用终止剂改进超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法

以二硫苏糖醇（ＤＴＴ）或Ｌ－抗坏血酸（ＶｉｔＣ）为终止剂改进的经典邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性。反应体系：５０ｍｍｏｌ／Ｌ邻苯三酚，ｐＨ８．２０，总体积９ｍｌ，２５℃，加一滴ＤＴＴ（１００ｍｍｏｌ／Ｌ）或ＶｉｔＣ（５％），约５０μｌ，终止自氧化反应。终止后，反应体系的４２０ｎｍ光吸收在ｌｈ内保持恒定。终止剂法的邻苯三酚自氧化率及酶活测定灵敏度与经典法相近，一个酶活单位相当于纯ＳＯＤ１００μｇ／Ｌ。

邻苯三酚自氧化法测定SOD活性中检测波长的优化

[目的]确定邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的波长。[方法]采用双光束紫外可见分光光度计分别对不同时间点及时间段邻苯三酚自氧化中间产物吸光度进行测定。[结果]邻苯三酚自氧化初始中间产物的吸收度在320nm处线性好、灵敏度高。[结论]320nm可作为邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的测定波长。

邻苯三酚自氧化法测定抗氧化活性的方法研究

通过对邻苯三酚自氧化反应体系的光谱吸收、缓冲液pH值和邻苯三酚浓度对自氧化速率的影响进行研究,建立邻苯三酚自氧化-分光光度法最佳应用体系。确定反应体系总体积为3mL,检测波长在319nm时的测定条件为:缓冲液pH值7.3,邻苯三酚浓度60mmol/L,自氧化速率可达0.060△A/min,线性时间4min;检测波长在420nm时的测定条件为:缓冲液pH值7.8,邻苯三酚浓度80mmol/L,自氧化速率可达0.050△A/min、线性时间3min。新方法建立的紫外和可见光两种检测波长体系,可针对样品的吸收光谱特征选择检测波长,避免了样品自身吸收强对测定检测限的影响,测定pH值接近生物体内真实条件,自氧化速率为最佳检测值且线性时间良好。

邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性的研究

目前超氧化物歧化酶(SOD)活性测定结果混乱,为提高测定结果的可比性,对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的方法进行了研究,就该活力测定体系中缓冲溶液的介质组成、浓度、pH及所含的EDTA量等因素对测定结果的影响进行了探讨,根据实验结果,提出了新的改良方法.

四种邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性方法的比较

邻苯三酚自氧化法(420nm法)与邻苯三酚/DTT终止法测定SOD酶活力,结果基本一致,其转换系数(CC)为1.03;改进的邻苯三酚自氧化法(325nm法)、微量邻苯三酚/Vc终止法测定SOD酶活力与420nm法差别较大,其转换系数分别为2.51、5.51.在测定SOD酶活力时,可根据不同的测定方法采用转换系数进行校正;实验表明:终止剂维生素C(Vc)和二硫苏糖醇(DTT)对SOD酶活力的测定无影响;325nm法与Vc法灵敏度较高,可用于SOD活力较低的样品.

邻苯三酚自氧化法适于测定SOD活性吗?

用邻苯三酚自氧化法测定了Cu-ZnSOD(Superoxidedismutase,SOD)及根据天然超氧化物歧化酶活性部位结构设计、合成的一些模型化合物(themodelsofSOD,MSOD)活性.测试结果表明:Cu-ZnSOD和含Cu( )、Fe( )、Mn( 、 )的SOD模型化合物随浓度升高,有的对邻苯三酚氧化表现为负抑制(即促进邻苯三酚氧化);另一部分化合物在较低浓度表现为抑制,较高浓度表现为负抑制的交替变化;或抑制率的无规则变化.本文对出现负抑制的内在根源进行了探讨,鉴于邻苯三酚自氧化的复杂反应机理;含Cu( )、Fe( )、Mn( 、 )SOD模型化合物的多酚氧化酶活性和Fenton反应催化活性,及MSOD中金属离子的Lewis酸性,不宜采用邻苯三酚自氧化法测定SOD活性.

超氧化物歧化酶的两种邻苯三酚测活法比较

为使SOD 测活结果规范化.对常规的两种邻苯三酚自氧化测活方法（420nm法和325nm法）进行了比较.结果发现.325nm法（邻苯三酚终浓度0.1mmol/L）测定的SOD活力为420nm法（邻苯三酚终浓度0.2 mmol/L）的 2.6倍左右,与以往报道不符,而且在低浓度下,邻苯三酚加量的变化会明显影响活性测定结果。

邻苯三酚自氧化法测定血中超氧化物歧化酶的活性

〔目的〕为改善目前SOD活性测定结果混乱的现状 ,提高测定结果的可比性 ,〔方法〕对邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性的方法进行了研究 ,就测量波长、底物浓度、加样量等因素对测定结果的影响进行了探讨。测定了 79例健康儿童血清和 2 9例健康成人红细胞中的SOD活性。〔结果〕测定结果分别为 49.0± 19.2U/ml( x±s)和 6 187±12 36U/gHb( x±s)。〔结论〕建议尽快建立标准化的测定方法 ,严格控制测定条件 。

邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶缓释片中SOD的活性

目的建立超氧化物歧化酶 (SOD)缓释片的活性测定方法。方法采用邻苯三酚自氧化法。结果在SOD浓度为 0 .0 6 0～0 . 0 0 6mg·ml-1时线性关系良好 (r=0 .9996 ) ;平均空白加样回收率为 10 1 .94 % (n=9)。结论所用方法简单、快速 ,结果准确。

邻苯三酚自氧化法测定甲烷氧化菌素-铜配合物的超氧化物歧化酶活性

目的建立甲烷氧化菌素(methanobactin,Mb)-铜配合物(Mb-Cu)模拟超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的邻苯三酚自氧化体系分析方法。方法利用HP 20大孔树脂从甲基弯菌IMV301l发酵液中分离纯化得到Mb,制备Mb-Cu测定其具有的SOD活性,利用紫外光谱分析对SOD邻苯三酚测活法进行系统研究。考察缓冲液浓度、邻苯三酚浓度、Mb-Cu浓度、EDTA-Na_2浓度、pH值和温度等对Mb-Cu模拟SOD活性的影响。结果在Mb-Cu浓度为0.8 mg/L,Tris-HAC缓冲溶液为0.05 mol/L(其中缓冲溶液的pH值为8.2、EDTA-Na_2的浓度为2 mmol/L),邻苯三酚浓度为0.363 mmol/L,温度为20℃时,邻苯三酚的自氧化速率相对较低,此时Mb-Cu对超氧阴离子自由基(O_2^-.)的抑制率较高,以此建立Mb-Cu模拟SOD活性的邻苯三酚自氧化分析方法。发现Mb-Cu符合影响生物催化剂条件的一般规律,但比生物酶具有更高的热稳定性。结论Mb-Cu可作为清除O_2^-.的SOD模拟酶,本试验建立的分析条件是最佳反应体系。

邻苯三酚自氧化法测定血浆超氧化物歧化酶的方法学评价及临床应用探讨

目的对邻苯三酚自氧化法测定血浆超氧化物歧化酶（SOD）的方法学进行评价,并探索其临床应用价值。方法根据美国临床和实验室标准协会（CLSI）的评价方法,应用邻苯三酚自氧化法检测血浆SOD,评价其精密度、准确度、线性和回收率;随机选取2014年健康体检者42例作为对照组,2014年3-12月我院住院氧化应激反应相关疾病患者1580例作为疾病组,测定血浆SOD的活性水平,进行临床应用评价。结果用邻苯三酚自氧化法测定SOD精密度试验中批内精密度为1.57%和4.8%,批间精密度为2.17和2.21%;准确性试验相对偏倚为：1.6%和2.4%;线性试验在0-250 U/ml内R2为0.9978;回收率为96.2%-103.4%;SOD在各疾病组与健康对照组差异均具有显著性（P〈0.01）。结论邻苯三酚自氧化法测定SOD方法学评价符合要求,其精密度高、准确性好,线性范围宽,具有较高的临床应用价值。

超氧化物歧化酶—邻苯三酚自氧化测活方法的改进

本文对邻苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活力的方法做了部分改进,使其操作更简便省时,节省试剂;并对该实验条件下反应的动力学做了初步研究,表明该法比较适合经部分纯化的酶活测定,结果比较稳定,认为是柱层析中大批量活性跟踪的首选方法,可作为自动分析的基础。

改良邻苯三酚自氧化法及其临床应用

细胞内超氧化物歧化酶(SOD)是体内防卫自由基损伤组织极为重要的酶,可采用多种化学法间接检测。Marklund 建立的邻苯三酚自氧化速率法是其中最简便的一种。但原法存在费时、灵敏度低和显色不稳定等缺点。我们对原法进行改良并初步用于临床脑血管疾病,效果满意,现报道如下。材料与方法一、试剂 0.1mol/L Tris(上海化学试剂站分装厂)缓冲液,含0.02mol/L,EDTA-Na^2(上海试剂一厂),HCI(AR)调至pH8.20。5mmol/L邻苯三酚(遵义市第二化工厂,批号890606),0:01mol/LHCI配制。

多酚氧化酶对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的干扰

测定了甘薯、小白菜叶和人红细胞三种生物材料对邻苯三酚自氧化速率的影响、它们的 SOD 活性和多酚氧化酶的活力;讨论了多酚氧化酶对邻苯三酚自氧化法测定 SOD活性的干扰。结果表明:在植物中,多酚氧化酶含量较多而 SOD 活性较低,而在动物材料中,多酚氧化酶含量低而 SOD 活性较高。因此,植物材料不宜采用邻苯三酚自氧化法测定 SOD 的活性.但可作为测定动物材料中 SOD 活性的一种简便、灵敏的方法。

邻苯三酚自氧化法测定SOD活性中测定波长的选择

用岛津UV - 2 4 0型、2 6 0型和T - 190 1紫外可见分光光度计进行实验 ,确定邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的最适波长非文献使用的 4 2 0nm和 32 5nm ,而应为 32

天然虾青素清除超氧阴离子的抗氧化能力

为研究天然虾青素对超氧阴离子的抗氧化作用,该研究对邻苯三酚自氧化法进行适当改进,在原有方法的基础上引入无水乙醇溶解虾青素,通过分析邻苯三酚自氧化产物在325 nm附近的吸收变化评价虾青素的抗氧化活性,并与典型的抗氧化剂β-胡萝卜素、维生素C和α-生育酚进行超氧阴离子清除能力的比较。结果表明,虾青素的超氧阴离子清除能力与维生素C相近,明显高于β-胡萝卜素和α-生育酚。