高效液相色谱法在建昌帮酒制白芍无糖颗粒药用组分芍药苷、氧化芍药苷测定中的应用研究

目的:在高效液相色谱法基础上,研究建昌帮酒制无糖白芍和建昌帮酒制无糖白芍颗粒中芍药苷、氧化芍药苷组分的变化。方法:通过建昌帮炮制法炮制建昌帮酒制无糖白芍饮片及其颗粒,通过高效液相色谱法测定建昌帮炮制法炮制建昌帮酒制无糖白芍饮片及其颗粒中芍药苷和氧化芍药苷组分含量,对比组分含量变化规律。结果:建昌帮酒制无糖白芍芍药苷、氧化芍药苷组分含量分别为22.57mg/g~35.70mg/g、0.186mg/g~0.312mg/g,建昌帮酒制白芍无糖颗粒芍药苷、氧化芍药苷组分含量分别为22.16mg/g~30.54mg/g、0.157mg/g~0.235mg/g,表明建昌帮酒制无糖白芍在进行制粒加工后其药用组分芍药苷、氧化芍药苷含量变化不大。结论:将建昌帮酒制无糖白芍炮制加工为颗粒药剂,其药用组分变化量不大,临床药用受众范围更大,服用方式更高效便捷,此炮制加工工艺可在临床进行深入应用与拓展。

氧化芍药苷对泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的分析氧化芍药苷对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法 THP-1细胞加入160 nmol/L佛波酯(PMA)24 h,再加入50μg/ml乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)建立泡沫细胞模型,CCK-8法测定氧化芍药苷的细胞毒性,同位素标记法测定各处理组泡沫细胞胆固醇流出率。共聚焦显微镜观察泡沫细胞内脂肪分化相关蛋白(ADFP)表达变化,Western blot分析泡沫细胞中ADFP、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白表达变化。结果成功建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型。氧化芍药苷毒性分析表明,质量浓度在200.0μg/ml以下无细胞毒性。150.0μg/ml与200.0μg/ml氧化芍药苷处理泡沫细胞,胆固醇流出率分别为(10.317±0.508)%与(11.265±0.713)%,与apo A-1组相比,差异有统计学意义(P<0.05),均高于apo A-1组。氧化芍药苷处理的泡沫细胞内ADFP荧光明显减弱。Western blot分析泡沫细胞ADFP表达量降低28%。氧化芍药苷处理组PPARα表达量增加51%,ABCA1表达量增加45%。结论实验表明氧化芍药苷可通过上调PPARα增加ABCA1表达,进而促进泡沫细胞胆固醇流出。

HPLC法同时测定牡丹皮中芍药苷和氧化芍药苷含量

目的:建立同时测定牡丹皮中芍药苷和氧化芍药苷的RP-HPLC方法。方法:色谱条件为岛津-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:乙腈-0.05M KH2PO4(17∶83),流速1.0mL·min^(-1),检测波长243nm,柱温:25℃,进样体积20μL。结果:芍药苷和氧化芍药苷分别在9.52~95.20μg·mL^(-1)(r=0.999 3)和2.58~51.60μg·mL^(-1)(r=0.999 9)浓度范围内呈现良好的线性关系,芍药苷的平均回收率为97.30%(RSD=0.80%),氧化芍药苷的平均回收率为99.50%(RSD=0.88%)。结论:该方法准确可靠,重现性好,可用于该药材及其制剂原料中芍药苷和氧化芍药苷的定量分析。

赤芍中氧化芍药苷和芍药苷的含量测定

目的:建立同时测定赤芍中氧化芍药苷和芍药苷含量的HPLC方法。方法:采用反向高效液相色谱法,使用AglientZorbaxSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈—水,流速1mL/min,检测波长254nm,柱温35℃,进样量20μL。结果:氧化芍药苷回归方程为Y=41607X-164942,R=0.9994,线性范围为0.02525～0.20200mg/mL;芍药苷回归方程为Y=3641.6X+174622,R=0.9995,线性范围为0.2525～2.0200mg/mL。结论:建立了一个测定赤芍中氧化芍药苷和芍药苷含量的方法。

氧化芍药苷在正常与抑郁大鼠体内代谢产物的比较研究

目的研究氧化芍药苷在正常和抑郁大鼠血浆、尿液、粪便中代谢产物的差异,并推测其主要的代谢途径。方法选取Wistar大鼠,复制慢性应激抑郁大鼠,分别连续ig给予正常和抑郁大鼠氧化芍药苷水溶液3 d,收集大鼠血清、尿液和粪便;利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术结合UNIFI分析平台鉴定氧化芍药苷在正常和抑郁模型大鼠体内的原型成分及代谢产物。结果在正常和抑郁大鼠血浆中均检测到氧化芍药苷原型成分,且在抑郁大鼠血浆中的相对含量是正常大鼠血浆的10倍;在抑郁大鼠血浆、尿液和粪便中分别鉴定出4、13、2个代谢产物,在正常大鼠血浆、尿液和粪便中分别鉴定出1、12、3个代谢产物,其中11个共有代谢产物,主要发生的代谢途径为氧化、去饱和等I相代谢反应,甲基化、葡萄糖醛酸化、乙酰化等II相代谢反应。结论氧化芍药苷ig给药后主要以原型成分进入体内,且抑郁大鼠血浆中原型成分的相对含量较正常大鼠高10倍;在抑郁和正常大鼠中的代谢产物有差异,其中葡萄糖醛酸化为正常大鼠体内特有的代谢途径,乙酰化为抑郁大鼠体内特有的代谢途径。推测氧化芍药苷可能是以原型成分为主发挥药效作用,通过尿液和粪便以原型或代谢产物排泄。

氧化芍药苷联合运动对抑郁症大鼠的抗抑郁作用及其机制

本研究旨在探讨芍药根中的主要活性成分氧化芍药苷联合运动对抑郁症大鼠的抗抑郁作用及其相关机制。采用慢性不可预测性应激(CUMS)诱导抑郁模型,通过行为学测试、海马组织学染色和分子生物学方法,评估了氧化芍药苷和运动对抑郁症大鼠行为学、海马组织形态、氧化应激指标、Fe^(2+)含量和GPX4蛋白表达的影响。结果显示,氧化芍药苷和运动均显著改善了抑郁症大鼠的行为学,减轻了海马组织损伤,并抑制了海马神经元凋亡。此外,氧化芍药苷联合运动降低了海马组织的氧化应激反应和Fe^(2+)含量,并显著上调了GPX4蛋白的表达水平。因此,本研究提供了证据支持氧化芍药苷联合运动在抗抑郁疗法中的潜力,并揭示了其通过抑制氧化应激和铁死亡途径的作用机制。

HPLC法测定养阴降压胶囊中马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷

目的建立HPLC波长切换法同时测定养阴降压胶囊中马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷。方法采用HPLC法,Venusil MP C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：[甲醇–乙腈（2∶1）]-0.02%磷酸溶液,梯度洗脱;0～16 min在390 nm波长下检测马兜铃酸Ⅰ,16～40 min时在230 nm波长下检测氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷;体积流量1.0 m L/min;柱温35℃;进样量10μL。结果马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷质量浓度分别在4.72～94.40（r=0.999 8）、3.95～79.00（r=0.999 9）、6.39～127.80（r=0.999 9）、19.81～396.20μg/m L（r=0.999 1）与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为97.47%、99.09%、100.09%、98.88%,RSD值分别为1.19%、1.60%、0.84%、0.65%。结论所建立的方法简便,重复性好,为有效控制养阴降压胶囊的质量提供了依据。

高效液相色谱-一测多评法测定肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b_(1)、d

目的建立高效液相色谱-一测多评法(HPLC-QAMS)测定肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b_(1)、d的方法。方法采用Agilent SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为306 nm(0~17 min,测定虎杖苷和白藜芦醇)、230 nm(17~28 min,测定氧化芍药苷和芍药苷)、210 nm(28~55 min,测定柴胡皂苷a、b_(1)、d);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL。以芍药苷为内参物,建立其他6个成分的相对校正因子(RCF)计算。结果虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b_(1)、d分别在6.37~159.25、4.91~122.75,1.88~47.00、7.99~199.75、0.56~14.00、2.19~54.75、2.87~71.75μg/mL线性关系良好,平均回收率分别为100.08%、98.95%、97.87%、99.52%、96.97%、98.88%、99.07%,RSD值分别为0.72%、1.1%、1.4%、0.99%、1.2%、1.2%、0.84%。肝爽颗粒中各成分的一测多评法所得结果与外标法结果无明显差异。结论所建立的HPLC-QAMS法可用于肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b_(1)、d的同时测定。

HPLC法测定益坤宁酊中梓醇、麦角甾苷、马替诺皂苷、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷和α-香附酮

目的建立HPLC波长切换法测定益坤宁酊中梓醇、麦角甾苷、马替诺皂苷、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷和α-香附酮的方法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A:乙腈–甲醇(1∶3),流动相B:0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长210 nm(梓醇)、330 nm(麦角甾苷、马替诺皂苷)和230 nm(氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、α-香附酮);体积流量0.8 m L/min;柱温25℃;进样量10μL。结果梓醇、麦角甾苷、马替诺皂苷、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷和α-香附酮在2.66~66.50、1.59~39.75、0.76~19.00、1.38~34.50、7.02~175.50、9.91~247.75、1.19~29.75μg/m L线性关系良好。平均加样回收率分别为97.97%、98.31%、96.99%、97.78%、99.28%、100.03%、97.43%,RSD值分别为1.42%、0.92%、1.30%、1.13%、1.08%、0.65%、1.27%。结论本法操作便捷、数据准确、灵敏度高,重复性好,可为益坤宁酊的质量控制提供参考。

HPLC-CAD法测定小建中片中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、异甘草苷、桂皮酸、桂皮醛和甘草酸

目的 采用高效液相色谱–电喷雾检测器(HPLC-CAD)法同时测定小建中片中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、异甘草苷、桂皮酸、桂皮醛、甘草酸。方法 采用Agilent Zorbax Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:90%甲醇–10 mmol/L甲酸铵(甲酸调pH 3.5),梯度洗脱;体积流量:0.9 mL/min;柱温:30℃;进样量:20μL;CAD雾化器温度:35℃,采集频率为10 Hz,过滤常数为5.0。结果 氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、异甘草苷、桂皮酸、桂皮醛、甘草酸的线性范围分别为1.02~20.40、12.08~241.60、13.99~279.80、3.05~61.00、1.10~22.00、0.24~4.80、1.20~24.00、1.12~22.40μg/mL;平均加样回收率分别为99.4%、97.1%、98.2%、98.9%、99.3%、97.5%、99.1%、98.8%,RSD值分别为1.8%、0.9%、1.8%、2.0%、2.3%、1.6%、2.0%、1.6%。结论 该方法同时测定小建中片中8个活性成分,实现多指标成分质量控制,为小建中片的质量标准规范化研究提供参考。

HPLC法同时测定白芍总苷中4种单萜苷的含量

目的:建立同时测定白芍总苷中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,Shim-pack VP-ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.02%磷酸水(B),梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:230 nm。结果:4个成分在50 min内均达到基线分离,线性关系良好(r≥0.9993)。氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷的平均加样回收率为99.32%、98.83%、98.99%、98.61%;RSD分别为1.77%、2.27%、1.50%、1.96%。结论:该研究建立的方法全面、快速易行,可用于白芍总苷部位的质量控制。

白芍萜苷类成分的快速分离制备及结构鉴定

目的研究白芍中5种萜苷类成分的快速分离制备及结构鉴定。方法采用质谱引导自动纯化系统分离白芍中5种萜苷类成分,应用1H-NMR、13C-NMR、HR-MS波谱法进行结构鉴定;以Ultimate XB-C18柱(22 mm×250 mm,10μm)、乙腈(B)-0.1%甲酸水(A)为流动相,梯度洗脱,流速:20 m L/min,质谱检测用负离子下选择离子监测模式。结果从白芍中分离得到5个萜苷类化合物:氧化芍药苷、芍药苷亚硫酸酯、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷。结论用质谱引导分离纯化效率高,目标性强,可快速获得5个白芍单萜苷类化合物。

牡丹籽粕的化学成分研究

目的:考察牡丹Paeonia suffruticosa Andr籽粕的化学成分。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS等柱色谱进行分离,通过理化性质及波谱分析鉴定化合物的结构。结果:分离得到11个化合物,分别鉴定为苯甲酸(benzoic acid,1)、白芍苷R1(albiflorin R1,2)、6'-O-β-D-葡萄糖芍药内酯苷(6'-O-β-D-glucopyranosylalbiflorin,3)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid,4)、氧化芍药苷(oxy paeoniflorin,5)、咖啡酸(caffic acid,6),齐墩果酸(oleanolic acid,7)、芍药苷(paeoniflorin,8)、蔗糖(sucrose,9)、β-胡萝卜苷(β-daucosterol,10)、β-谷甾醇(β-sitosterol,11)。结论:11种化合物均为首次从牡丹籽粕中发现,其中化合物4,6为首次从该植物中的种子部位分离得到,化合物2是一种葡萄糖的2位与单萜苷元的8位以缩酮键相连的单萜苷类化合物,系该种中首次分离得到。

HPLC波长切换法测定主产区与道地产区牡丹皮中的4种成分

目的建立HPLC波长切换法,对主产区与道地产区牡丹皮中没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、丹皮酚的含有量进行测定。方法牡丹皮提取液的分析采用Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;甲醇（A）-0.05%磷酸水溶液（B）为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长为270 nm（0~15 min,没食子酸）、230 nm（15~40 min,氧化芍药苷和芍药苷）、274 nm（40~70 min,丹皮酚）。结果没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、丹皮酚分别在0.010~0.300μg（r=0.999 7）、0.149~4.460μg（r=0.999 9）、0.088~2.640μg（r=0.999 9）、0.246~7.380μg（r=0.999 9）范围内与峰面积均呈良好的线性关系,加样回收率（n=6）分别为99.3%、98.9%、97.6%、102.9%,RSD分别为0.7%、0.8%、1.1%、0.6%。结论两个产区牡丹皮的质量相当,在亳州（主产区）引种该药材可行。

HPLC波长切换法同时测定理气散结颗粒中4个成分的含量

目的建立同时测定理气散结颗粒中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷和α-香附酮的HPLC波长切换联合梯度洗脱法。方法采用Venusil MP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~15 min,12.0%A;15~31 min,12.0%A→26.0%A;31~39 min,26.0%A→40.0%A;39~45 min,40.0%A→12.0%A),流速0.9 mL/min,波长切换(0~31 min,在230 nm波长下检测氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷;31~45 min,在242 nm波长下检测α-香附酮),柱温30℃,进样量为20μL。结果氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷和α-香附酮4个成分的质量浓度分别在5.15~103.00μg/mL(r=0.999 6)、8.99~179.80μg/mL(r=0.999 5)、19.83~396.60μg/mL(r=0.999 9)、6.35~127.00μg/mL(r=0.999 3)呈良好线性关系;平均加样回收率及相应的RSD(n=6)分别为96.83%(0.93%)、97.85%(1.31%)、99.71%(0.80%)、98.77%(1.59%)。结论所建立的方法灵敏度高、快速、专属性好、准确度高,为理气散结颗粒的质量控制提供了依据。

HPLC法同时测定柔肝顺气丸中7种成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定柔肝顺气丸中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA和α-香附酮的含量。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,检测波长分别为230,280,242 nm,流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃。结果:7种成分,氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA和α-香附酮分别在0.99~19.80,4.67~93.40,7.03~140.60,1.36~27.20,10.69~213.80,1.77~35.40,1.09~21.80μg·ml-1范围内线性关系良好(r>0.999 0);平均加样回收率分别为97.12%,99.10%,100.01%,98.51%,100.04%,98.69%,97.88%,RSD分别为1.54%,0.86%,0.47%,1.28%,0.66%,1.04%,1.20%(n=9)。结论:该方法操作便捷、重复性好,可更加快速全面地对柔肝顺气丸进行质量分析和质量控制。

PSA正丁醇部位化学成分研究

目的对PSA提取物正丁醇萃取部位中的化学成分进行研究。方法利用色谱学和光谱学方法分离鉴定化合物。结果从PSA正丁醇部位中分离得到5个化合物,分别鉴定为没食子酸乙酯(ethylgallate,Ⅰ)、苯甲酸(benzoicacid,Ⅱ)、芍药苷(paeoniflorin,Ⅲ)、没食子酰基氧化芍药苷(galloyl-oxypaeoniflorin,Ⅳ)、芍药内酯苷(albiflorin,Ⅴ)。结论本研究阐明了PSA提取物正丁醇萃取部位中的主要化学成分。

HPLC法同时测定白芍4种化学成分的含量研究

目的:优化高效液相色谱(HPLC)法测定和比较白芍药材中4种有效成分的含量,制定更加完善的白芍药材质量控制标准。方法:采用HPLC法同时测定白芍药材中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷4种有效成分的含量。结果:氧化芍药苷具有良好的线性关系(r^2=0. 999 5),平均加样回收率为99. 66%,RSD为:0. 47%;芍药内酯苷具有良好的线性关系(r^2=0. 999 0),平均加样回收率为99. 99%,RSD为:0. 04%;芍药苷具有良好的线性关系(r^2=0. 999 3),平均加样回收率为100. 32%,RSD为:0. 62%;苯甲酰芍药苷具有良好的线性关系(r^2=0. 999 5),平均加样回收率为99. 98%,RSD为:0. 99%。结论:该方法重复性强、灵敏度高,对于进一步提高及完善白芍药材质量控制标准提供较全面的实验依据。

基于UPLC-Q-TOF-MS^(E)结合多元统计方法的不同产地白芍药材质量评价

目的分析不同产地白芍药材质量差异及特异性化学成分,为白芍的产地判别和质量评价提供依据。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MSE)对不同产地白芍样品全成分分析,应用主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)及聚类分析(cluster analysis,CA)对安徽亳州、四川中江、浙江磐安3个产地共15批次白芍药材进行多元统计分析,根据VIP值>1和t检验(P<0.05)筛选不同产地白芍药材中具有显著差异的化学成分。结果从不同产地白芍药材中共鉴定出44个化学成分,以单萜类、鞣质类、三萜类、黄酮类、挥发油类等成分为主,其中以单萜类成分含量最高。不同产地白芍的化学成分差异明显,共鉴定出16个差异化学成分,其中牡丹皮苷G为安徽亳州产地特有成分,1,2,3,6-四-O-没食子酰-β-D-葡萄糖为浙江磐安产地的特有成分,1-O-β-D-glucopyranosylpaeonisuffrone为四川中江产地特有成分;柠檬酸、1-没食子酸酰葡萄糖、去苯甲酰基芍药苷或异构体、没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、没食子酸甲酯、没食子酰芍药苷或异构体、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、白芍苷R1、牡丹皮苷B为3个产地共有成分,但含量呈现不同的变化规律。结论不同产地白芍质量差异明显,在共有成分基础上,安徽亳州白芍含有特异成分牡丹皮苷G,浙江磐安白芍含有特异成分1,2,3,6-四-O-没食子酰-β-D-葡萄糖,四川中江白芍的特有成分为1-O-β-D-glucopyranosylpaeonisuffrone,可作为产地鉴别的依据,共有成分及差异成分的含量可作为质量评价的依据。

HPLC法同时测定白芍中5种成分含量

目的建立HPLC法同时测定白芍中5种成分含量,提高并完善白芍质量标准。方法采用高效液相色谱法测定白芍中没食子酸、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、β-五没食子酰葡萄糖5种成分的含量,并进行方法学考察。色谱柱为Welch Ultimate~?XB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.05%甲酸为流动相,采用梯度洗脱,流速为1 mL/min,检测波长230 nm,柱温30℃,进样量5μL。结果没食子酸、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、β-五没食子酰葡萄糖分别在5.419～46.8、3.897～159.8、2.763～88.4、5.731～183.4、2.763～88.4μg/mL范围内呈良好的线性;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3.0%(n=6);加样回收率为99.03%～101.79%,RSD为1.21%～2.78%(n=6)。结论所建立的5种成分HPLC含量测定方法准确、可靠,可以为白芍整体质量控制评价体系的建立提供科学实验依据。