麝香草酚抗氧化和抑制酪氨酸酶活性研究

目的检测麝香草酚的抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性。方法采用清除DPPH、ABTS、羟自由基、超氧自由基,抑制脂质过氧化活性和抑制酪氨酸酶活性的方法,检测麝香草酚的抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性。结果麝香草酚具有明显的抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性,呈浓度依赖性效应。在清除DPPH、ABTS、羟自由基、超氧自由基,抑制脂质过氧化活性和抑制酪氨酸酶活性试验中,麝香草酚的体系终浓度IC_(50)分别为120,40.9,24,60,29.17μmol/L和37.49μmol/L。作为阳性对照药物的山柰酚的体系终浓度IC_(50)分别为80,9.09,12,12,8.33μmol/L和3.33μmol/L。麝香草酚具有1个酚羟基,山柰酚具有3个酚羟基,分子结构的不同,导致麝香草酚、山柰酚不同的抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性。结论研究表明麝香草酚具有明显的抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性,是值得进一步研究的抗氧化防衰老类候选药物、化妆品原料和食品添加剂。

酪氨酸氧化产物诱导大鼠空间学习记忆损伤

探究长期摄入酪氨酸氧化产物对大鼠空间学习记忆及其对海马组织的影响。采用4周龄清洁级SD大鼠40只,随机分为Control组(正常日粮)、Tyr组(添加0.44%酪氨酸)、TOP1组(添加0.22%酪氨酸氧化产物)、TOP2组(添加0.44%酪氨酸氧化产物)。饲喂24周后,用Morris水迷宫检测大鼠空间学习与记忆能力,测定海马组织中蛋白质和脂质氧化产物的含量,用RTPCR检测海马组织抗氧化和炎症相关基因的表达。结果显示,饲喂24周后,与Control组和Tyr组相比,TOP1组和TOP2组大鼠出现空间学习与记忆障碍;海马组织中MDA、4-HNE、Dityr、3-NT、Aβ40含量都显著升高(p<0.05);Nrf2、NF-κB和i NOS的mRNA表达也显著上调(p<0.05)。因此,酪氨酸氧化产物导致大鼠海马组织氧化损伤,蛋白质和脂质氧化产物积累,造成大鼠空间学习记忆能力受损。

食源性酪氨酸氧化产物诱导小鼠心肌氧化损伤及能量代谢障碍的机制

食源性酪氨酸氧化产物(tyrosine oxidation product,OTP)不仅影响食物品质和营养价值,同时对机体健康存在潜在危害,但其相关机制尚未明确,本研究探讨了OTP及其组分双酪氨酸(dityrosine,DT)对生长期小鼠心肌组织氧化还原稳态、线粒体功能及能量代谢的影响及可能的机制。30只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:对照组(Con)、酪氨酸氧化产物组(OTP)和双酪氨酸组(DT),各组每天分别灌胃420μg/kg m_b酪氨酸溶液、1 909μg/kg m_b OTP和420μg/kg m_b DT溶液,连续35 d,每周监测体质量变化。灌胃结束后测定血浆和心肌组织氧化还原稳态指标、抗氧化酶活力和线粒体生物合成、能量代谢相关指标。结果显示,与Con组相比,OTP和DT灌胃引起小鼠心脏指数显著增加(P<0.05),心肌活性氧水平及DT、丙二醛和游离脂肪酸含量显著上升(P<0.05);导致心脏总抗氧化能力、乙酰辅酶A含量、NADH/NAD^+和ATP酶的水平显著降低(P<0.05);同时,OTP和DT灌胃引起血浆肿瘤坏死因子α水平、肌酸激酶活力、乳酸脱氢酶活力显著上升(P<0.05)。实时荧光定量聚合酶链式反应结果表明,与Con相比,DT和OTP组小鼠心肌组织抗氧化相关基因Pi3k、Ampk、Nrf2、Nqo1和线粒体合成相关基因Pgc1α、Tfam、Ppara mRNA表达水平显著下调(P<0.05)。此外,通过比较分析,发现DT对心肌氧化应激及能量代谢等各指标的影响与OTP一致,且无显著性差异(P>0.05)。上述结果表明OTP和DT均可引起小鼠心肌氧化应激,导致心肌损伤和能量代谢障碍,DT作为OTP的重要成分,在OTP诱导心肌损伤的过程中起关键性作用。

新型青枯雷尔氏菌来源双核含铜酪氨酸氧化酶的异源表达及生化性质鉴定

左旋多巴(Levodopa,L-DOPA)能有效治疗帕金森病(Parkinson’s Disease,PD),寻找能够专一性催化酪氨酸合成L-DOPA的新型酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)具有重要意义。研究将来源于青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)的酪氨酸氧化酶(RsTYR)基因构建到重组质粒中化转至大肠杆菌中进行异源表达并对表达条件进行了优化。结果表明,在BL21(DE3)大肠杆菌中,当诱导温度达到25℃,诱导剂异丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度为0.5 mmol/L,诱导时间设置为12 h时,RsTYR蛋白能够获得较高表达量(0.4 mg/mL)。随后,通过Ni树脂亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析等方法对RsTYR蛋白进行纯化,获得高纯度的重组蛋白。随后利用精制的RsTYR蛋白,对其进行了产物鉴定和酶学性质表征研究,结果表明RsTYR能特异性的将L-酪氨酸合成L-DOPA。该酶的最适反应温度为45℃,最适反应pH为6.5。在pH为7.0时RsTYR催化性质最稳定,最适缓冲液为PBS缓冲液,在pH 6.0~7.5间,酶分子仍具有50%以上的残余活性,且K^(+)能够提高RsTYR的活性。同时测定了RsTYR的酶动力学参数,其K_(m)和k_(cat)值分别为0.63μmol/L和9.61 s^(-1)。同源序列分析结果表明RsTYR属于Tyrosinase Superfamily,并且通过同源建模及序列对比分析预测了该酶的保守催化活性位点His81、His93、His102、His227、His231、His253。本研究为生物合成L-DOPA提供了一种新酶选择,为L-DOPA的生物催化合成提供了一定的理论基础。

帕金森病病因蛋白质:α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶活性的影响

目的:α-突触核蛋白是帕金森病的病因蛋白质之一,α-突触核蛋白与酪氨酸羟化酶具有相互作用。制备一个基因重组酪氨酸羟化酶,探讨α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶活性的影响。方法:实验于2004-05/11在北京老年医学研究所神经生物研究室完成。将携带人酪氨酸羟化酶cDNA的基因重组质粒pGEX-TH转化BL21(DE3)细菌使其表达谷胱甘肽S转移酶-TH为标签的融合蛋白质,用谷胱甘肽-琼脂糖4B亲和层析法纯化基因重组酪氨酸羟化酶,用高压液相色谱(HPLC)法分析酪氨酸羟化酶活性,将α-突触核蛋白添加至酪氨酸羟化酶的酶促反应体系中。观察基因重组型酪氨酸羟化酶制备生成物特点,以及α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶活性的作用。结果:①基因重组酪氨酸羟化酶约占菌体可溶性蛋白组分的1%,纯化的酪氨酸羟化酶在SDS-PAGE上表现为单一条带,可催化L-酪氨酸发生羟化反应生成L-多巴。②随α-突触核蛋白浓度递增,酪氨酸羟化酶活性有不同程度的下降。结论:原核表达方法可制备纯化度较高的人基因酪氨酸羟化酶,α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶活性具有抑制作用。

卡维地洛对慢性心力衰竭大鼠心肌酪氨酸羟化酶表达的影响

目的:评价卡维地洛(Carvedilol)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响.方法:应用阿霉素腹腔注射制作CHF大鼠模型,根据干预药物的不同随机分为Carvedilol治疗组(CHF-C组,n=9),倍他乐克(Betaloc)治疗组(CHF-M组,n=9),CHF安慰剂治疗组(CHF-P组,n=9)和正常对照组(NC组,n=6).阿霉素应用第5周后采用灌胃给药途径,CHF-C组以Carvedilol0.25mg/kg,1次/d进行干预;CHF-M组以Betaloc0.25mg/kg,1次/d进行干预;CHF-P组和NC组加以食用淀粉0.25mg/kg,1次/d进行干预.10wk后透射电镜检测大鼠心肌超微结构,并采用RT-PCR和Western Blot方法检测大鼠心肌TH表达水平.结果:大鼠心肌THmRNA和蛋白表达水平CHF-C组明显低于NC组[(0.94±0.31)vs(1.18±0.39),(0.91±0.30)vs(1.32±0.41),均P<0.05];但明显高于CHF-P组[(0.94±0.31)vs(0.47±0.12),(0.91±0.30)vs(0.41±0.14),均P<0.05];也明显高于CHF-M组[(0.94±0.31)vs(0.66±0.20),(0.91±0.30)vs(0.58±0.19),均P<0.05].结论:CHF大鼠心肌TH表达水平明显下调,Carve-dilol治疗能够阻止CHF心肌TH下调,有助于改善CHF大鼠心肌交感神经重构.

心理应激对中枢多巴胺能神经元的影响及酪氨酸的干预作用

目的观察反复心理应激对中枢多巴胺(DA)系统的影响及酪氨酸(Tyr)的干预作用。方法用CommunicationBox模型对大鼠进行连续14天、每天30min的心理应激,并经饲料给予250、500、1000mg/kg三个剂量Tyr的干预。应激后对含中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(Nac)及前额皮质(mPFC)的脑组织切片进行酪氨酸羟化酶(TH)和Fos蛋白免疫组化染色。结果心理应激组在前囟后5·1mm处VTA部位TH阳性神经元数比正常对照组下降显著(P<0·01);在5·1、5·4、5·7mm处VTA部位,Tyr干预500、1000mg/kg组TH阳性神经元数升高。Fos蛋白在VTA、Nac、mPFC等三个部位均有较强的表达,且心理应激组较对照组明显升高,1000mg/kgTyr干预组较心理应激组明显降低。结论反复心理应激能够损害中枢DA神经元,导致TH阳性神经元数目减少,Fos蛋白表达增加,多巴胺前体物质Tyr的干预能够降低此种损害。

人酪氨酸羟化酶基因在猴骨骼肌直接注射后的表达

为了对多途径治疗帕金森病（ＰＤ）提供研究依据，将带人酪氨酸羟化酶基因的质粒ｐＲｃＴＨ与脂质体混合后直接注射至猴骨骼肌内，１００ｄ后取注射部位肌肉组织，以地高辛标记的ｈＴＨＲＮＡ探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，以检测该质粒在非人灵长类活体骨骼肌组织中表达的目的基因的ｍＲＮＡ水平。本研究结果表明，人酪氨酸羟化酶基因在猴体内有较高效率的表达。本研究提示，质粒可作为基因治疗的较理想的表达载体。

Synphilin-1寡核苷酸对帕金森病酪氨酸羟化酶表达的影响

目的探讨Synphilin-1对帕金森病(PD)酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法50只SD大鼠随机分成5组,每组10只。PD组大鼠右侧黑质注入6-羟多巴3μL制作PD模型,反义组、同义组、错义组分别注入Synphilin-1反义寡核苷酸、同义寡核苷酸、错义寡核苷酸各3μL,正常对照组右侧黑质注入2 g/L抗坏血酸生理盐水。取鼠的术侧脑黑质制作切片,利用免疫组化方法检测Synphilin-1表达,利用免疫组化、Western blot、原位杂交方法检测TH的表达。结果与正常对照组比较,PD组Synphilin-1蛋白表达显著增加,TH蛋白和TH mRNA表达显著减少;与PD组比较,Synphilin-1反义组TH蛋白和TH mRNA表达显著增多。结论Synphilin-1可能通过影响TH的表达对帕金森病的发病机制产生影响。

酪氨酸羟化酶和GTP环水解酶-1基因修饰永生化成纤维细胞及其表达研究

目的 探讨酪氨酸羟化酶 (TH)和GTP环水解酶 1(GCH)基因修饰的永生化成纤维细胞的可行性和表达能力 ,为其混合移植治疗帕金森病 (PD)作准备。方法 SV40大T抗原转化成纤维细胞使其永生化。构建TH和GCH基因真核表达质粒并转染永生化成纤维细胞 ,利用免疫组化和RT PCR检测其在体内外的表达。结果 TH和GCH基因修饰的永生化成纤维细胞在体外可长期传代培养且可有效表达 ,脑内移植后TH基因至少可表达 8周以上。

小鼠α-syn基因敲除对高铁所致黑质酪氨酸羟化酶表达降低影响

目的探讨α-突触核蛋白(α-syn)基因敲除(α-syn^(-/-))小鼠是否能够抵抗高铁饮食造成的黑质(SN)酪氨酸羟化酶(TH)表达降低。方法实验分为野生型正常饮食组、野生型高铁饮食组、α-syn^(-/-)正常饮食组和α-syn^(-/-)高铁饮食组。其中高铁饮食组用含质量分数0.03羰基铁粉的鼠粮喂养小鼠3个月。采用蛋白质免疫印迹实验检测各组小鼠TH的表达。结果与野生型正常饮食组相比,野生型高铁饮食组小鼠TH蛋白表达水平降低(F=3.761,P<0.05);α-syn^(-/-)高铁饮食组和α-syn^(-/-)正常饮食组小鼠TH蛋白表达水平比较差异无显著性(P>0.05)。结论α-syn^(-/-)小鼠能够抵抗高铁负载造成的SN区TH表达下降,减轻铁对SN神经元的损伤。

肾上腺髓质增生大鼠模型酪氨酸羟化酶基因的表达

目的 :研究肾上腺髓质增生 (AMH)大鼠模型肾上腺组织酪氨酸羟化酶基因表达水平。方法 :Wistar大鼠随机分为 2组 :正常对照组 (NC组 )和肾上腺髓质增生组 (AMH组 )。用利血平皮下注射制备肾上腺髓质增生大鼠模型。 6周后取出肾上腺组织 ,用免疫组织化学和原位杂交法分别测定该模型肾上腺组织酪氨酸羟化酶蛋白质及mRNA表达 ,检测血清中的去甲肾上腺素 (NE)、肾上腺素 (E)和 2 4h尿 3 甲氧 4 羟基苦杏仁酸 (VMA)的含量 ,同时测量肾上腺髓质百分数以反映肾上腺髓质增生的程度。结果 :肾上腺髓质增生大鼠模型肾上腺组织酪氨酸羟化酶蛋白质及mRNA表达均明显增强 ,血清中的NE ,E和 2 4h尿VMA的含量明显升高 ,肾上腺髓质百分数明显升高。结论 :肾上腺髓质增生大鼠模型肾上腺组织酪氨酸羟化酶基因表达增强。

重组慢病毒携带酪氨酸羟化酶对大鼠帕金森病模型的干预研究

目的利用携带大鼠酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组慢病毒,对大鼠帕金森病模型进行基因治疗,评估基因疗法对帕金森病症状缓解和黑质神经元恢复的影响。方法 2014年11月—2015年12月,分离、培养和鉴定胎鼠原代神经元,抽提胎鼠原代神经元RNA、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆大鼠TH(r TH)基因,将r TH基因构建至慢病毒质粒,包装r TH重组慢病毒。采用实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光实验和Western blotting法体外检测大鼠成纤维细胞REF中r TH基因表达。通过脑内立体定位注射6羟多巴胺(6-OHDA)建立大鼠帕金森病模型,给予Lv-r TH重组慢病毒(Lv-r TH治疗组)、未携带基因的慢病毒Lv-NC(Lv-NC治疗组)及0.9%氯化钠溶液(对照组)注射大鼠纹状体和黑质。通过阿扑吗啡诱发旋转实验进行行为学评分,免疫组化进行神经元恢复评分。结果成功分离、培养了胎鼠原代神经元,成功克隆了r TH基因,并将r TH基因构建至慢病毒质粒,实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光实验和Western blotting法检测大鼠成纤维细胞REF中均表达r TH基因。3组大鼠治疗前1周自发旋转速率比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组大鼠治疗0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周自发旋转速率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中治疗0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周,Lv-NC治疗组和Lv-r TH治疗组大鼠自发旋转速率较对照组增快(P<0.05);治疗2、3、5、6、8、9、10周,Lv-r TH治疗组大鼠自发旋转速率较Lv-NC治疗组减慢(P<0.05)。Lv-NC治疗组和Lv-r TH治疗组大鼠中脑黑质TH阳性神经元所占比例较对照组降低,Lv-r TH治疗组大鼠中脑黑质TH阳性神经元所占比例较Lv-NC治疗组升高(P<0.05)。结论通过脑内立体定位注射,将表达r TH基因的重组慢病毒递送至帕金森病大鼠纹状体和黑质能缓解帕金森病症状并恢复TH阳性神经元。

酪氨酸羟化酶缺乏症致多巴反应性肌张力不全1例

患儿,男,7个月,因“抬头不稳3月余”来院。患儿3月龄可抬头,稳定性欠佳,肘部支撑可,发作性震颤。近1月来,患儿自主活动减少,抬头不稳较前明显,翻身次数减少,四肢震颤较前明显,活动后易疲乏。体格检查:意识清,眼神交流可,前囟1 cm×1 cm大小,张力不高。双侧膝腱反射阳性,双侧巴氏征阳性,四肢肌张力高,余未见明异常。

土豆组织膜酪氨酸组织传感器的研究

首次采用土豆组织作生物催化材料,将其组织肉浆与氧电极配合,制成了植物组织酪氨酸电极。在5×10^(-6)-6×10(-4)mol/L浓度围内,响应信号与L-酪氨酸浓度呈线性关系,电极寿命至少30天,响应时间仅为4分钟,性能优于同类电极。

外源性犬尿喹啉酸对黑质多巴胺能神经元损伤保护作用的实验研究

目的 :观察评价预先应用谷氨酸 (Glu)受体拮抗剂犬尿喹啉酸 (KYNA)对黑质多巴胺 (DA)能神经元及神经传导纤维损伤的保护性作用。方法 :雌性SD大鼠 40只 ,随机分为 4组 ,每组 1 0只 ,应用江湾I型C立体定向仪 ,在单侧黑质致密部 (SNc)及中脑被盖腹侧部 (VTA) ,A组注射生理盐水 ,B组注射KYNA ,C组注射KYNA和 6 OHDA ,KYNA先于 6 OHDA 0 5h ,D组注射 6 OHDA。注射药物 3d后 ,进行症状观察 ,2周后处死大鼠。切片HE染色观察黑质细胞的形态特点 ,冰冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞及TH阳性纤维着色情况 ,实验数据分别采用方差分析以及秩和检验进行统计分析。结果 :正常黑质细胞体形较大 ,富含黑色素颗粒 ,可见尼氏体。数据统计分析结果提示B组与A组之间无显著影响 ,P >0 0 5。实验组C与A、B、D组比较均有显著性差异 ,P <0 0 1。结论 :外源性谷氨酸受体拮抗剂KYNA通过阻滞Glu受体能减轻 6

外源性犬尿烯酸对黑质多巴胺能神经元损伤的保护性作用(英文)

背景:帕金森病治疗方法有多种,多巴胺替代疗法、外科靶点永久毁损、脑深部核团高频电刺激术、脑移植和基因治疗。这些外科及药物治疗都有一些不足及难以弥补的缺陷,国内外学者将多巴胺能神经元保护剂的研究和应用提到了重要位置。目的:观察评价预先应用谷氨酸受体拮抗剂犬尿烯酸对黑质多巴胺能神经元及神经传导纤维损伤的保护性作用。设计:采用随机对照单盲实验研究。地点和材料:研究地点为解放军总医院神经外科实验室;实验动物选取雌性SD大鼠(取自解放军总医院动物饲养室,40只,体质量210～240g,平均228g)。干预:雌性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,应用江湾I型C立体定向仪,在单侧黑质致密部及中脑被盖腹侧部,分别注射生理盐水,犬尿烯酸,犬尿烯酸加6-羟多巴胺,6-羟多巴胺。注射药物3d后,进行症状观察,2周后处死大鼠。切片HE染色观察黑质细胞的形态特点,冷冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞及TH阳性纤维着色情况,实验数据分别采用方差分析以及秩和检验进行统计分析。主要观察指标:切片HE染色观察黑质细胞的形态特点,冷冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞数及TH阳性纤维着色等级。结果:正常黑质细胞体形较大,富含黑色素颗粒,可见尼氏体。

经鼻给枸橼酸铁铵对小鼠嗅觉、嗅球铁含量及TH蛋白表达影响

目的了解经鼻给枸橼酸铁铵对小鼠嗅觉、嗅球铁含量及酪氨酸羟化酶(TH)表达影响。方法健康雄性C57BL/6小鼠40只,随机分成两组,各20只。实验组双侧交替经鼻给枸橼酸铁铵(200mg/kg),隔天1次,持续3周;对照组则给予等量生理盐水。3周后,经嗅觉测试检测两组小鼠嗅觉,应用Perls’铁染色联合二氨基联苯胺(DAB)强化的方法检测嗅球铁阳性细胞数,运用免疫印迹法检测嗅球TH表达。结果与对照组比较,实验组小鼠嗅觉明显减退,嗅球铁染色阳性细胞数明显增加,TH表达水平显著下降,差异有统计学意义(t=2.266～4.801,P<0.05)。结论经鼻给枸橼酸铁铵能够引起小鼠嗅球铁沉积和多巴胺能神经元损伤。

双酪氨酸致小鼠心肌损伤和炎症反应

目的探究摄入氧化酪氨酸及其主要成分双酪氨酸对小鼠心肌功能和炎症反应的影响。方法 30只健康雌性昆明小鼠,随机分为3组:空白对照组,氧化酪氨酸组和双酪氨酸组,后两组每天分别灌胃320μg/kg BW氧化酪氨酸和双酪氨酸,空白对照组每天灌胃等量无菌生理盐水,连续10周。实验结束后HE染色观察心肌形态结构;测定血浆及心肌组织中蛋白质氧化产物双酪氨酸(DT)、晚期蛋白氧化产物(AOPPs)和3-硝基酪氨酸(3-NT)、脂质过氧化物丙二醛(MDA)、氧化还原状态总抗氧化能力(T-AOC)和还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)和心肌损伤指标肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnI)和Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶(ATP酶)以及炎性因子C-反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;检测心肌炎症基因核转录因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)的表达水平。结果与空白对照组相比,氧化酪氨酸和双酪氨酸灌胃显著增加了小鼠血浆和心肌中DT、AOPPs、3-NT、MDA的含量(P<0.05),降低了血浆和心肌中T-AOC、GSH/GSSG的水平(P<0.05),增加了血浆CK、CK-MB、cTnI的水平(P<0.05),降低了心肌Ca^(2+)-ATP酶的活性(P<0.05),增加了血浆CRP和TNF-α的含量(P<0.05),上调了心肌炎症因子相关基因NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达水平(P<0.05)。结论氧化酪氨酸和双酪氨酸会引起小鼠机体氧化应激反应,心肌蛋白质和脂质氧化产物累积;造成心肌组织损伤和炎症反应。双酪氨酸作为氧化酪氨酸的主要成分,可在氧化酪氨酸引起小鼠心肌损伤中起主要作用。

TauN368和磷酸化α-synuclein在3种帕金森病动物模型脑区的表达

目的探讨3种不同帕金森病(Parkinson disease,PD)动物模型黑质、纹状体和海马中磷酸化α-synuclein(S129)[以下简称为p-α-syn(S129)]和天冬酰胺内切酶(asparagine endopeptidase,AEP)特异性切割产生的tauN368片段的表达水平。方法建立慢性1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四羟吡啶(MPTP)诱导的PD小鼠模型(n=10)、鱼藤酮诱导的小鼠PD模型(n=10)以及鱼藤酮诱导的大鼠PD模型(n=10)共3种模型,每种模型均设立对照组(n=10)。采用酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫染色评估不同PD动物模型黑质多巴胺能神经元损伤情况,采用Western blot方法检测各组动物中脑黑质、纹状体、海马p-α-syn(S129)和tauN368的表达。结果 3种PD动物模型中脑黑质致密部TH阳性神经元数目均较对照组明显减少,提示造模成功。Western blot检测结果显示,MPTP诱导的小鼠PD模型黑质、纹状体及海马tauN368表达均较对照组升高(P<0.05),黑质和海马p-α-syn(S129)表达无统计学差异(P>0.05);鱼藤酮诱导的小鼠PD模型黑质及纹状体p-α-syn(S129)和tauN368表达均较对照组增加(P<0.05),而海马p-α-syn(S129)和tauN368表达与对照组比较均未见统计学变化(P>0.05);鱼藤酮诱导的大鼠PD模型黑质、纹状体及海马p-α-syn (S129)表达较对照组增加(P<0.05),而黑质和海马tauN368的表达无统计学差异(P>0.05)。结论鱼藤酮诱导的小鼠PD模型黑质和纹状体同时存在tauN368和p-α-syn(S129)的差异性表达,提示该模型可能是研究PD发病中tauN368和α-synuclein相互作用机制的理想动物模型。