烟草氧化胁迫相关基因NtOSA1的克隆表达及亚细胞定位分析

植物类蛋白激酶Abc1家族(activity of bc1complex)在植物生长发育及响应非生物胁迫中起着重要的作用。该研究通过将拟南芥AtOSA1蛋白氨基酸序列与烟草转录组数据进行比对,利用巢式PCR技术克隆得到1个烟草氧化胁迫相关Abc1家族基因NtOSA1,NtOSA1与拟南芥AtOSA1基因具有72.89%的一致性。NtOSA1基因开放阅读框长度为2 283bp,编码760个氨基酸,含有典型的ABC1结构域、一个激酶结构域、叶绿体定位信号肽和两个跨膜结构域。采用实时荧光定量PCR技术,对NtOSA1基因在烟草不同组织以及氧化胁迫、盐胁迫等处理下的表达分析表明:NtOSA1基因的表达具有组织特异性,主要在叶片中表达;NtOSA1基因在H2O2和NaCl处理后表达量上升,均在处理后6h达到最大值,分别为处理前的1.95和2.69倍。亚细胞定位结果表明,NtOSA1蛋白定位在细胞叶绿体上,与预测结果一致。研究表明,NtOSA1基因参与了烟草抗氧化胁迫和盐胁迫的响应。

茶多酚诱导铜绿假单胞菌交叉耐受性研究

检测了亚致死浓度的茶多酚(Tea Polyphenols,TP)处理对铜绿假单胞菌交叉耐受性的诱导作用。铜绿假单胞菌暴露于1 mg·m L^(-1)茶多酚1 h后能够显著增强细菌对多种环境条件的耐受性,包括氧化剂(1 mmol·L^(-1)H_2O_2)、高温(47℃),及酸性溶液[磷酸缓冲液(pH4.0)、含有有机酸(60 mmol·L^(-1)柠檬酸、60 mmol·L^(-1)乳酸、80 mmol·L^(-1)乙酸)的磷酸缓冲液(pH4.0)]。另外,通过荧光定量RT-PCR技术分析了茶多酚诱导下铜绿假单胞菌胁迫相关基因的表达情况。研究发现,茶多酚能够显著诱导铜绿假单胞菌氧化胁迫相关基因kat B、sod M、ohr、lex A和rec N的表达,以及热激蛋白基因dnaK、groEL、htpG、grpE和groES的表达。这些胁迫相关基因的表达很可能在细菌交叉耐受性形成过程中起到重要作用。以上研究结果表明,虽然茶多酚作为天然食品添加剂具有较高的安全性,但在实际应用过程中应充分考虑茶多酚诱导细菌交叉耐受性所导致的潜在风险,以优化食品保鲜策略。

地塞米松对秀丽隐杆线虫的毒性效应及其机制

目的探讨地塞米松对秀丽隐杆线虫的毒性效应及其机制。方法将秀丽隐杆线虫分别暴露在终浓度为0、500、1000、1500、2000 mg/L地塞米松溶液(空白组、D1组、D2组、D3组、D4组)中48 h后,观察秀丽隐杆线虫的生殖能力、运动能力;吖啶橙AO染色法观察细胞凋亡程度;实时荧光定量PCR检测部分氧化胁迫相关基因[超氧化物歧化酶基因(Sod-1)、类P-53蛋白基因(Cep-1)、细胞色素P450家族蛋白基因(Cyp-35a2)、谷胱甘肽转移酶基因(Gst-1)]。结果与空白组相比,D2、D3、D4组线虫产卵数下降(P均<0.01);D4组线虫头部摆动、身体弯曲能力、咽泵频率降低(P均<0.01)。秀丽隐杆线虫的细胞凋亡程度随着地塞米松浓度的升高而加重(P均<0.05)。与空白组比较,D1、D2、D3、D4组线虫体内Sod-1基因相对表达量升高(P均<0.01);与空白组比较,D1、D2组线虫体内Cep-1基因相对表达量升高,D3、D4组又降低(P均<0.05);与空白组比较,D1组Cyp-35a2基因相对表达量降低,D2、D3、D4组升高但无统计学意义;与空白组比较,D1、D2、D3、D4组Gst-1的相对表达量均降低(P均<0.01)。结论1500 mg/L浓度及以上的地塞米松对秀丽隐杆线虫具有明显的生殖、神经毒性,可能与其引起氧化应激反应和促使细胞凋亡有关。