氧化苦参碱磷脂复合物的理化性质研究

目的考察氧化苦参碱与其磷脂复合物的理化性质变化。方法测定和比较氧化苦参碱和其磷脂复合物的X-射线衍射光谱、差示扫描光谱、红外光谱、水中的分散形态、粒度分布及油水分配系数。结果X-射线衍射分析显示,复合物中氧化苦参碱晶体衍射峰消失;差热扫描显示复合物的相变温度明显降低;红外光谱分析表明氧化苦参碱与磷脂未形成新的化合物或混合物,而是一个磷脂复合物;在水中复合物分散呈胶团状;电镜下可见其外观为球形,粒径比较均匀;与氧化苦参碱相比,复合物在正辛醇中溶解性有明显改善,而在水中溶解度有所降低;在不同pH水-正辛醇系统中,复合物的表观油-水分配系数与氧化苦参碱相比也有较大的差异。结论理化性质研究表明,氧化苦参碱与磷脂形成了复合物。

氧化苦参碱磷脂复合物对CCl4致大鼠慢性肝损伤的影响

目的:观察氧化苦参碱磷脂复合物对四氯化碳(CCl4)致慢性肝损伤大鼠肝功能的影响,并探讨其作用及机制。方法:将66只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、氧化苦参碱组(54 mg/kg)及氧化苦参碱磷脂复合物低、中、高剂量组(27,54,108 mg/kg),每组11只。除正常对照组外,其余各组大鼠采用10%CCl4橄榄油灌胃,每周2次,共8周,制备大鼠慢性肝损伤模型。期间记录摄食量和体质量。8周后,采血测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)的含量,计算肝脏指数,HE染色观察肝组织的病理变化。结果:与模型组比较,氧化苦参碱磷脂复合物低、中剂量组大鼠血清ALT、AST水平减低(P<0.05),TP升高(P<0.05),ALB含量显著升高(P<0.01);肝脏指数降低(P<0.05)。HE染色分析肝组织病理学变化结果表明,氧化苦参碱磷脂复合物低、中剂量能够有效改善肝组织损伤程度。结论:氧化苦参碱磷脂复合物对CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤具有显著保护作用,其作用机制可能与增强抗氧化活性有关。

氧化苦参碱磷脂复合物的制备、表征和体外抗乙肝病毒研究

目的制备氧化苦参碱磷脂复合物并对其进行表征,初步考察其体外抗乙肝病毒作用。方法以综合评分法为评价标准,通过正交试验优化氧化苦参碱磷脂复合物的制备工艺,并采用紫外分光光度法、X-射线衍射分析法和红外分光光度法对其进行表征,利用酶联免疫法考察其体外抗乙肝病毒作用。结果氧化苦参碱磷脂复合物的最优制备工艺为:药脂比1∶1、反应温度40℃,主药浓度为20 mg·mL-1。体外抗HBeAg试验结果表明,氧化苦参碱磷脂复合物中剂量对HBeAg有一定的抑制作用(P<0.05)。结论确定了氧化苦参碱磷脂复合物的制备工艺,证明氧化苦参碱与大豆磷脂形成了磷脂复合物。氧化苦参碱磷脂复合物对HBeAg有抑制作用。

氧化苦参碱磷脂复合物对四氯化碳致小鼠慢性肾损伤的保护作用

目的考察氧化苦参碱磷脂复合物对四氯化碳致慢性肾损伤小鼠的保护作用。方法采用0.5%CCl_4橄榄油溶液灌胃造模,小鼠分为空白对照组、CCl_4模型组、氧化苦参碱组(78 mg/kg)、氧化苦参碱磷脂复合物低剂量组(39 mg/kg)、氧化苦参碱磷脂复合物中剂量组(78 mg/kg)、氧化苦参碱磷脂复合物高剂量组(156 mg/kg)。期间记录摄食量和体重,8周后检测血清中尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)的含量。结果 CCl_4模型组BUN和SCr水平明显升高,氧化苦参碱各组BUN和SCr水平优于模型组。结论氧化苦参碱制成磷脂复合物后可以提高对小鼠肾损伤的保护治疗作用。

氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊的质量标准研究

目的：对氧化苦参碱磷脂复合物肠溶缓释胶囊进行质量标准研究。方法：采用薄层色谱法（TLC）对胶囊中氧化苦参碱进行定性分析；采用高效液相色谱法（HPLC）对氧化苦参碱进行含量测定，并测定胶囊的释放度。结果：TLC定性鉴别中，供试品与对照品分别在对应位置显相同的橙色斑点，阴性无干扰，专属性强。HPLC含量测定中，氧化苦参碱浓度1～200μg／mL，峰面积与进样量有良好的线性关系。通过释放度试验证明胶囊具有良好的缓释效果，且释放稳定。结论：所建立的定性、定量方法操作简单、重复性好、专属性强，由此制定的胶囊质量标准为该产品质量、药效保障提供了可靠的控制依据。

氧化苦参碱磷脂复合物固体脂质纳米粒冻干粉的制备与质量评价

目的:制备氧化苦参碱磷脂复合物固体脂质纳米粒(OMT-PC-SLN)冻干粉,并对其进行药剂学性质评价。方法:采用伪三元相图优选微乳处方;以包封率为指标,采用单因素试验优选OMT-PC-SLN冻干粉的处方工艺;利用透射电子显微镜(TEM)观察该制剂的外观形态,激光粒度仪测定粒径,并考察OMT-PC-SLN冻干粉的体外释药性能。结果:最佳处方工艺为大豆磷脂和15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯(Kolliphor HS 15)为乳化剂,乙醇为助乳化剂,乳化剂与助乳化剂的比例(Km)=3∶2,油相∶(乳化剂+助乳化剂)=1∶9,氧化苦参碱磷脂复合物-硬脂酸-大豆磷脂-Kolliphor HS 15-乙醇(30∶100∶180∶360∶360);含4%甘露醇的水50 m L为外水相,1 000 r·min-1冰浴搅拌固化1 h,于-20℃预冻24 h,取出,干燥24 h。OMT-PC-SLN冻干粉外观呈类球形,包封率(38. 09±1. 24)%,平均粒径785. 5 nm,多分散系数(PDI) 0. 456,Zeta电位-24. 82 m V;体外释放结果表明OMT-PC-SLN冻干粉2 h时累积释放率72. 63%,12 h累积释放率98. 42%,原料药在2 h的累积释放率98. 60%。结论:优选的OMT-PC-SLN冻干粉处方工艺稳定、重复性好;与原料药相比,OMT-PC-SLN冻干粉体外释放较慢,具有一定的缓释效果。

没食子酸-磷脂复合物的制备与表征及其对核桃油氧化稳定性的影响

没食子酸具有多种生物活性,但较差的脂溶性使其应用受到限制。该实验以没食子酸与大豆卵磷脂为原料,使用溶剂蒸发法制备没食子酸-磷脂复合物。使用单因素实验优化出没食子酸-磷脂复合物的最佳制备条件,使用紫外、红外光谱及差示量热扫描对制得复合物进行结构表征,验证其形成;并初步测定其油水分配系数与抗氧化性能。所得最佳制备条件为:以无水乙醇为溶剂,没食子酸质量浓度为1 mg/mL,没食子酸与大豆卵磷脂的投料摩尔比为1:4,45℃下恒温搅拌2 h。该条件下制备的复合物,复合率达94.65%,显著提高没食子酸的油水分配系数,其体外抗氧化活性与没食子酸无显著差异。对加入没食子酸-磷脂复合物的核桃油进行加速氧化实验,测定复合物对核桃油氧化稳定性的影响。结果表明没食子酸-磷脂复合物可有效抑制核桃油氧化,且12 d内抗氧化效果显著优于没食子酸(P<0.05)。该研究制备的没食子酸-磷脂复合物复合率高,脂溶性和抗氧化性良好,可有效提高核桃油的氧化稳定性。

外翻肠囊法研究氧化苦参碱磷脂复合物的肠吸收特性

目的通过对比研究氧化苦参碱及其磷脂复合物大鼠离体肠吸收情况,考察磷脂复合物对氧化苦参碱肠吸收的影响。方法采用大鼠离体外翻肠囊模型研究氧化苦参碱磷脂复合物的肠吸收特性。HPLC测定不同剂量的氧化苦参碱及氧化苦参碱磷脂复合物在大鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠内的累积吸收量。结果氧化苦参碱磷脂复合物在不同肠段的吸收较氧化苦参碱均有提高,低剂量组氧化苦参碱磷脂复合物在空肠、结肠处的吸收较氧化苦参碱有显著提高;中剂量组氧化苦参碱磷脂复合物在十二指肠、空肠、结肠处的累积吸收量较氧化苦参碱有显著提高;高剂量组氧化苦参碱磷脂复合物在空肠的吸收较氧化苦参碱有显著提高。结论与氧化苦参碱相比,磷脂复合物对氧化苦参碱在大鼠肠道的吸收有显著的促进作用。

氧化苦参碱磷脂复合物自乳化释药系统的研制

目的制备氧化苦参碱(OMT)磷脂复合物(PC)自乳化释药系统(OMT-PC-SEDDS),并对其进行质量评价及体外释放度考察。方法通过伪三元相图的绘制,以乳化区域面积为指标,筛选处方中乳化剂、助乳化剂种类及混合乳化剂比值(K_m),以溶解度大小考察油相种类,确定最佳处方;并对OMT-PC-SEDDS的外观、平均粒径、自乳化时间、体外释放特性及稳定性进行评价。结果 OMT-PC-SEDDS最佳处方为乳化剂Kolliphor HS 15与助乳化剂乙醇质量比为2∶1,中链甘油三酯(MCT)与Kolliphor HS 15和乙醇的总质量的质量比为2∶8。制备得到的OMT-PC-SEDDS外观呈澄明液体,稳定性良好,加水稀释后形成浅乳白色并带淡蓝色乳光的乳液,透射电子显微镜(TEM)观察呈类球形,分布均匀;平均粒径为(355.00±19.50)nm,Zeta电位为(-12.80±0.66)mV。在pH 6.8磷酸缓冲液中,OMT、OMT-PC和OMT-PC-SEDDS的体外释放在4 h分别达到93.84%、88.39%、88.61%。结论考察所得最佳处方制备的OMT-PC-SEDDS粒径适宜,稳定性良好。

没食子酸-卵磷脂复合物诱导氧化应激增强辐射对A549细胞增殖的抑制作用

目的:探讨没食子酸-卵磷脂复合物(GA-LC)对X射线照射所致肺癌A549细胞增殖的抑制作用,阐明其可能的作用机制。方法:A549细胞分为不同浓度(0、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30和0.35 g·L^(-1))GA-LC组,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性,并确定GA-LC的半抑制浓度(IC50)值。A549细胞分为对照组、GA-LC组、4 Gy X射线照射组和GA-LC+4 Gy X射线照射组,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)水平及细胞凋亡率,线粒体绿色荧光探针Mito-Tracker染色检测各组细胞中线粒体膜通透性。结果:与0 g·L^(-1)GA-LC组比较,0.15、0.20、0.25、0.30和0.35 g·L^(-1)GA-LC组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),GA-LC对A549细胞的IC50值为0.1711 g·L^(-1)。与对照组比较,GA-LC组、4 Gy X射线照射组和GA-LC+4 Gy X射线照射组细胞增殖活性和MMP水平明显降低(P<0.05或P<0.01),GA-LC组和GA-LC+4 Gy X射线照射组ROS水平和细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01);与GA-LC组比较,GA-LC+4 Gy X射线照射组细胞MMP水平明显降低(P<0.01),ROS水平和细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与4 Gy X射线照射组比较,GA-LC+4 Gy X射线照射组细胞增殖活性和MMP明显降低(P<0.05),ROS水平和细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01)。线粒体绿色荧光探针Mito-Tracker染色,线粒体荧光显微镜下可见绿色荧光,与对照组比较,GA-LC组、4 Gy X射线照射组和GA-LC+4 Gy X射线照射组细胞中绿色荧光强度增加,且GA-LC+4 Gy X射线照射组细胞中绿色荧光强度增加最明显,表明线粒体膜通透性增加。结论:GA-LC可以增强X射线照射对肺癌A549细胞增殖的抑制作用,其机制与诱导氧化应激进而促进线粒体通透性增加、MMP降低和诱导细胞凋亡有关。

金合欢素磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒制备及其体内药动学研究

目的制备金合欢素磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒,并考察其体内药动学。方法以大豆磷脂用量、水浴温度、搅拌时间为影响因素,复合率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化磷脂复合物处方,X射线粉末衍射进行晶型分析,测定油水分配系数。溶剂挥发法制备介孔二氧化硅纳米粒,测定体外释药、包封率、载药量、粒径、PDI、Zeta电位,在扫描电镜下观察微观结构。18只大鼠随机为3组,分别灌胃给予金合欢素、磷脂复合物、介孔二氧化硅纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(30 mg/kg),于0、0.17、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12 h采血,UPLC-MS/MS法测定金合欢素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为大豆磷脂用量140 mg,水浴温度46℃,搅拌时间4 h,复合率接近100%。原料药以无定形状态存在于磷脂复合物中,油水分配系数明显升高。介孔二氧化硅纳米粒呈球形,平均包封率为87.48%,载药量为5.67%,粒径为168.27 nm,PDI为0.073,Zeta电位为0.043 mV,240 min内累积释放度约为90%。与原料药、磷脂复合物比较,介孔二氧化硅纳米粒t_(max)缩短(P<0.01),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度增加至7.90倍。结论磷脂复合物介孔二氧化硅纳米粒可促进金合欢素口服吸收。

氧化苦参碱-甘珀酸钠复合物的制备及其药理活性初探

目的研究氧化苦参碱-甘珀酸钠复合物的制备方法及其药理活性。方法分别配制氧化苦参碱和甘珀酸钠溶液,将两种溶液按比例混合,分离提纯后得到复合物样品。采用紫外分光光度法确定形成常数,用X射线粉末衍射,红外光谱和核磁来表征该复合物。将制得的药物测其急性毒性,采用CCl4制备小鼠急性肝损伤模型,检测经不同比例氧化苦参碱-甘珀酸钠复合物干预后小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)。结果氧化苦参碱-甘珀酸钠可形成1∶1的复合物;1∶1、2∶1比例形成的复合物的急性毒性均比其前体药物甘珀酸钠、氧化苦参碱低;与CCl4模型组比较,经氧化苦参碱-甘珀酸钠1∶1、2∶1复合物处理的小鼠血清AST、ALT水平较低。结论氧化苦参碱与甘珀酸钠不同比例复合物的毒性均比其前体药物低;对小鼠急性CCl4肝损伤有保护作用。

槲皮素磷脂复合物固体分散体增强对氧化损伤小鼠视网膜的保护作用

目的：研究槲皮素磷脂复合物固体分散体对氧化损伤模型小鼠视网膜的保护作用。方法：采用溶剂挥发法制备槲皮素磷脂复合物固体分散体,测定槲皮素的溶解性、溶出度和大鼠口服的生物利用度;采用高脂饮食结合氢醌制作小鼠视网膜氧化损伤模型,25只C57BL/6小鼠随机分为年龄对照组、溶媒对照组、药物治疗组（包括槲皮素、磷脂复合物和固体分散体组,给药量均为槲皮素400 mg·kg（-1）·d（-1））,灌胃给药,1次/d,持续3个月,电镜观察小鼠视网膜并进行RPE下沉积物半定量评定及Bruch膜厚度测量。结果：槲皮素磷脂复合物固体分散体在水和氯仿中的溶解性显著好于原药和磷脂复合物（P〈0.01）;槲皮素、磷脂复合物和固体分散体的累计溶出率分别为：31.4%、46.1%和80.2%,槲皮素从固体分散体中的溶出速率和程度明显大于原药和磷脂复合物;槲皮素、磷脂复合物和固体分散体在大鼠体内的AUC_（0→∞）分别为5.461、8.074、12.015μg·h/m L,固体分散体中槲皮素的生物利用度显著高于原药（P〈0.01）和磷脂复合物（P〈0.05）;与溶媒对照组比较,槲皮素对氧化损伤模型小鼠RPE下沉积物及Bruch膜厚度没有明显影响,磷脂复合物、固体分散体可显著减少RPE下沉积物（P〈0.05、P〈0.01）,固体分散体作用优于磷脂复合物（P〈0.05）,磷脂复合物及其固体分散体均可减轻Bruch膜增厚（P〈0.05）,两者作用没有显著性差异。结论：固体分散技术能显著改善槲皮素的溶解性和溶出率,提高其生物利用度;槲皮素磷脂复合物固体分散体能增强对氧化损伤小鼠视网膜的保护作用。

槐花黄酮磷脂复合物制备及其对植物油氧化稳定性的影响

以槐花黄酮和大豆卵磷脂为原料制备黄酮磷脂复合物,以黄酮与磷脂的复合率为评价指标,通过单因素实验考察微波功率、反应时间、黄酮初始质量浓度和投料比(磷脂:槐花黄酮质量比)对复合率的影响,由正交试验得到最优条件。研究了黄酮磷脂复合物的理化性质、溶解性及对植物油氧化稳定性的影响。结果表明,黄酮磷脂复合物的最佳制备工艺为:以乙醇为反应溶剂,微波功率为200 W,反应时间为 40 min,黄酮质量浓度为 2 mg /mL,投料比为 2:1,黄酮磷脂复合物复合率为79.98%。红外光谱和紫外光谱分析表明,黄酮与磷脂未形成新的化合物而是通过分子间作用力形成的复合物。与黄酮相比,复合物在水和在正辛醇中溶解性都有明显改善。添加黄酮磷脂复合物可以延缓葡萄籽油和核桃油的氧化反应。槐花黄酮磷脂复合物对核桃油的抗油脂氧化效果更好。本实验为槐花黄酮的进一步资源化开发利用提供了一定的技术依据。

鞣花酸磷脂复合物制备及其对植物油抗氧化作用

以鞣花酸与磷脂的复合率为评价指标,以石榴皮鞣花酸和大豆卵磷脂为原料,采用超声-微波协同技术,通过正交实验得到制备鞣花酸磷脂复合物的最优条件,并研究了鞣花酸磷脂复合物的理化性质及其对植物油氧化稳定性的影响。结果表明,鞣花酸磷脂复合物的最佳制备工艺为:以乙醇为反应溶剂,鞣花酸质量浓度为3 mg/mL,投料比(磷脂∶石榴皮鞣花酸质量比)为3∶1,微波功率为300 W,反应时间为35 min,鞣花酸磷脂复合物复合率为91.80%。光谱分析表明,鞣花酸与磷脂未形成新的化合物而是通过分子间作用力形成的复合物。与鞣花酸相比,复合物在水和在正辛醇中溶解性均稍有改善。添加鞣花酸磷脂复合物可以延缓葡萄籽油和核桃油的氧化反应。石榴皮鞣花酸磷脂复合物对核桃油的抗油脂氧化效果更好。

基于Nrf2通道研究柚皮素磷脂复合物对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用

目的:研究柚皮素(Nar)及其磷脂复合物(NPC)对叔丁基氢过氧化物(t-BHP)诱导产生的氧化损伤人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)的保护作用及其作用机制。方法:根据文献最佳制作工艺制备NPC。将体外培养的ARPE-19细胞分为溶媒组(用DMSO培养)、模型组(用200μmol/L t-BHP干预)、Nrf2-siRNA组(针对Nrf2基因进行细胞转染)、柚皮素组(200μmol/L柚皮素培养基预处理后加入200μmol/L t-BHP)、NPC组(200μmol/L NPC培养基预处理后加入200μmol/L t-BHP)、Nrf2-siRNA+柚皮素组(200μmol/L柚皮素预处理后Nrf2基因干扰,再加入200μmol/L t-BHP)、Nrf2-siRNA+NPC组(200μmol/L NPC预处理后Nrf2基因干扰,再加入200μmol/L t-BHP)。检测各组细胞内活性氧、丙二醛、超氧化物歧化酶、总抗氧化能力水平,分别采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞内血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶-1(NQO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达水平。结果:NPC较柚皮素能明显降低ARPE-19细胞内丙二醛、活性氧的含量,提高细胞内超氧化物歧化酶、总抗氧化能力水平。柚皮素和NPC预保护ARPE-19细胞后,Nrf2、HO-1、NQO-1和GCL mRNA的相对表达量和蛋白表达水平均较模型组和Nrf2-siRNA组升高。柚皮素组与NPC组,Nrf2-siRNA+柚皮素组与Nrf2-siRNA+NPC组细胞内4种基因和蛋白相对表达水平均有差异。Nrf2-siRNA+柚皮素组与Nrf2-siRNA组Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达无显著差异。Nrf2-siRNA+NPC组与Nrf2-siRNA组4种蛋白表达均有差异,NPC作用明显强于柚皮素。结论:柚皮素磷脂复合物能明显提高细胞内抗氧化能力,降低氧化水平,其通过激活Nrf2/ARE抗氧化应激通路上调Nrf2及其下游抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶的表达对氧化损伤的ARPE-19细胞起到更好的保护作用。

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对小鼠巨噬细胞一氧化氮及活性氧生成的抑制作用

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对过氧化氢(H2O2)诱导小鼠巨噬细胞内一氧化氮(NO)及活性氧(ROS)生成的影响。方法健康6～8周龄昆明种小鼠,腹腔提取巨噬细胞,培养成活后调细胞水平至2×108L-1,空白对照组加入等量的9g/L盐水,H2O2组加入H2O2,使其终质量浓度为1mmol/L刺激细胞30min,SPC干预组加入不同水平SPC干预细胞2h后加入终质量浓度为1mmol/LH2O2刺激30min。免疫细胞化学法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,Griess法测定上清液NO的生成量,荧光探针DCFH-DA法测定巨噬细胞内ROS生成。结果H2O2组上清液NO2-水平(相当于NO累积生成量)显著高于对照组(P<0.01),不同水平SPC干预组NO2-水平降低,即NO表达减少,且呈质量浓度依赖性降低(P<0.05)。各组细胞质内iNOS表达同上清液NO的生成量呈现相应的变化趋势。H2O2组小鼠巨噬细胞内ROS显著升高,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),不同水平SPC预先干预2h后,ROS生成量呈质量浓度依赖性降低(P<0.01)。结论SPC可能是通过抑制iNOS表达来抑制H2O2诱导的小鼠巨噬细胞内NO的生成,另外SPC也可抑制小鼠巨噬细胞内ROS生成,从而减轻组织细胞的氧化损伤。

柚皮素磷脂复合物对氧化损伤的ARPE-19细胞的保护作用

目的:研究ARPE-19细胞氧化损伤模型及柚皮素磷脂复合物(NPC)对氧化损伤的ARPE-19细胞的保护作用。方法:根据文献最佳制作工艺制备NPC,测定NPC在水中的溶解度。根据不同浓度的叔丁基氢过氧化物(T-BHP)对ARPE-19细胞存活率的影响选择最佳的氧化损伤模型。将ARPE-19细胞分为溶媒组、模型组、柚皮素低剂量组、柚皮素中剂量组、柚皮素组高剂量组、NPC低剂量组、NPC中剂量组、NPC高剂量组。溶媒组用二甲基亚砜(DMSO)培养;其余各组用200μmol/L的T-BHP干预;柚皮素低、中、高剂量组分别用100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的柚皮素干预;NPC低、中、高剂量组分别用100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的NPC干预。MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:与柚皮素比较,柚皮素磷脂混合物、NPC在水中的溶解度均增大(P<0.01);与柚皮素磷脂混合物比较,NPC在水中的溶解度增大(P<0.01)。当T-BHP浓度为200μmol/L时,ARPE-19细胞存活率达半数,是最佳的氧化损伤模型。与溶媒组比较,模型组ARPE-19细胞存活率明显降低(P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01)。与模型组比较,柚皮素中、高剂量组及NPC低、中、高剂量组细胞存活率增加(P<0.05),凋亡率下降(P<0.01)。与NPC低剂量组比较,NPC中、高剂量组细胞存活率增加(P<0.05),凋亡率下降(P<0.01);柚皮素低、中剂量组细胞凋亡率升高(P<0.01)。与NPC中剂量组比较,柚皮素低、中、高剂量组和NPC低剂量组细胞存活率降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.01)。与NPC高剂量组比较,柚皮素低、中、高剂量组和NPC低剂量组细胞存活率降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.01)。结论:柚皮素形成磷脂复合物后,水溶性和生物活性提高,对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用明显增强。

胶态二氧化硅固化的银杏黄酮组分磷脂复合物微丸的制备工艺研究

目的:制备胶体二氧化硅固化粉末微丸,并对制备工艺进行研究。方法:首先制备银杏黄酮组分磷脂复合物,并利用胶体二氧化硅进行固化得到固化粉末。以其为主药,通过单因素实验筛选制备微丸的润湿剂、载药量和崩解剂,以微丸的圆整度和收率为评价指标,采用正交实验设计筛选出最佳制备工艺。结果:选择30%乙醇作为润湿剂,确定载药量为70%,选择CMC-Na作为崩解剂。最佳制备工艺确定为滚圆时间为4min,滚圆频率30Hz,挤出频率为30Hz。结论:制备的微丸稳定,验证试验结果表明制备工艺科学合理。

槲皮素磷脂复合物激活Nrf2信号通道增强对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用

目的研究槲皮素磷脂复合物对叔丁基氢过氧化物(tert-butyl hydroperoxide,tBHP)诱导ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用及相关机制。方法采用溶剂法制备槲皮素磷脂复合物,并测定磷脂复合物在水和氯仿中的溶解度。实验细胞分组:溶媒对照组、模型对照组、槲皮素及其磷脂复合物组(含400μmol·L-1、200μmol·L-1和100μmol·L-1三个浓度)。MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,酶标仪检测细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛、总抗氧化能力水平,荧光素DCFH-DA探针法测定细胞内活性氧含量,Real time PCR、Western Blot检测细胞核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1、醌氧化还原酶-1和谷氨酸半胱氨酸连接酶的表达水平。结果形成磷脂复合物后槲皮素在水和氯仿中的溶解度分别为(38.36±2.91)μg·m L-1、(1351.27±28.12)μg·m L-1,较单体显著提高;浓度为400μmol·L-1、200μmol·L-1和100μmol·L-1的槲皮素及其磷脂复合物对氧化损伤ARPE-19细胞有保护作用,而且高、中浓度的槲皮素磷脂复合物的作用优于单体;浓度为200μmol·L-1的槲皮素及其磷脂复合物均能降低氧化损伤ARPE-19细胞的凋亡率,槲皮素磷脂复合物作用明显优于单体;槲皮素磷脂复合物能显著提高细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低细胞内活性氧、丙二醛水平,槲皮素单体则不能,但槲皮素及其磷脂复合物能提高细胞内总抗氧化能力;槲皮素及其磷脂复合物能诱导Nrf2核转位,激活Nrf2通道,上调血红素加氧酶-1、醌氧化还原酶-1和谷氨酸半胱氨酸连接酶的表达。结论槲皮素形成磷脂复合物后,水溶性、脂溶性提高,对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用比单体强,其作用机制与激活Nrf2信号通路,上调下游Ⅱ相代谢酶和抗氧化酶的表达有关。