八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制研究

目的研究八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制。方法将H9c2细胞分为空白组、模型组和八味沉香散低、中、高剂量组(含药血清剂量依次为2.5、8、12 g/kg)。体外培养H9c2细胞并建立氧糖剥夺损伤模型,含药血清干预后检测细胞存活率,观察细胞形态,检测生化指标乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、呼吸链复合酶Ⅰ(ComplexⅠ)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平,检测细胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,检测氧化应激相关蛋白[Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、NADH氧化还原酶辅酶10(Ndufa10)、硫氧还蛋白(Trx)]、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和细胞色素C(Cytc)]的表达。结果与空白组比较,模型组细胞形态破损,LDH、CK和MDA水平均显著升高(P<0.01),CAT、ComplexⅠ、SOD、GSH-Px水平和线粒体膜电位均显著降低(P<0.01),细胞内ROS含量和凋亡率均显著升高(P<0.01),氧化应激相关蛋白(Keap1、Nrf2、HO-1、Ndufa10和Trx)和促凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3、Cytc)表达水平均显著升高(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05)。给予八味沉香散含药血清后,细胞形态改善,以上指标大部分显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤有较好的保护作用,其机制与降低细胞氧化损伤、抑制细胞凋亡相关。

右美托咪定对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的:研究右美托咪定对PC12细胞氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用及机制。方法:采用缺氧缺糖诱导PC12细胞损伤建立OGD损伤细胞模型,将OGD损伤的细胞分为右美托咪定低、中、高浓度组,溶剂组及模型组,并将正常培养的细胞作为正常对照组。各组细胞处理后采用MTT法检测细胞存活率,相应试剂盒分别检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量和丙二醛(MDA)含量,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Westernblot检测各组细胞中CleavedCaspase-3和PI3K/AKT信号通路相关蛋白总AKT(t-AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率降低,而上清中LDH释放量和MDA含量增多,细胞凋亡率、CleavedCaspase-3和p-AKT蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组相比,右美托咪定能够上调细胞存活率,降低LDH释放量和MDA含量,抑制CleavedCaspase-3和p-AKT蛋白表达水平(P<0.05)。结论:右美托咪定可能通过抑制PI3K/AKT信号通路的活化对氧糖剥夺损伤神经细胞发挥保护作用。

Poly I:C对氧糖剥夺损伤星形胶质细胞TLR3信号通路的影响

目的观察聚肌胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,Poly I:C)对氧糖剥夺损伤(oxygen-glucose deprivation,OGD)星形胶质细胞TLR3信号转导通路的影响,探讨Poly I:C保护神经细胞的作用机制。方法通过缺血缺糖培养12h建立星形胶质细胞氧糖剥夺损伤模型,观察10μg/mL和20μg/mL Poly I:C预孵育对氧糖剥夺损伤星形胶质细胞Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)、磷酸化干扰素调节因子3(phospho-interferon regulatory factor 3,pIRF3)、磷酸化核因子-κB(phospho-nuclear factor-κB,pNF-κB)蛋白表达的影响。结果①与空白对照组相比,星形胶质细胞氧糖剥夺12h后细胞TLR3、pNF-κB蛋白表达升高,而pIRF3蛋白表达无明显变化。②与OGD组相比,Poly I:C预处理组能促进细胞中pIRF3表达,而对细胞TLR3表达无明显影响,pNF-κB表达有下降趋势,但差异无统计学意义。结论 Poly I:C保护神经细胞作用可能与提高氧糖剥夺损伤星形胶质细胞pIRF3蛋白的表达,进而增加下游抗炎因子干扰素-β(IFN-β)的表达有关。

白藜芦醇苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤模型的保护作用

目的探讨白藜芦醇苷对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用。方法以缺氧缺糖诱导PC12细胞损伤模型模拟脑缺血病理的改变,研究白藜芦醇苷对该缺氧缺糖损伤模型的影响。结果白藜芦醇苷能显著减少PC12细胞死亡,降低乳酸脱氢酶漏出量,一氧化氮含量及丙二醛生成,提高超氧化物歧化酶活性。结论白藜芦醇苷对PC12细胞缺氧缺糖损伤具有保护作用。

不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的:观察不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,探讨组方的最佳配比。方法:采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立PC12细胞氧糖剥夺损伤(oxygen glucose deprivation,OGD)模型,将细胞分为空白组、模型组、阳性组(尼莫地平)、辛芍药物不同配比组(灯盏细辛与赤芍质量比分别为5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5),检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量。结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率和SOD活性显著降低(P<0.01),细胞LDH释放量、MDA和NO水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,辛芍2∶3配比组显著提升细胞存活率(P<0.05),同时辛芍3∶2和2∶3配比组均显著降低细胞LDH释放量以及MDA和NO水平(P<0.05),提高SOD活性(P<0.05)。结论:辛芍2∶3配比对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用较好。

右美托咪定通过调控TLR4表达对神经细胞氧糖剥夺损伤保护作用的机制研究

目的探讨右美托咪定调控TLR4表达对神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及其机制。方法体外培养PC12神经细胞,复制氧糖剥夺细胞模型,以低(0. 1μmol/L)、中(1. 0μmol/L)和高剂量(10. 0μmol/L)右美托咪定作用24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达,RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。在复制氧糖剥夺细胞模型中,以TLR4抑制剂TAK-242抑制TLR4表达后,给予右美托咪定作用,观察细胞存活率、Bax蛋白、Bcl-2蛋白、TLR4蛋白、TNF-α含量和IL-6含量的变化。结果低、中和高剂量右美托咪定作用后,PC12细胞存活率升高,Bax和TLR4蛋白表达、TLR4 mRNA表达以及TNF-α和IL-6含量降低,而Bcl-2蛋白表达升高(P<0. 05),且表现出浓度依赖性。TAK-242处理后,TLR4表达降低,PC12细胞存活率升高,Bax蛋白表达以及TNF-α和IL-6含量降低,而Bcl-2蛋白表达升高(P<0. 05);给予右美托咪定作用后,TAK-242的上述作用明显增强(P<0. 05)。结论右美托咪定可通过抑制TLR4表达保护神经细胞氧糖剥夺损伤。

西洋参茎叶皂苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的探讨西洋参茎叶皂苷对PC12细胞在氧糖剥夺损伤中的保护作用及可能机制。方法以缺氧缺糖诱导PC12细胞损伤模型(OGD)模拟脑缺血病理的改变,应用MTT法检测细胞存活率,分光光度计检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,研究西洋参茎叶皂苷对该氧糖剥夺损伤模型的影响。结果与正常对照组比较,模型组PC12细胞在OGD损伤后细胞存活率和SOD活性显著下降(P<0.01),LDH释放量显著增加(P<0.01),MDA和NO水平均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,西洋参茎叶皂苷高、中剂量组可明显提高细胞的存活率(P<0.01)和SOD活性(P<0.01),减少LDH释放(P<0.01),降低MDA和NO水平(P<0.01),差异具有统计学意义。结论西洋参茎叶皂苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤具有保护作用,其保护机制可能与PQS稳定细胞膜,抗氧化损伤及清除自由基的作用有关。

七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤的保护作用

目的观察七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法将符合标准的40片海马脑片随机均分为四组:2%七氟醚后处理组(2%Sev组)、4%七氟醚后处理组(4%Sev组)、6%七氟醚后处理组(6%Sev组)和氧糖剥夺损伤对照组(OGD组)。采用脑片灌注及电生理技术细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(OPS)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度。结果 OGD组OPS恢复程度为(3.14±2.56)%,恢复率为10%,组织损伤率为0.63±0.05;2%Sev组OPS恢复程度为(46.24±29.34)%,OPS恢复率为40%,组织损伤率为0.51±0.06;4%Sev组OPS恢复程度为(62.40±34.93)%,OPS恢复率为60%,组织损伤率为0.41±0.07;6%Sev组OPS恢复程度为(75.92±45.31)%,OPS恢复率为70%,组织损伤率为0.37±0.06。与OGD组比较,2%Sev组、4%Sev组、6%Sev组的OPS恢复程度和OPS恢复率均明显升高,组织损伤率明显降低(P<0.01)。结论七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤具有一定的保护作用。

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制备OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(Ed U)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)%,下降了4倍(P<0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7)U·L-1(P<0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH释放分别下降至290±18和(268±20)U·L-1(P<0.01),细胞Ed U阳性率由OGD模型组的(47±6)%,分别下降到(35±6)%和(29±5)%(P<0.01)。Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P<0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义。结论FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。

二苯乙烯苷对大鼠原代皮层神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：探讨二苯乙烯苷对大鼠皮层神经元氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤的作用。方法：取孕18 d的Sprague-Dawley胎鼠皮层神经元培养7-8 d,进行OGD损伤,同时分别加入二苯乙烯苷（10、20、40μg/m L）和尼莫地平（2.5μg/m L）进行处理。设置空白对照组、OGD组、OGD并加药组（二苯乙烯苷10、20、40μg/m L）以及OGD并尼莫地平阳性对照组。损伤6 h后,用噻唑蓝[3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞活力,乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）法检测LDH释放量,末端脱氧核苷酰基转移酶介导性d UTP切口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP nick end-labeling,TUNEL）法检测细胞的凋亡,免疫蛋白印迹（Western Blot）法检测Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、核转录因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）及其抑制因子IκB和磷酸化的IκB（p-IκB）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、p38及磷酸化的p38（p-p38）的蛋白表达。结果：OGD损伤后大鼠皮层神经元细胞活力显著降低,LDH释放量明显增多,细胞凋亡显著增多;二苯乙烯苷和尼莫地平均可显著抑制这一趋势。OGD损伤引起TLR4、NF-κB、p-IκB/IκB、p-p38/p38和IL-6的异常高表达,二苯乙烯苷明显抑制这些蛋白表达。结论：二苯乙烯苷对OGD诱导的原代皮层神经元损伤的保护作用可能是通过抑制TLR4-NF-κB炎症信号通路和p38通路发挥抗炎抗凋亡效应的。

左归丸含药血清对大鼠海马神经元和胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨左归丸含药血清对大鼠海马神经元和胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及机制。方法:原代培养大鼠海马神经元和胶质细胞混合细胞,分为对照组、模型组、含药血清组和抑制剂组。对照组细胞不做特别处理。模型组细胞给予氧糖剥夺。含药血清组细胞除给予氧糖剥夺+左归丸含药血清。抑制剂组细胞给予氧糖剥夺+左归丸含药血清+雌激素受体(ER)非特异性拮抗剂ICI182780。采用CCK-8法检测各组细胞存活率。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞氧化应激和炎症因子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平。采用Western blot检测TNF-α、IL-1β、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组细胞存活率、GSH-Px水平下降,MDA、TNF-α、IL-1β水平升高,Bcl-2、磷酸化磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达下降,Bax、Caspase-3蛋白表达增加(均P<0.05)。与模型组比较,含药血清组细胞存活率、GSH-Px水平增加,MDA、TNF-α、IL-1β水平下降,Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达显著上调,Bax、Caspase-3蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论:左归丸含药血清对大鼠海马神经元和胶质细胞氧糖剥夺损伤具有保护作用,其机制与调控氧化应激、炎性反应及PI3K/AKT通路有关。

表没食子儿茶素对小鼠离体脑片及氧糖剥夺损伤HT-22细胞系的保护作用

目的研究表没食子儿茶素(EGC)对小鼠离体脑片及海马神经元HT-22细胞系氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法采用小鼠脑片及海马神经元HT-22细胞系离体培养,应用OGD建立缺血损伤模型,分为正常对照组、模型对照组、 EGC小剂量组(1 mg·L^-1)、EGC中剂量组(3 mg·L^-1)、EGC大剂量组(10 mg·L^-1)。2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,CCK-8细胞活力测定,检测脑片和HT-22细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与正常对照组比较,模型对照组小鼠皮层及海马TTC染色吸光度值(A490)显著降低,LDH释放显著增高,SOD活力明显下降。与模型对照组比较,EGC小、中、大剂量组TTC染色A490的降低明显逆转(P<0.01),LDH释放量减少(P<0.01或P<0.05)。EGC干预可剂量依赖性地提高OGD后海马及皮层中SOD的活力(P<0.01)。3 mg·L^-1 EGC可逆转细胞模型缺血引起HT-22细胞活力下降及SOD活力降低。结论 EGC对小鼠离体脑片及HT-22细胞系OGD损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与提高组织及细胞中的SOD活力有关。

可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用。方法取培养8 d的皮质神经元,分为正常对照组、模型对照组、可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)预处理组。神经元氧糖剥脱损伤模型通过化学性缺氧、孵育液缺糖的方法建立。神经元损伤程度采用噻唑蓝(MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放量来进行评价,观察预给予可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)对神经元损伤的保护作用。结果显微镜下,正常对照组细胞密集,胞体饱满,边缘光滑,有较强折光性;神经元存活率(100.00±32.12)%,LDH释放比率(100.00±37.51)%。模型对照组细胞核固缩,细胞膜不完整,折光性差,MTT染色吸光度值明显降低,神经元存活率(53.61±7.62)%,LDH释放量显著增加,释放率为(166.07±9.65)%。可乐定(1.0,3.0,10μmol·L-1)预处理可明显逆转ODG损伤所致细胞形态的改变,剂量依耐性升高MTT染色吸光度值,神经元存活率分别为(67.53±10.54)%,(71.50±9.79)%和(87.48±5.29)%,同时可明显降低LDH的释放量,释放率分别为(136.45±25.72)%,(130.92±24.94)%和(121.63±32.68)%。结论可乐定对原代培养大鼠皮质神经元ODG损伤具有良好的保护作用。

右美托咪定对神经元氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定(Dex)对皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的神经保护作用及其可能机制。方法培养孕18 d的SD大鼠胎鼠皮质神经元细胞,随机分为对照组(Sham组,加入有糖细胞外液置于正常培养箱中培养)、模型组(OGD/R组,加入无糖细胞外液,置于37℃厌氧箱中培养制备OGD/R细胞模型)、阳性药物对照组(OGD/R+LW6组,OGD/R模型细胞加入1 mmol/L的LW6处理1 h)、OGD/R+低浓度Dex组(OGD/R模型细胞加入0.1μmol/L Dex处理1 h)、OGD/R+高浓度Dex组(OGD/R模型细胞加入1.0μmol/L Dex处理1 h)。应用CCK-8比色法、免疫荧光方法检测各组细胞的存活率,Western blot方法检测各组低氧诱导因子1α(HIF-1α)、激活转录因子-6(ATF-6)及下游靶点C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平。结果CCK-8比色及免疫荧光染色结果显示,各组神经元存活率差异有显著性(F=63.46,P<0.05);两两比较显示,OGD/R组神经元存活率较Sham组显著降低(P<0.05),OGD/R+高浓度Dex组神经元存活率较OGD/R组显著提高(P<0.05)。Western blot结果显示,各组神经元HIF-1α、ATF-6、CHOP蛋白表达差异有显著性(F=80.30~155.36,P<0.05);两两比较显示,OGD/R组HIF-1α、ATF-6、CHOP蛋白表达较Sham组升高(P<0.05),OGD/R+高浓度Dex组HIF-1α、ATF-6、CHOP蛋白表达较OGD/R组降低(P<0.05)。结论Dex通过抑制HIF-1α表达对OGD/R损伤的神经元模型发挥保护作用。

Cu-ATSM保护内皮细胞糖氧剥夺再灌注损伤的机制

目的:探讨铜-二乙酰-2(N4-甲基氨基硫脲)(Cu-ATSM)对糖氧剥夺再灌注(OGD/R)后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的作用及其潜在机制。方法:将体外培养的HUVECs分为Control组、OGD/R组、OGD/R+Cu-ATSM组;采用流式细胞术检测HUVECs的凋亡情况;采用Mito-tracker染色检测线粒体形态;JC-1染色分析各组线粒体膜电位的变化;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组自噬相关蛋白如ATG5、Beclin1、LC3Ⅰ/Ⅱ的激活情况;采用免疫荧光检测各组细胞LC3Ⅱ的表达情况。结果:流式细胞术结果显示,与Control组比,OGD/R损伤后HUVECs凋亡数目显著上升,而当Cu-ATSM治疗后,凋亡的HUVECs显著减少(均P<0.05)。Mito-tracker及JC-1染色结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后线粒体的形态明显受到损伤,线粒体功能受损,膜电位下降,而OGD/R+Cu-ATSM组治疗后能够改善损伤的线粒体功能,维持线粒体形态和线粒体膜电位(均P<0.05)。Western blot结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后自噬相关信号通路如ATG5、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达量增多,而OGD/R+Cu-ATSM组治疗后的自噬相关蛋白表达量较OGD/R组下降(均P<0.05)。免疫荧光结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后LC3Ⅱ的表达显著增多,而OGD/R+Cu-ATSM治疗后的LC3Ⅱ显著减少。结论:Cu-ATSM能够改善HUVECs OGD/R损伤后的线粒体功能,减少HUVECs凋亡,其机制可能是通过抑制自噬实现的。

瑞马唑仑通过Keap1/Nrf2信号通路减轻大鼠神经元氧糖剥夺–复氧复糖损伤

目的:探讨瑞马唑仑是否通过激活Keap1/Nrf2通路减轻海马神经元氧糖剥夺–复氧复糖损伤的功能。方法:取SD大鼠乳鼠海马神经元培养至第8天,采用随机数字表法分为5组:对照组(C组)、模型组(M组)、氧糖剥夺–复氧复糖+瑞马唑仑组(R组)、氧糖剥夺–复氧复糖 + 瑞马唑仑 + 二甲基亚砜组(V组)、氧糖剥夺–复氧复糖 + 瑞马唑仑 + 鸦胆子苦醇组(B组),缺氧6 h后复氧20 h建立缺氧复氧模型,瑞马唑仑于复氧时加入,终浓度100 μM,鸦胆子苦醇及二甲基亚砜在缺氧前4 h加入,鸦胆子苦醇终浓度为500 nM,二甲基亚砜浓度<0.1%。复氧结束后检测CCK8细胞活性,细胞凋亡率,ROS水平,Nrf2、Keap1、Bcl2、Bax蛋白水平,免疫荧光检测Nrf2核转位及线粒体形态。结果:与C组比较,M组细胞活力降低,凋亡率及ROS活性升高,Bax蛋白水平升高,Nrf2、Keap1、Bcl2蛋白水平降低,Nrf2核转位增加,线粒体碎片化程度加重;与M组比较,R组的细胞活力升高,细胞凋亡率及ROS活性降低,Bax蛋白水平降低,Nrf2、Keap1、Bcl2蛋白水平升高,Nrf2核转位增加,线粒体碎片化程度减轻;V组与R组间无统计学差异;与V组比较,B组细胞活力降低,凋亡率及ROS活性升高,Bax蛋白水平升高,Nrf2、Keap1、Bcl2蛋白水平降低,Nrf2核转位减少,线粒体碎片化程度加重。结论:瑞马唑仑可激活Keap1/Nrf2通路,减少ROS蓄积及线粒体损伤,进而减少细胞凋亡,减轻大鼠海马神经元氧糖剥夺–复氧复糖损伤。

佛手苷内酯通过调控长链非编码RNA阿片样受体基因表达对糖氧剥夺诱导的PC12细胞损伤的影响

目的研究佛手苷内酯(BG)是否通过调控长链非编码RNA(lncRNA)阿片样受体基因(Oprm1)表达保护糖氧剥夺(OGD)诱导的PC12细胞损伤。方法将PC12细胞分为对照组(Con)、OGD组、OGD+BG低浓度(BG-L)组、OGD+BG中浓度(BG-M)组、OGD+BG高浓度(BG-H)组、OGD+pcDNA组、OGD+pcDNA-Oprm1组、OGD+BG+si-NC组和OGD+BG+si-Oprm1组。试剂盒测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。流式细胞术分析细胞凋亡率。Real-time PCR分析Oprm1表达水平。结果与Con组比较,OGD组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。与OGD组比较,OGD+BG-L组、OGD+BG-M组、OGD+BG-H组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+pcDNA组比较,OGD+pcDNA-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+BG+si-NC组比较,OGD+BG+si-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。结论BG可减轻OGD诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调lncRNA Oprm1表达有关。

Caspase抑制剂对体外氧糖剥夺损伤大鼠海马神经元的保护作用

目的 探讨Caspase抑制剂对体外氧糖剥夺损伤大鼠海马神经元的保护作用及机制. 方法 新生SD乳鼠海马神经元经体外原代培养7d后分为对照组、氧糖剥夺/复氧组、Caspase抑制剂苄氧羰基-缬氨酰-丙氨酰-门冬氨酰氟甲基酮（Z-VAD-FMK）组和二甲基亚砜（DMSO）组,其中氧糖剥夺/复氧组氧糖剥夺6h后复糖复氧,Z-VAD-FMK组在氧糖剥夺复氧过程中加入20 μmol/L Z-VAD-FMK,DMSO组在氧糖剥夺复氧过程中加入1‰药物溶媒DMSO.复氧复糖24 h后光镜及电镜下观察各组海马神经元的形态学变化,MTT比色法测定细胞存活率和培养液中乳酸脱氢酶（LDH）含量,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测神经元凋亡率,比色法测定神经元Caspase-3活性,Western blotting法分析Caspase-3活性蛋白表达. 结果 氧糖剥夺/复氧组细胞胞体肿胀,部分胞膜破裂,细胞完整性破坏,细胞核水肿,线粒体肿胀,嵴排列混乱;Z-VAD-FMK组细胞损伤较氧糖剥夺/复氧组减轻,大多数神经元形态完整,细胞内颗粒增多,细胞器肿胀减轻,线粒体嵴结构存在,分布较规则.与氧糖剥夺/复氧组比较,Z-VAD-FMK组海马神经元吸光度值（0.204±0.019 vs 0.303±0.018）及细胞存活率（0.481％±0.045％vs 0.704％±0.040％）明显增高,LDH含量[（406.500±21.286） U/L vs（326.000±20.278） U/L]明显降低,细胞凋亡率（49.700％±3.100％vs 29.820％±2.839％）明显降低,反应Caspase-3活性片段的吸光度值明显降低,Caspase-3活性蛋白表达（1.070±0.077 vs 0.785±0.058）明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）. 结论 Caspase抑制剂可通过抑制Caspase-3蛋白活性,减轻海马神经元的体外氧糖剥夺损伤.

龙胆苦苷对新生大鼠氧糖剥夺再灌注损伤海马神经元Caspase-3、Bax和Bcl-2表达的影响

目的探讨龙胆苦苷(GP)对新生大鼠氧糖剥夺再灌注损伤海马神经元的抗凋亡保护作用及机制。方法采用无糖培养基加缺氧法建立原代新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤模型,同时给予不同浓度的龙胆苦苷进行干预。应用Hoechst 33342染色法检测神经细胞的凋亡,并计算凋亡率;化学比色法测定神经细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;RT-PCR和Western blotting技术检测凋亡相关因子Caspase-3、Bax和Bcl-2 m RNA和蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组Hoechst 33342染色神经元凋亡率明显升高,LDH漏出率增加,Caspase-3、Bax m RNA和蛋白的表达水平上调,Bcl-2 m RNA和蛋白的表达水平下降。与模型组比较,龙胆苦苷(40、20、10mg/L)可显著降低氧糖剥夺再灌注损伤神经元的凋亡率和LDH漏出率;龙胆苦苷(40mg/L)可明显抑制Caspase-3、Bax m RNA和蛋白的表达,升高Bcl-2 m RNA和蛋白的表达。结论龙胆苦苷对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤所诱发的神经细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2表达,抑制Caspase-3、Bax表达有关。

体外氧糖剥夺损伤诱导信号转导和转录激活因子-3信号通路在海马神经元中的动态变化

目的观察体外培养的大鼠海马神经元经氧糖剥夺损伤后信号转导和转录激活因子一3（signaltransducerandactivatoroftranscriptionfactor-3，STAT3）磷酸化及其核转移，探讨体外模拟的脑缺氧、缺血损伤细胞模型中STAT3信号通路的动态变化。方法选择新生24h内sD大鼠，取双侧海马神经元，用DMEM／F12培养基培养9d，氧糖剥夺处理4h，建立海马神经元氧糖剥夺损伤模型。运用免疫荧光技术，在激光共聚焦扫描显微镜下观察磷酸化STAT3（P—STAT3）的表达部位。采用Westernbloting技术检测海马神经元氧糖剥夺后不同时相点P—STAT3表达强度的变化。结果对照组P—STAT3在胞核表达不明显；而模型组在建模后1hP—STAT3在胞核内即有表达，3h达到高峰，各时相点与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论氧糖剥夺损伤诱导海马神经元胞核中P—STAT3水平明显升高，提示海马神经元氧糖剥夺损伤后STAT3信号转导通路被过度激活。