河北太行鸡不同群体含黄素单氧化酶3基因多态性检测

为了研究含黄素单氧化酶3(FMO3)基因T329S突变位点在河北太行鸡不同群体中的等位基因及基因型频率分布情况,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(PCRRFLP)和DNA测序技术分别对赞皇、平山、唐县地区3个河北太行鸡群体FMO3基因及基因型频率进行检测。结果显示,平山地区太行鸡群体中未检测到SS型个体,而平山、唐县地区太行鸡群体中均有FMO3基因SS型个体;赞皇、平山、唐县3个太行鸡群体中T等位基因的频率分别为0.129 8、0.075 0、0.084 2,其频率均远低于等位基因A的频率。独立性卡方检验结果显示,不同群体间基因型频率分布差异不显著;经适合性卡方检验,赞皇、平山、唐县3个太行鸡群体卡方值分别为1.173 0(P>0.05)、0.035 1(P>0.05)、0.188 5(P>0.05),说明该基因位点A→T碱基突变在3个群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态;通过分析3个不同群体遗传变异参数发现,3个太行鸡群体在该基因位点上均处于低度多态(PIC<0.25)。以上结果表明,河北太行鸡群体中FMO3基因型频率较低,可以通过PCR-RFLP的方法予以剔除。

细胞色素氧化酶3A4启动子报告基因的构建及其活性检测

目的建立细胞色素氧化酶(cytochrome P-450,CYP)3A4启动子报告基因并在孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达阳性的肿瘤细胞中检测其转录活性。方法利用PCR扩增CYP 3A4的启动子区远端调控序列(-7836/-7208)和近端调控序列(-362/+52)序列;将上述序列克隆至p GL3-Promoter载体上;利用萤光素酶报告基因系统检测CYP 3A4报告基因的活性。结果在肝癌细胞系中,PXR的激动剂利福平能够剂量依赖性地诱导远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和近端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.95;P=0.011)的活性,EC50为(5.65±0.58)μmol/L和(8.91±1.12)μmol/L;PXR的拮抗剂酮康唑能够剂量依赖性地抑制利福平诱导的远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和PXRELuc(R2=0.92;P=0.003 4)活性,IC50为(0.55±0.08)μmol/L和(0.94±0.14)μmol/L。此外,多种化疗药物(PXR的潜在配体)能够在PXR阳性的肿瘤细胞系中诱导远端调控序列荧光素酶报告基因和近端调控序列荧光素酶报告基因的活性。结论成功构建了CYP 3A4启动子报告基因,在此基础上建立了在不同肿瘤细胞中检测PXR转录活性的方法。

河北太行鸡含黄素单氧化酶3基因型频率分布研究

本试验旨在研究含黄素单氧化酶3(Flavin-Containing Monooxygenase 3,FMO3)基因T329S突变在河北太行鸡群体中的分布。本研究根据Gen Bank中公布的鸡FMO3基因序列设计引物,采用PCR-RFLP方法对517只河北太行鸡FMO3基因频率及基因型频率进行检测。结果显示,该位点在河北太行鸡群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);等位基因A、T频率分别为0.9023、0.0976;AA、AT、TT基因型频率分别为0.8201、0.1644、0.0155。结果表明,河北太行鸡群体中鱼腥味综合症易感基因型频率不高,可以通过PCR-RFLP的方法予以剔除。

云南28个群体中含黄素单氧化酶3基因突变频率分布

目的 研究含黄素单氧化酶 3(flavin- containing monooxygenase3,FMO3)基因突变频率在云南少数民族群体中的分布。方法 采用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性方法对云南 2 4个少数民族的 2 8个群体进行了 FMO3基因型分析。结果 FMO3/ Stop1 48频率分布范围为 0 .174～ 0 .80 3,平均为0 .395 ;FMO3/ L ys1 58频率分布范围为 0 .0 5 6～ 0 .4 14 ,平均为 0 .2 0 8;FMO3/ Gly30 8频率分布范围为 0～0 .2 17,其中布朗族、新平花腰傣、德宏水傣、壮族、德昂族、景颇族、怒族和回族的频率为零 ,平均为 0 .0 4 6。结论 FMO3基因突变频率不仅民族间有较大的差异 ,而且同一民族不同群体也不相同。

细胞色素P450氧化酶3A4＊1G基因多态性对新疆维吾尔族与汉族患者芬太尼术后镇痛效应的影响

目的研究细胞色素P450氧化酶（cytochrome P450 enzyme，CYP）3A4＊IG在新疆维吾尔族及汉族人群的分布特征及其与芬太尼术后镇痛的用量及效果的关系。方法选择美国麻醉医师协会（ASA）分级Ⅰ或Ⅱ级，在全身麻醉下行择期妇科手术的患者71例，按民族分为2组：维吾尔族组（U组）37例和汉族组（H组）34例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction hagment length polymorphism，PCR-RFlJP）技术进行CYP3A4＊IG基因多态性检测，统计其等位基因和基因型频率。术后采用芬太尼患者静脉自控镇痛（patientcontrolled intravenous analgesia，PCIA），记录并比较两组间术后6、24、48h的视觉模拟评分（visual analogue scale，VAS）、Ramasay镇静评分、生命体征、48h内患者PCIA芬太尼总用量。结果①U组患者中GG、GA、AA基因型分布频率分别为86．5％、10．8％和2．7％，H组患者中GG、GA、AA基因型分布频率分别为50．0％、44．1％和5．9％；U组患者G等位基因和A等位基因分布频率分别为91．9％和8．1％，H组患者分别为72．1％和27．9％；两组间基因型分布频率和等位基因分布频率差异均有统计学意义（P〈O．05）。②两组患者各时点（术后6、24、48h）脉搏血氧饱和度（pluseoxygensaturation，SpO2）、Ramasay镇静评分和VAS评分比较差异均无统计学意义。③U组PCIA48h内芬太尼总用量明显多于H组（R0．05）；U组和H组CYP3A4＊1G突变型（GA型＋AA型）PCIA48h内芬太尼总用量明显低于野生型（GG型）（P〈0．05）。结论CYP3A4＊1G基因多态性分布在新疆维吾尔族和汉族患者之间存在差异，此差异可能是两民族患者之间芬太尼术后镇痛效应出现差异的主要因素。

大豆脂肪氧化酶-3基因(Lox3)启动子的克隆及其瞬时表达分析

利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离脂肪氧化酶-3基因启动子片段Lox3p。PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子及胚特异性表达元件。将克隆得到的Lox3p片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-Lox3p。通过农杆菌介导法在大豆种子中进行瞬时表达,GUS组织化学染色及荧光测定都显示出Lox3p驱动GUS基因表达的强度高于CaMV35S启动子。结果表明,该Lox3p启动子片段具备一定的胚特异表达特性,为探明大豆脂肪氧化酶-3基因启动子胚特异表达调控序列及其调控机制的研究奠定基础。

吲哚胺2,3-二氧化酶与免疫系统功能调节

免疫应答受多种因素影响和调节,从而维持机体内环境的稳定。巨噬细胞、树突状细胞等抗原提呈细胞表达的吲哚胺2,3-二氧化酶(Indoleam ine 2,3-d ioxygenase,IDO)清除局部微环境中的色氨酸,诱导T淋巴细胞的凋亡,通过调节性T细胞的作用抑制T细胞的克隆性增生,参于细胞免疫的调节;在机体维持正常的妊娠以及自身免疫性疾病、器官移植排斥反应、肿瘤等疾病的发生发展中起着重要作用。调控IDO的活性可能是寻找防治免疫相关性疾病药物的新途径。

赖氨酰氧化酶样基因3在人皮肤成纤维细胞株中的表达

目的研究体外培养的人皮肤成纤维细胞株中赖氨酰氧化酶样基因3(lysyloxidase-likegene3,LOXL3)的表达模式。方法提取不同生长阶段的人皮肤成纤维细胞株的不同组分,用NorthernBlot和WesternBlot分别从mRNA和蛋白水平分析LOXL3表达,并以免疫荧光方法观察LOXL3的分布部位。结果 LOXL3mR-NA和蛋白含量在细胞汇合前低于细胞汇合期,汇合后最高,且LOXL3分布在整个细胞浆和细胞核。结论 LOXL3的表达量在细胞生长的不同阶段有所不同,可能与其功能有关。

缺血后处理对在体大鼠缺血-再灌注心肌细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统的影响

目的观察缺血后处理拮抗心肌缺血-再灌注损伤时内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸(CYP2J3/EET)系统的变化。方法复制在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤及缺血后处理模型。雄性Wistar大鼠(250～300)g随机分为三组:假手术组(Sham)、缺血-再灌注组(I-R)、缺血后处理组(IPo)。动脉插管测定心功能指标,采用TTC染色法测定心肌梗死范围,采用RT-PCR法检测心脏细胞色素P450表氧化酶亚型2J3(CYP2J3)mRNA表达,采用Western blot方法测定心肌组织CYP2J3蛋白水平的变化,高效液相色谱法测定11,12-EET含量。结果与I-R组相比IPo组左室收缩末压(LVESP)、左室内压最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)均显著升高;心肌梗死面积减少20.76%(P<0.01);与Sham组及I-R组相比IPo组CYP2J3 mRNA、CYP2J3蛋白及11,12-EET含量明显升高(P<0.05)。结论IPo可减轻在体心肌I-R损伤同时上调心脏CYP2J3/EET系统;提示CYP2J3/EET系统可能与IPo拮抗心脏I-R损伤作用相关。

赖氨酰氧化酶样基因-3在体外培养的人主动脉平滑肌细胞的表达

目的研究赖氨酰氧化酶样基因-3(Lysyl Oxidase-Like Gene 3,LOXL3)在体外培养的人主动脉平滑肌细胞(Hu-man Aortic Smooth Muscle Cell,HAoSMC)的表达模式。方法提取不同生长阶段的人主动脉平滑肌细胞的不同组分,用Northern Blot、Western Blot从mRNA和蛋白水平分析LOXL3表达,并与赖氨酰氧化酶样基因-2(Lysyl Oxidase-Like Gene 2,LOXL2)比较。结果LOXL3 mRNA和蛋白含量在细胞汇合前高于细胞汇合期和汇合后,且LOXL3蛋白在细胞外基质和细胞的不可溶组分中含量较高,而LOXL2则在细胞培养液中表达较高。结论LOXL3的表达量在细胞生长的不同阶段有所不同,人主动脉平滑肌细胞的LOXL3和LOXL2分布不同,可能与其功能有关。

山核桃赤霉素氧化酶基因CcGA3ox的克隆和功能分析

【目的】赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)是赤霉素(GAs)生物合成途径中关键酶之一,对山核桃(Carya cathayensis)中CcGA3ox基因进行克隆,并进行序列分析和功能验证。【方法】以山核桃体细胞胚为材料,提取RNA,采用PCR扩增技术,克隆山核桃CcGA3ox基因编码区全长;对序列进行生物信息学分析。为验证基因功能,通过同源重组技术构建具有强启动子的35S::CcGA3ox::GFP过表达载体,以核桃体细胞胚为转化材料,利用农杆菌介导法进行遗传转化;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析山核桃CcGA3ox基因在转基因阳性核桃植株中的相对表达量。采用紫外分光光度计检测植株中叶绿素含量,并分析其差异。【结果】山核桃CcGA3ox基因开放阅读框(ORF)全长为1 116 bp,编码371个氨基酸。对CcGA3ox氨基酸序列分析发现,其含有2OG-FeⅡ-Oxy结构域。系统进化树显示,CcGA3ox与薄壳山核桃CiGA3ox亲缘关系最近,与核桃JrGA3ox亲缘关系较近。对核桃体细胞胚进行遗传转化、荧光检测及PCR验证表明,35S::CcGA3ox::GFP过表达载体被成功转入核桃体胚中。核桃阳性再生植株与对照植株相比,株高明显增高;qRT-PCR结果表明,CcGA3ox基因相对表达量显著增加。同时,过表达CcGA3ox基因可以降低核桃阳性再生植株中叶绿素含量。【结论】山核桃CcGA3ox基因在核桃生长过程中对株高调控起关键作用。

HPV16E6与吲哚胺2,3-二氧化酶在宫颈病变组织中的表达

目的检测高危HPV感染的正常宫颈组织、宫颈癌前病变组织、宫颈癌组织HPV16E6和IDO的表达,分析二者在宫颈病变组织恶化过程中的关系,探讨其作为宫颈癌肿瘤标志物的可能性。方法把经第二代杂交捕获(HC-2)法行HPV DNA检测为高危型HPV感染的宫颈病变者120例为实验对象,正常宫颈组织、宫颈癌前病变组织、宫颈癌组织各40例。免疫组化染色法检测各组织中HPV16E6和IDO的表达情况。结果 40例正常宫颈组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为7.5%、0%;40例宫颈癌前病变组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为37.5%、22.5%。40例宫颈癌组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为90%、 80%。在宫颈病变组织恶化过程中HPV16E6和IDO的阳性表达呈正相关(rs=0.710, P=0.000)。结论 HPV16E6和IDO的表达随宫颈病变的进展而呈现出阳性程度逐渐递增趋势,HPV16E6和IDO可考虑成为预测宫颈病变组织恶化的肿瘤标志物。

高等植物赤霉素3-β-双氧化酶基因研究进展

赤霉素3-β-双氧化酶(GA3ox)是赤霉素(GA)生物合成过程中的关键酶之一,直接作用于活性GA的生成,在植物的生长发育过程中发挥着重要作用。GA3ox已在拟南芥、烟草、高粱和杨树等多种植物中得到克隆,在植物个体的不同生长阶段、不同组织中GA3ox的表达量均存在着差异,这主要是由物种内在的遗传因素所决定的,同时环境因子和外源激素处理对GA3ox表达也有着显著的影响。通过对基因突变体的研究,揭示出GA3ox突变导致GA的生物合成受阻而间接影响植物的生长,导致植物茎秆、花、种子、果、根等部位性状的改变,包括植株矮化、结籽困难等。过量表达GA3ox基因促进GA的生成,诱导细胞的分裂与分化,促进根尖的径向伸长、种子萌发等。主要从GA3ox的基因克隆与表达模式及其功能效应两方面综述了其在高等植物中研究进展,通过对GA3ox在不同植物中的相关功能研究,探讨其在植物生长发育过程中的具体作用,以期为了解GA3ox对植物生长发育的调控机制提供参考,也有助于在生产实践中更好地利用GA3ox开展基因工程研究,定向培育植物新品种。

不同抗生素对小鼠结肠吲哚胺2,3-二氧化酶及树突状细胞表达的影响

目的探讨口服抗生素改变小鼠肠道菌群结构,检测吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)及树突状细胞(DC)在小鼠肠道黏膜中的表达情况。方法将Babl/c小鼠分成对照组,甲硝唑组和庆大霉素组各5只,分别灌胃生理盐水、甲硝唑和庆大霉素共7日。第8日在无菌环境中处死小鼠并收集小鼠结肠。使用Western Blot法检测小鼠肠道IDO的表达,流式细胞术检测肠道DC的表型,免疫荧光法检测肠道IDO和CD11c阳性细胞的数量。结果甲硝唑组小鼠结肠IDO表达低于对照组(P=0.003)和庆大霉素组(P=0.010)。各组CD40、CD80、CCR7、CD103表达差异无统计学意义(P>0.05)。甲硝唑组CD86表达高于对照组(P=0.003),庆大霉素组CD86表达与对照组差异无统计学意义(P=0.107)。免疫荧光显示甲硝唑组CD11c和IDO双阳性细胞比例较对照组低(P=0.004),庆大霉素组与对照组差异无统计学意义(P=0.908)。结论不同抗生素口服后对小鼠结肠黏膜IDO及DC的表达影响不同。

吲哚酸2,3-二氧化酶与妊娠相关疾病

吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)是肝脏以外唯一可催化色氨酸(Trp)经犬尿氨酸途径代谢的限速酶,γ干扰素(IFN-γ)能激活IDO,导致Trp缺乏,可抑制免疫细胞尤其是T细胞增殖。IDO主要表达在抗原提呈细胞和胎盘滋养细胞,在诱发宿主免疫防御、诱导母胎免疫耐受和神经系统调节中均发挥重要的免疫调节作用。就IDO和自然流产、子痫前期、感染性妊娠并发症和产后抑郁症等妊娠相关疾病的关系进行综述。

催化甾体羟基化的P450氧化酶BM3的蛋白质工程的研究进展

甾体关键位点的羟基化在药用甾体的合成中发挥重要作用。为探究细胞色素P450（CYP450）氧化酶BM3在甾体羟基化合成中的潜在应用,基于细胞色素P450 BM3的蛋白质工程逐渐发展起来。在取得的若干P450 BM3突变酶的基础上,通过新一代测序技术和生物信息学分析等方法,筛选出催化甾体羟基化的相关CYP450。根据易错PCR等定向进化技术获得了突变位点信息,进一步采用（饱和）定点突变等进化技术对活性氨基酸位点进行分析,

香椿子多酚经STAT3/COX-2信号通路对大鼠缺血性脑卒中损伤的保护作用机制

目的探讨香椿子多酚(PTSS)通过信号转导与转录激活因子(STAT)3/环氧化酶(COX)-2信号通路对大鼠缺血性脑卒中损伤的保护作用。方法将75只SD大鼠随机分为NC组、Model组、PTSS组(200 mg/kg PTSS)、白细胞介素(IL)-6组(0.5 mg/kg IL-6抗体)、PTSS+IL-6组(200 mg/kg PTSS和0.5 mg/kg IL-6抗体),每组15只,除NC组外,其他组均利用改良的Longa线栓法构建缺血性脑卒中大鼠模型,成功造模后,进行相应药物处理,NC组、Model组灌胃等体积0.5%羧甲基纤维素钠及尾静脉注射等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。末次给药结束后,采用Zea-Longa评分系统评估大鼠神经功能;2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积百分率;苏木素-伊红(HE)染色检测海马CA1区病理变化;试剂盒检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;TUNEL染色法检测脑组织神经细胞凋亡情况;Western印迹检测脑组织中p-STAT3、STAT3、COX-2蛋白。结果与NC组相比,Model组脑组织海马CA1区神经元结构严重受损,核变形、萎缩,神经细胞数量减少,细胞排列松散,脑梗死体积百分率、神经功能评分、MDA水平、神经细胞凋亡率、p-STAT3/STAT3及COX-2蛋白表达明显升高,SOD活性明显降低(P<0.05);与Model组相比,PTSS组脑组织海马CA1区病理损伤得到显著改善,脑梗死体积百分率、神经功能评分、MDA水平、神经细胞凋亡率、p-STAT3/STAT3及COX-2蛋白表达水平显著降低,SOD水平显著升高,而IL-6组相应指标与上述相反(P<0.05);与PTSS组比较,PTSS+IL-6组脑组织海马CA1区病理损伤加重,脑梗死体积百分率、神经功能评分、MDA水平、神经细胞凋亡率、p-STAT3/STAT3及COX-2蛋白表达水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.05)。结论PTSS可能通过抑制STAT3/COX-2减轻大鼠缺血性脑卒中损伤。

卵巢子宫内膜异症不孕患者异位内膜组织中FMO3、DMBT1的表达变化及其意义

目的观察卵巢子宫内膜异位症(EMs)不孕患者异位内膜组织中的含黄素单氧化酶3(FMO3,在输卵管上皮组织高表达)、脑恶性肿瘤缺失基因(DMBT1,在子宫内膜组织高表达)mRNA及蛋白,并探讨其意义。方法将卵巢EMs不孕患者的异位内膜组织40例份作为观察组,选取卵巢EMs已育患者的异位内膜组织50例份作为对照组,以正常卵巢组织35例份作为正常组。采用real-time PCR法检测三组FMO3、DMBT1 mRNA,采用Western blotting法检测FMO3、DMBT1蛋白。结果观察组FMO3 mRNA及蛋白相对表达量高于对照组和正常组(P均<0.05);观察组、对照组DMBT1 mRNA及蛋白相对表达量高于正常组(P均<0.05)。结论卵巢EMs不孕患者异位内膜组织中FMO3呈高表达,异位内膜组织来源可能为输卵管;输卵管组织来源的异位内膜组织可能与卵巢EMs患者不孕有关。

CYP3A的分子机制研究进展

CYP3A在许多内源性及外源性化合物的氧化及还原代谢中起关键作用 ,对CYP3A基因表达调控的研究具有重要意义。对有关CYP3A基因表达调控的分子机制及CYP3A基因突变的研究进展加以总结 ,阐明CYP3A基因突变与某些疾病的相关性。