2型糖尿病伴干眼症病人血清和泪液分泌型卷曲相关蛋白5、脂肪酸结合蛋白4水平与病情严重程度的相关性

目的分析分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP-5)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在2型糖尿病(T2DM)伴干眼症病人血清和泪液中的表达及其与病情严重程度的相关性。方法选取2020年12月至2021年12月唐山市眼科医院收治的T2DM病人145例,其中单纯T2DM病人84例168眼(T2DM组),伴干眼症病人61例122眼(T2DM伴干眼症组),另选取同期该院体检健康者50例100眼作为对照组。T2DM伴干眼症病人又分为轻度组(29例)、中度组(17例)、重度组(15例)。利用酶联免疫吸附法测定所有受试者血清和泪液中SFRP-5、FABP4水平;相关性分析采用Pearson法或Spearman法;logistic回归分析影响T2DM病人干眼症发生的因素。结果T2DM伴干眼症组、T2DM组血清和泪液SFRP-5水平均低于对照组(106.09±8.37、135.72±9.26比158.34±9.45,28.85±5.13、58.27±6.14比45.18±5.92),T2DM伴干眼症组低于T2DM组(P<0.05);T2DM伴干眼症组、T2DM组血清和泪液FABP4水平均高于对照组(70.63±6.59、58.27±6.14比45.18±5.92,15.91±3.76、10.28±3.58比7.72±3.29),T2DM伴干眼症组高于T2DM组(P<0.05)。重度组、中度组血清和泪液SFRP-5水平(68.29±7.15、95.54±8.34比131.82±9.02,12.83±4.62、24.72±5.49比39.56±5.18)、泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌试验(SIT)低于轻度组,重度组低于中度组(P<0.05);重度组、中度组血清和泪液FABP4水平(84.56±6.83、73.18±6.94比61.93±6.27,25.64±4.19、17.15±3.86比10.16±3.47)及眼表疾病指数量表(OSDI)积分高于轻度组,重度组高于中度组(P<0.05)。T2DM伴干眼症病人血清与泪液SFRP-5水平呈正相关,血清与泪液FABP4水平也呈正相关(P<0.05)。T2DM伴干眼症病人血清和泪液SFRP-5水平与OSDI积分均呈负相关,与BUT、SIT均呈正相关(P<0.05);血清和泪液FABP4水平与OSDI积分均呈正相关,与BUT、SIT均呈负相关(P<0.05)。血清和泪液SFRP-5水平是影响T2DM病人干眼症发生的独立保护因素,而血清和泪液FABP4水平是独立危险因素(P<0.05)。结论SFRP-5在T2DM伴干眼症病人血清和泪液中均低表达,FABP4均高表达,二者与病情严重程度密切相关。

他汀类药物进展性脑梗死神经功能缺损程度及胆固醇调节元件结合蛋白表达情况的影响研究

目的 观察他汀类药物对进展性脑梗死神经功能缺损程度及胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP2)表达情况的影响。方法 本研究为前瞻性研究,病例纳入河南科技大学第二附属医院2021年1月至2023年6月收治的106例进展性脑梗死(PCI)患者,通过电脑随机分组法将其分别列为常规组(53例)和联合组(53例),所有患者实施常规药物治疗,联合组采用阿托伐他汀配合治疗,比较2组血脂水平、血清炎症因子、SREBP2蛋白表达水平、脑神经功能恢复情况;通过Spearman相关性系数检验SREBP2蛋白表达与脑神经功能缺损程度的相关性。结果 在不同治疗方案下,联合组的总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、SREBP2蛋白相对表达量均低于常规组;联合组的超敏C-反应蛋白(hsCRP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、脂蛋白相关磷脂酶A2 (Lp-PLA2)均低于常规组;联合组的神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100钙结合蛋白β(S100β)均低于常规组;联合组的神经功能缺损量表(NIHSS)评分、中国卒中量表(CSS)评分均低于常规组;改良Bathel指数(MBI)高于常规组,差异具有统计学意义(P<0.05)。经Spearman相关性系数检验,SREBP2蛋白表达与NSE、S100β、NIHSS评分、CSS评分呈负相关,与MBI评分呈正相关。结论 SREBP2蛋白表达与PCI神经功能缺损程度密切相关;阿托伐他汀能有效改善PCI患者的血脂水平并缓解炎症反应,对促进患者神经功能恢复有积极作用。

结直肠癌组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白的表达变化及其意义

目的观察结直肠癌(CRC)组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DNA损伤结合蛋白1和CUL4相关因子7(DCAF7)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法CRC患者98例,均接受手术治疗,术中留取CRC组织和癌旁组织,采用Real-time PCR法检测CRC组织和癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p,采用蛋白印迹法检测CRC组织和癌旁组织中DCAF7蛋白,分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者临床病理参数的关系。以CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量的中位数为临界值,将CRC患者分为miR-138-5p高表达组和miR-138-5p低表达组、miR-876-5p高表达组和miR-876-5p低表达组、DCAF7蛋白高表达组和DCAF7蛋白低表达组,并分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者预后的关系。结果CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为1.36±0.29、1.41±0.36、0.59±0.19,癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为2.15±0.48、2.08±0.44、0.20±0.08,两者相比,P均<0.05。miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P均<0.05)。miR-138-5p低表达组3年总体生存率为67.3%,miR-138-5p高表达组3年总体生存率为86.6%,两组相比,P<0.05。miR-876-5p低表达组3年总体生存率为66.7%,miR-876-5p高表达组3年总体生存率为85.1%,两组相比,P<0.05。DCAF7蛋白高表达组3年总体生存率为67.2%,DCAF7蛋白低表达组3年总体生存率为87.5%,两组相比,P<0.05。结论CRC组织中miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达,miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关。与miR-138-5p高表达、miR-876-5p高表达、DCAF7蛋白低表达的CRC患者相比,miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达的CRC患者术后3年总体生存率低。

血清固醇调节元件结合蛋白2与急性脑梗死相关性研究

目的:探讨血清固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein-2,SREBP-2)与急性脑梗死的相关性。方法:纳入2020年10月至2021年3月入住的134名急性脑梗死患者和34名健康体检者。通过酶联免疫吸附实验法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清SERBP-2浓度,并依据急性卒中Org 10172治疗试验(trial of Org 10172 in acute stroke treatment,TOAST)分型和是否合并糖尿病进行亚组分析。使用美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分评估患者的病情严重程度,并分析血清SREBP-2与病情严重程度的相关性。使用改良Rankin量表评估患者的90 d功能预后,并将患者分为预后良好组和预后不良组,比较2组的血清SREBP-2浓度差异,并通过logistic回归分析血清SREBP-2是否与脑梗死预后相关。结果:脑梗死组的血清SREBP-2浓度明显低于对照组[72.60(57.50,83.35)ng/mL vs.86.80(77.20,97.90)ng/mL,P=0.000]。血清SREBP-2浓度识别急性脑梗死患者和健康人群的曲线下面积为0.782(P=0.000)。大动脉粥样硬化型、心源性栓塞型、小动脉闭塞型脑梗死血清SREBP-2浓度均明显低于对照组(P=0.000,P=0.003,P=0.000)。合并糖尿病患者的血清SREBP-2高于不合并糖尿病的患者(P=0.021)。血清SREBP-2浓度与入院NIHSS评分无相关性(P>0.05)。脑梗死患者预后良好组血清SREBP-2浓度较预后不良组低,但差异无统计学意义(P>0.05),logistic回归分析显示血清SREBP-2浓度与脑梗死90 d功能预后无关(OR=1.016,95%CI=0.991~1.042,P=0.205)。结论:血清SREBP-2浓度在急性脑梗死患者中明显下降。血清SREBP-2对识别脑梗死患者与健康人群具有一定的效能。然而,血清SREBP-2浓度与患者病情严重程度和预后无关。

氧化固醇结合蛋白相关蛋白-9基因多态性与脑梗死的相关性研究

目的研究氧化固醇结合蛋白相关蛋白-9(ORP-9)基因多态性与脑梗死的相关性,探讨其与高血压、颈动脉粥样硬化及血糖、血脂代谢的关系。方法以动脉粥样硬化血栓性和小动脉闭塞性脑梗死患者作为脑梗死组,另选年龄和性别匹配的健康者作为对照组,空腹静脉抽血,采用酚/氯仿法提取DNA,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测ORP9基因上rs856600 SNP位点的基因型及等位基因频率的分布情况,使用SPSS17.0软件分析该多态性与脑梗死发病血压、血脂、血糖及颈动脉粥样硬化等的相关性。结果 rs856600基因型及等位基因频率在脑梗死组和对照组之间以及动脉粥样硬化血栓形成型(AT组)、小动脉闭塞型(SAO组)和对照组之间分布差异无统计学意义(P>0.05),Logistic回归分析显示基因型与脑梗死无相关性(P>0.05);rs856600基因型及等位基因频率在脑梗死组和对照组各自的高血压亚组和非高血压亚组之间差异无统计学意义(P>0.05);rs856600多态位点基因型及等位基因频率在脑梗死组和对照组各自的糖尿病亚组和非糖尿病亚组之间差异无统计学意义(P>0.05);rs856600的T等位基因(CT+TT)携带者与CC基因型携带者相比,在脑梗死组和对照组中,血压、空腹血糖、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)水平差异均无统计学意义(P>0.05);在脑梗死组动脉粥样硬化(AS)患者的易损斑块(VP)亚组中显著高于稳定斑块(SP)亚组(P<0.05)。结论 rs856600的T等位基因可能是中国汉族人群颈动脉易损斑块形成的一个危险因素,有进一步验证和研究的价值。

桑氧化固醇结合相关蛋白的基因克隆及序列与表达分析

氧化固醇结合蛋白家族是一类存在于真核生物中的能结合氧化固醇的保守蛋白,主要作用是参与细胞中的脂类代谢、囊泡运输及信号转导等方面。试验利用RT-PCR和RACE技术从桑树(Morus L.)鲁桑系品种育71-1(M.multicaulis Perr.cv.Yu 71-1)中克隆出一个氧化固醇结合蛋白相关蛋白基因,该c DNA全长1 974 bp,含有一个完整的全长1 371 bp的读码框(ORF),内有220 bp的5’非翻译区(5’UTR)和383 bp的3’非翻译区(3’UTR),3’端以Poly(A)15结束。其开放读码框共编码456个氨基酸,分子量为51.97 k D,等电点为5.143。利用Pfam和PROSITE在线分别进行了蛋白质的结构及功能位点和motif预测,结果显示,该蛋白为氧化固醇结合蛋白相关蛋白家族的成员,具有氧化固醇结合蛋白相关结构域,且含有该家族蛋白特有的极其保守的指纹基序"EQVSHHPP"。多重序列比对结果表明,该蛋白高度保守,在系统进化树中桑树与野草莓(Fragaria vesca subsp.vesca L.)、碧桃(Prunus persica Batsch.var.duplex Rehd.)等的亲缘关系较近。Real-time PCR分析表明,该基因在花、幼果、成熟果的表达量比根、茎和芽中的表达量要高。在高盐胁迫下,桑树Ma-acyin-ORP基因的表达量先升高、后下降,初步推断该基因可能参与某种压力胁迫的生理反应。

氧化固醇结合蛋白相关蛋白9多态性与瑞舒伐他汀与阿托伐他汀治疗后心肌梗死患者血脂水平变化的相关性

目的探讨氧化固醇结合蛋白相关蛋白9多态性与瑞舒伐他汀与阿托伐他汀治疗后心肌梗死患者血脂水平变化的相关性。方法前瞻性2019年8月至2020年8月期间滁州市第一人民医院收治的70例心肌梗死患者给与瑞舒伐他汀与阿托伐他汀进行治疗,并检测氧化固醇结合蛋白相关蛋白9基因型多态性,对等位基因频率及Hardy-Weinberg平衡性做分析。结合患者治疗前后血脂水平的变化情况解析ORP9基因多态性对瑞舒伐他汀与阿托伐他汀钙降脂疗效的影响以及对二者之间的相关性做出判断。结果氧化固醇结合蛋白相关蛋白9的SNP基因位点包括rs856600和rs768529,各位点的基因分布符合Hardy-Weinberg平衡规律(P>0.05)。70例心肌梗死患者用药1个月之后TC、TG、HDL-C和LDL-C水平均较治疗前出现降低的趋势,治疗后优于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。TT基因型患者的血脂指标TG在治疗后的下降幅度显著高于(TC+CC)基因型患者(P<0.05),但不同基因型对血脂指标TC和LDL-C比较,差异无统计学意义(P>0.05);而GG基因型患者的血脂指标TC、TG和LDL-C在治疗后的下降幅度显著高于(AA+AG)基因型患者(P<0.05)。结论氧化固醇结合蛋白相关蛋白9基因存在多态性,GG基因型与瑞舒伐他汀与阿托伐他汀的降脂效应相关。

低密度脂蛋白受体相关蛋白5基因A1330V遗传多态性与高胆固醇血症的关系

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)基因第1330位由丙氨酸向颉氨酸突变(A1330V)的遗传多态性和高胆固醇血症的发病易感性之间的关系。方法用聚合酶链反应(PCR)直接测序,对346例正常者和432例原发性高胆固醇血症患者的A1330V基因多态性进行研究。结果在高胆固醇血症患者中,1330V突变等位基因的发生频率为0.22,而在健康对照组中,1330V突变等位基因的频率为0.14。1330V等位基因的频率在原发性高胆固醇血症患者和健康对照组之间差异存在显著性(χ2=16.24,P<0.01),并且此差异只存在于男性人群中,女性人群未见统计学差异。结论LRP5的1330V等位基因是男性人群原发性高胆固醇血症的遗传易感因素。

电针对绝经后骨质疏松症模型大鼠肠黏膜维生素D膜相关性快速反应类固醇结合蛋白表达的影响

目的通过观察去卵巢骨质疏松模型大鼠肠黏膜1,25维生素D_(3)膜相关性快速反应类固醇结合(membrane-associated rapid response steroid-binding,1,25D_(3)-MARRS)蛋白表达,以及血清甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)、1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25(OH)_(2)D_(3)]、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)的变化,探讨电针治疗绝经后骨质疏松症的作用机制。方法将32只3月龄SD雌性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组及电针组,每组8只。模型组和电针组采用切除大鼠双侧卵巢的方法制备绝经后骨质疏松症模型,假手术组仅切除卵巢周围少量脂肪组织,空白组不做任何处理;造模后电针组进行电针干预。各组大鼠均进行骨密度检测,血清钙、PTHrP、1,25(OH)_(2)D_(3)、OPG、RANKL检测,以及肠黏膜1,25D_(3)-MARRS蛋白的表达检测。结果与空白组和假手术组比较,模型组大鼠股骨、胫骨骨密度明显下降(P<0.05)。与空白组和假手术组比较,模型组大鼠血清钙、PTHrP及1,25(OH)_(2)D_(3)水平明显降低(P<0.05,P<0.01),OPG/RANKL比值明显降低(P<0.01),且肠黏膜1,25D_(3)-MARRS蛋白表达减少(P<0.01)。与模型组比较,电针组股骨、胫骨密度升高(P<0.05,P<0.01),血清钙、PTHrP、1,25(OH)_(2)D_(3)水平明显升高(P<0.05,P<0.01),OPG/RANKL比值明显升高(P<0.01),肠黏膜1,25D_(3)-MARRS蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论电针可通过提高血清钙、PTHrP及1,25(OH)_(2)D_(3)含量,提高OPG/RANKL比值,增加肠黏膜1,25D_(3)-MARRS蛋白表达,从而改善肠道钙吸收,提高去卵巢骨质疏松症大鼠的骨密度,最终达到防治骨质疏松的作用。

磺胺—5—甲氧嘧啶在猫体内的药动学研究 第二报:SMD与猫、免、鸡的血清蛋白结合率比较试验

用平衡透析法测定SMD与猫、兔、鸡的血清蛋白结合率(f_b)分别为41.28±13.32(60.95～24.58)％、62.61±27.01(92.76～22.90)％、43.82±17.86(70.11～21.97)％。数据经Woolf作图法得到猫、兔、鸡结合参数βp分别为:6.91±1.5、8.84±0.93、46.16±1.02um/g;Kap分别为593.64±214.38、37.59±8.17、218.51±49.54um/l。各动物的f_b均随药物浓度的增高而降低,高浓度时呈现饱和现象。f_b的种属差异极显著(P<P_(0.01)F检验)。提示在临床对此等小动物按每公斤体重相同剂量给药是不合理的,必须考虑种属差异,猫和鸡还要考虑个体差异。

可溶性耐药相关钙结合蛋白在MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病模型中的表达及意义

目的:观察1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中可溶性抗药性相关钙结合蛋白(sorcin)表达的变化,寻求参与PD多巴胺能神经元细胞神经变性的蛋白质改变,为阐明PD的发病机制提供理论依据。方法:应用1.0mmol.L-1 MPP+处理未分化的SH-SY5Y细胞24h,在体外建立PD细胞模型,应用荧光染色双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)、图像分析、基质-辅助激光解析/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和生物信息学的方法,对该模型的差异表达蛋白质进行研究。结果:蛋白质组学分析在对照组和MPP+处理组之间发现22个差异表达蛋白质,其中1个蛋白质点被确切的鉴定为sorcin。sorcin的表达明显上调,荧光丰度比值为1.97倍。该蛋白的最小肽片段覆盖率、最大概率期望值、相对分子质量和等电点分别为25.7、0.006、21 940和5.3。结论:sorcin在功能上与钙离子稳态和凋亡有关,可能参与了MPP+在SH-SY5Y细胞诱导的毒性,并可能与PD的发病机制有关。

血清脂滴蛋白5、抗凋亡多肽和血清视黄醇结合蛋白4表达水平与冠心病严重程度的相关性

目的探讨冠心病病人血清脂滴蛋白5(perilipin 5)、抗凋亡多肽(HN)和血清视黄醇结合蛋白4(RBP-4)表达水平与冠状动脉病变程度及预后的相关性。方法选取2016年6月—2018年6月在我院住院的冠心病病人80例作为研究对象,分为不稳定型心绞痛组(UA组,49例)和稳定型心绞痛组(SA组,31例);另选取同期健康体检志愿者60名作为对照组。检测各组血清perilipin 5、HN和RBP-4水平,对冠心病病人行冠状动脉造影并行Gensini评分,分析血清perilipin 5、HN和RBP-4指标与Gensini评分的相关性。随访1年,观察不同预后病人间血清perilipin 5、HN和RBP-4指标,并行Logistic回归分析。结果对照组、SA组和UA组perilipin 5、HN水平从高到低依次为对照组、SA组和UA组,差异均具有统计学意义(P<0.05);RBP-4水平从高到低分别为UA组、SA组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),UA组Gensini评分高于SA组,差异有统计学意义(P<0.05)。按照Gensini评分进行分组,随着Gensini评分的升高,perilipin 5、HN水平下降(P<0.05),RBP-4水平升高(P<0.05)。Pearson检验发现perilipin 5水平与Gensini评分呈负相关(r=-0.411,P<0.001),HN水平与Gensini评分呈负相关(r=-0.362,P<0.001),RBP-4水平与Gensini评分呈正相关(r=0.554,P<0.001)。经1年的随访,共有28例病人出现主要心血管不良事件(MACE),依据预后进行分组,结果显示,发生MACE病人RBP-4水平较高,perilipin 5、HN水平较低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示perilipin 5、HN是MACE的保护因素(P<0.05),RBP-4是MACE的危险因素(P<0.05)。结论血清perilipin 5、HN和RBP-4水平与冠心病病人冠状动脉病变严重程度和预后密切相关,血RBP-4水平升高或血清perilipin 5、HN水平下降能够在一定程度上反映病人冠状动脉病变严重程度增加以及预后不良情况。

冠心病合并代谢综合征患者固醇调节元件结合蛋白表达水平与脂代谢指标相关性研究

目的:固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是一种重要的转录因子,对调控哺乳动物的脂质稳态至关重要。本研究的目标是探讨冠心病(CAD)合并代谢综合征(MS)患者外周血白细胞SREBPs表达水平与脂代谢指标的相关性。方法:收取健康对照者159例,CAD患者70例,CAD合并MS患者73例。空腹抽取静脉血测定各组临床生化指标,实时荧光定量PCR检测外周血白细胞中SREBPs(SREBP-1,SREBP-2)的mRNA表达水平。结果:与健康对照组相比,CAD组与CAD合并MS组外周血白细胞SREBP-1 mRNA表达水平显著降低。在所有样本中,SREBP-1与总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(Apo-A1)、胱抑素-C(Cys-C)呈正相关,与高敏C反应蛋白质(hs-CRP)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、同型半胱氨酸(HCY)呈负相关;在疾病样本中,SREBP-1与HDL-C、GSP呈正相关,与HCY、hs-CRP呈负相关。Logistic回归分析显示,SREBP-1可能是CAD合并MS的潜在风险因素[优势比(OR)=0.346,95%可信区间(CI)=(0.191,0.625),P<0.001]。ROC曲线分析显示,单独用SREBP-1预测CAD合并MS严重程度指标时,灵敏度较高但特异度较低;联合HDL-C或Apo-A1预测诊断后,特异度明显升高但灵敏度较低。结论:SREBP-1可能成为诊断CAD合并MS的潜在生物学标志物,与脂代谢指标联合有更大的评估和诊断价值。

氧固醇结合蛋白OSBPL3调节胃癌细胞的自噬和迁移

目的 关于氧固醇结合蛋白OSBPL3在自噬中的作用以及对胃癌迁移的影响鲜有报道。文章旨在探索氧固醇结合蛋白OSBPL3对胃癌细胞自噬和迁移的影响。方法 使用GST-LC3沉淀实验和质谱分析检测LC3的结合蛋白;GST-pulldown实验和免疫共沉淀实验验证OSBPL3与LC3的相互作用;构建OSBPL3过表达胃癌细胞株,Western blot法检测OSBPL3对胃癌细胞自噬的影响;采用小室迁移实验来检测OSBPL3对胃癌细胞迁移的影响。结果 质谱分析、GST-pulldown实验和免疫共沉淀实验均表明OSBPL3与LC3能相互结合;在过表达OSBPL3后,无EGF处理的AGS细胞迁移至小室另一侧的细胞数显著增多[(252.333±28.386)vs(86.333±3.480),P<0.01];在EGF处理下,OSBPL3过表达细胞株的迁移能力相比对照细胞株也有所增强[(281.000±16.643)vs(358.667±43.781),P<0.05]。结论 OSBPL3是一个LC3结合蛋白,并且促进胃癌细胞的自噬和迁移。

HCV NS5A通过抑制p-AMPK并上调固醇调节元件结合蛋白2及HMG-CoA还原酶促进小鼠肝细胞胆固醇合成

已有研究证明,丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)可诱导肝细胞脂肪变性。本文报告,HCV NS5A刺激肝细胞胆固醇合成,引起脂代谢失调,促进肝脂肪变性。首先,我们构建了由小鼠甲胎蛋白增强子和小鼠白蛋白启动子驱动的NS5A及NS5A domainⅠ、Ⅱ和Ⅲ的慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后通过尾静脉注射感染小鼠。小鼠血清总胆固醇测定及肝组织切片苏木精-伊红染色揭示,与模拟注射对照及增强绿色荧光蛋白(EGFP)慢病毒颗粒处理小鼠比较,NS5A慢病毒颗粒处理小鼠血清总胆固醇水平明显升高;肝细胞内脂滴明显增多。免疫组化和RTq PCR分析显示,胆固醇合成的关键调节酶HMG-CoA还原酶(HMGCR)在NS5A慢病毒处理的小鼠肝内表达显著升高。蛋白质印迹结果证明,与模拟注射及EGFP慢病毒颗粒处理的小鼠比较,NS5A慢病毒颗粒处理的小鼠肝细胞磷酸化的腺苷一磷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)水平明显降低,而固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)及其靶基因HMGCR的水平显著升高。进一步研究发现,NS5A domainⅡ慢病毒颗粒处理的小鼠肝细胞p-AMPK、SREBP-2和HMGCR表达水平与全长NS5A慢病毒处理的小鼠相似。上述结果提示,HCV NS5A蛋白可通过抑制AMPK磷酸化激活,上调SREBP-2而促进胆固醇合成的限速酶HMGCR的表达,从而促进小鼠肝细胞胆固醇合成。上述结果还提示,NS5A domainⅡ可能是全长NS5A蛋白调节HMGCR基因表达的有效片段。总之,本研究证明,HCV NS5A可引起胆固醇代谢紊乱,这可能是慢性HCV感染引起肝脂肪变性的机制之一。很遗憾,在本研究中,尚未测定SREBP-1的靶基因乙酰CoA羧化酶(脂肪酸合成的限速酶)的表达,相关实验正在进行中。

小泛素样修饰分子相关蛋白在不同温度糖氧剥夺的SH-SY5Y细胞中的表达

目的:探究不同程度低温与缺氧对小泛素样修饰分子(SUMO)化的影响,分析其变化规律和可能机制,并从SUMO化的角度探讨不同程度低温诱导脑缺血耐受的作用效果。方法:利用前期实验建立的多梯度HCA模型,在37℃、30℃、26℃、18℃条件下对SH-SY5Y细胞进行糖氧剥夺(OGD),免疫印迹检测SUMO1、SUMO2/3、UBC9蛋白的表达情况和结合游离形态变化,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测UBC9基因的表达水平,分析HCA过程中人神经细胞中SUMO相关蛋白的变化规律。

高海拔地区孕妇血清妊娠相关血浆蛋白-A2、胰岛素样生长因子结合蛋白5水平与子痫前期的相关性

目的探讨高海拔地区孕妇血清妊娠相关血浆蛋白-A2(PAPP-A2)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)水平与子痫前期的相关性。方法选取2017年6月—2019年6月收治的子痫前期孕妇76例及正常妊娠孕妇70例为研究对象。比较2组孕妇一般资料;检测2组孕妇妊娠12-15周、32-35周时血清PAPP-A2、IGFBP5水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价孕早期孕妇血清PAPP-A2、IGFBP5水平对子痫前期的诊断价值;采用多因素Logistic模型分析影响子痫前期发生的危险因素。结果子痫前期组孕妇孕周、新生儿体质量低于正常妊娠组,孕32-35周时孕妇收缩压、舒张压及24 h尿蛋白定量水平均高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。孕12-15周、孕32-35周时,子痫前期组孕妇血清PAPP-A2、IGFBP5水平高于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。孕12-15周时,血清PAPP-A2联合IGFBP5诊断子痫前期的曲线下面积(AUC)为0.916,灵敏度和特异度分别为88.16%、84.29%。多因素Logistic分析显示,孕12-15周时血清PAPP-A2(OR=1.528,95%CI为1.141-2.046)、IGFBP5(OR=1.892,95%CI为1.246-2.872)是子痫前期的影响因素(P<0.05)。结论高海拔地区子痫前期孕妇血清PAPP-A2、IGFBP5水平呈高表达。孕早期检测血清PAPP-A2、IGFBP5水平对诊断子痫前期有一定的价值,或可作为预测子痫前期的早期生物标志物。

miR-497-5p靶向沉默核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出

目的观察miR-497-5p对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)靶向调控及其对细胞胆固醇流出的影响。方法生物信息学与荧光素酶报告基因验证miR-497-5p与NLRP1靶向结合。人源THP-1单核细胞经佛波酯及氧化低密度脂蛋白处理后成为泡沫细胞。使用miR-497-5p mimic和miR-497-5p inhibitor处理细胞。实时荧光定量PCR和Western blot检测NLRP1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况。酶联免疫吸附法测定细胞培养液白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量。液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出水平。高效液相色谱法检测泡沫细胞内脂质含量。结果 miR-497-5p mimic能够显著性降低野生型NLRP1 3′UTR报告基因的荧光素酶活性。与对照组相比,miR-497-5p mimic组NLRP1、ASC、Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平明显下调,IL-1β和IL-18分泌明显减少。miR-497-5p mimic较对照组显著促进细胞胆固醇流出,减少细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量。结论 miR-497-5p可能通过靶向调控NLRP1,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞炎症反应并促进胆固醇流出。

苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成及小肠胆固醇转运相关基因表达的影响

目的探讨苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠胆固醇转运相关基因表达的影响,阐明苦瓜蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用机制。方法选用36只6周龄的雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为普食组(对照组)、高脂高胆固醇饲料组(高脂组)、高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组(苦瓜蛋白组)。喂养12周后处死,比较各组血脂水平,苏丹Ⅳ染色观察全主动脉粥样硬化病变程度,主动脉窦冰冻切片油红O染色检测脂质沉积,逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达。结果高脂组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平比对照组明显升高(P<0.05),而苦瓜蛋白组总胆固醇(14.52±1.06 mmol/L比18.21±1.95 mmol/L)、甘油三酯(0.51±0.11 mmol/L比0.92±0.07 mmol/L)和低密度脂蛋白胆固醇(4.12 mmol/L±0.95比7.16±0.98 mmol/L)水平显著低于高脂组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇的水平与高脂组比差异无显著性(P>0.05)。苦瓜蛋白组主动脉斑块面积(31.2%±3.6%比69.6%±4.8%)和主动脉窦脂质面积(26.02±3.07μ?比45.23±11.2μ?)比高脂组显著减少。苦瓜蛋白组小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达都比高脂组明显升高(P<0.05)。结论苦瓜蛋白可通过增加载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的表达,降低血脂水平,减少主动脉斑块及主动脉窦脂质沉积。