为20μL,紫外检测波长为245 nm;测定人血浆中硝苯地平代谢产物氧化硝苯地平血药浓度。结果:硝苯地平及氧化硝苯地浓度在2.0~200μg/mL范围内与其峰面积响应值(A)呈良好线性关系,分别得回归方程A_(硝苯地平)=267.34ρ+941.4(r^2=0.999 4),A_(氧化硝苯地)=5614.1ρ-314.1(r^2=0.999 6),该方法测得硝苯地平及氧化硝苯地平的最低定量下限为2.0μg/mL。结论:本法快速、准确,重现性好,符合方法学考察的要求,适用于人血浆中硝苯地平代谢产物氧化硝苯地平的血药浓度测定。

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中硝苯地平及其代谢物氧化硝苯地平的浓度

目的建立液质联用(LC-MS/MS)法测定大鼠血浆中硝苯地平及其代谢物氧化硝苯地平的浓度。方法大鼠血浆样品用乙腈沉淀蛋白,内标地西泮,色谱柱为Shim-pack VP-ODS C18柱(2.0 mm×150 mm,5μm),柱温40℃,以流动相为0.1%甲酸-水及乙腈进行梯度洗脱,流速为0.35 m L·min^(-1)。质谱采用电喷雾离子源,正离子检测方式,多反应监测扫描方式进行监测,用于定量分析的离子对为m/z 347.2/315.3(硝苯地平)和m/z 345.1/268.1(氧化硝苯地平)与m/z 285.3/154.2(内标地西泮)。结果硝苯地平标准曲线方程为y=3.07×10^(-2)x+8.42×10^(-2)(r=0.998 9),在2~1000 ng·m L^(-1)内线性良好,定量下限为2 ng·m L^(-1)。氧化硝苯地平标准曲线方程为y=4.53×10-2x+2.28×10-2(r=0.996 6),在2~200 ng·m L^(-1)内线性良好,定量下限为2 ng·m L^(-1)。日内与日间精密度均小于15%,提取回收率>90%。结论该方法快速、灵敏、准确,可同时测定血浆中硝苯地平及其代谢物氧化硝苯地平的浓度。

硝苯地平探针高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体CYP3A酶活性

以硝苯地平为探针药物,研究建立一种大鼠肝微粒体CYP3A酶活性定量测定的高效液相色谱方法,并优化色谱条件和肝微粒体样品预处理方法.在测定条件下,硝苯地平经CYP3A酶代谢转化为氧化硝苯地平,其色谱保留时间7.09min,无内源性物质干扰.方法的线性检测范围1.0～40.0μmol/L,定量下限1.0μmol/L,回收率94.03%～98.88%,日内、日间相对标准偏差均小于7.3%.方法学验证结果表明,该方法快速、灵敏、准确,具有良好的专属性、精密度和稳定性,适于生物样品中氧化硝苯地平的定量测定,可用于CYP3A酶活性评价及酶动力学研究.

黄芩苷对大鼠体内硝苯地平的药动学的影响

目的研究黄芩苷对大鼠体内硝苯地平药动学以及大鼠肝微粒体CYP3A活性的影响。方法雄性Wistar大鼠分别ig 0.2、0.6 g/kg黄芩苷和硝苯地平10 mg/kg,采用LC-MS法测定血浆中硝苯地平的质量浓度,比较药动学参数。黄芩苷和硝苯地平经大鼠肝微粒体共孵育后,LC-MS法测定孵育液中氧化硝苯地平的质量浓度,比较CYP3A活性。结果 ig 0.6、0.2 g/kg黄芩苷后,硝苯地平质量浓度–时间曲线下面积(AUC0–t)均显著增大,表现为硝苯地平的生物利用度升高。黄芩苷0.6 g/kg组硝苯地平的达峰浓度(Cmax)显著升高、药物清除率(CLz)和表观分布容积(Vz)显著降低。黄芩苷0.2 g/kg组硝苯地平的上述药动学参数无显著变化。30、90μg/m L黄芩苷可降低大鼠肝微粒体孵育体系中氧化硝苯地平的生成量,抑制大鼠肝微粒体CYP3A活性。结论黄芩苷可改变大鼠体内硝苯地平药动学特征,提高生物利用度,这与黄芩苷对CYP3A活性的抑制作用有关。