miR-485-5p靶向氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关键。多项研究表明,微RNA(microRNAs,miRNAs)的异常表达与肿瘤的发生相关。已有报道显示,miRNA-485-5p(miR-485-5p)在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但其在前列腺癌中的作用在较大程度上仍未可知。本研究旨在探究miR-485-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用与机制。生物信息学预测和qRT-PCR检测发现,miR-485-5p在前列腺癌中表达下调。平板克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验证明,转染miR-485-5p模拟物显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。生物信息学预测、双荧光素酶报告法、Western印迹和qRT-PCR检测证实,氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase,OGT)是miR-485-5p的一个下游直接靶标。进一步的分析和检测显示,OGT在前列腺癌中呈高表达,转染OGT的siRNA能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,同时有效逆转转染miR-485-5p抑制物所发挥的促癌作用。综上所述,miR-485-5p可以通过负向调控OGT进而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释miR-485-5p在前列腺癌中发生发展的作用和机制,可为寻找前列腺癌的治疗靶点提供实验依据。

X连锁基因O连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)在胎儿性别偏倚的妊娠期相关疾病中的研究进展

男性和女性胎儿对多种疾病(包括认知障碍、代谢性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病等)的敏感性不同。男性胎儿对产前应激更为敏感,如妊娠期压力、母体感染和药物暴露,这些应激会给男性胎儿带来代谢、认知和行为缺陷,并且通常表现出比女性胎儿更严重的疾病结果,也会增加疾病表现的终生风险。X连锁基因O连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)被鉴定为性别特异性胎盘生物标记物,可能是疾病中性别差异的驱动因素。本文就胎盘OGT在胎儿性别差异而造成的妊娠相关疾病发展差异相关的研究进展综述。

3,8'-联芹菜苷元通过抑制氧连接氮乙酰葡糖胺转移酶(OGT)降低HeLa细胞迁移侵袭潜能

目的筛选具有氧连接氮乙酰葡糖胺转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase,OGT)抑制活性的天然产物化合物,分析其抗肿瘤细胞迁移侵袭活性。方法对10种四氢穗花杉双黄酮天然产物类似物与OGT进行分子对接结合能分析,在无细胞反应体系中比较这些化合物的OGT抑制活性;Western blot法检测3,8'-联芹菜苷元对人宫颈癌细胞系HeLa氧连接氮乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)修饰的抑制情况;采用细胞划痕和Transwell法观察3,8'-联芹菜苷元对HeLa细胞迁移侵袭潜能的影响。结果3,8'-联芹菜苷元具有优于四氢穗花杉双黄酮的OGT结合能和抑制活性,以时间和浓度梯度方式抑制OGT活性,降低HeLa细胞内的O-GlcNAc修饰,抑制HeLa细胞的迁移侵袭潜能。结论3,8'-联芹菜苷元能够抑制OGT活性,降低细胞内蛋白质的O-GlcNAc修饰,进而阻止肿瘤细胞迁移侵袭。

O-GlcNAc转移酶在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨氧连氮-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)在原发性肝细胞癌(HCC)组织、细胞及血清中表达情况,阐明OGT在HCC的诊断和治疗中的意义。方法:采用Western blotting法分别检测20例HCC组织和癌旁组织中以及8例肝癌细胞株和正常人肝细胞裂解物中OGT蛋白表达水平,采用直接酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测20名健康志愿者、肝硬化(LC)、HCC患者血清中OGT蛋白表达水平,分析HCC组织、细胞、血清中OGT蛋白表达水平与肿瘤发生发展的关系。结果:Western blotting检测,OGT在HCC肿瘤组织及相对应癌旁组织中均有表达,HCC患者肿瘤组织中OGT阳性表达率高于相对应癌旁组织(P<0.05);同时OGT在肝细胞癌株及正常人肝细胞裂解物中均有表达,而肝细胞癌株中阳性表达率高于正常人肝细胞裂解物(P<0.05)。ELISA法检测,HCC和LC患者血清中OGT表达水平均高于健康志愿者(P<0.05)。结论:OGT在HCC肿瘤组织中表达升高,OGT有望成为HCC新的诊断靶点。

OGT在胰腺癌中表达及预后的相关研究

目的:胰腺癌(Pancreatic cancer, PC)是一种高度侵袭性的恶性肿瘤,对患者的生存率造成严重威胁。越来越多的研究表明,糖基化修饰在胰腺癌的发生和发展中扮演着关键角色。O-连接β-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase, OGT)是糖基化的关键调节者,其异常表达与多种癌症相关。本研究旨在探究OGT在胰腺癌中的异常表达,并分析其与胰腺癌预后的相关性。方法:回顾性收集2017年1月至2021年1月就诊于青岛大学附属医院确诊胰腺癌且行手术治疗患者的临床及组织病理资料。临床资料包括患者年龄、性别、身体质量指数(Body mass index, BMI)、烟酒史、糖尿病病史、家族史、肿瘤大小、位置、TNM分期、组织浸润及器官转移情况、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen, CEA)、糖类抗原19-9 (Carbohydrate antigen19-9, CA19-9)水平等信息。应用免疫组织化学染色的方法检测癌组织及癌旁胰腺导管组织中OGT的表达水平,并根据表达量的高低分为高表达组和低表达组,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果:1) 胰腺癌组织中OGT的表达水平与癌旁组织的表达水平之间存在显著统计学差异(P P P > 0.05)。3) 生存分析表明,OGT的表达水平与患者不良预后存在明显相关性(P = 0.029)。结论:胰腺癌组织中OGT表达水平明显增加,OGT的高表达与淋巴结转移、TNM分期正相关。胰腺癌中OGT的高表达与胰腺癌患者不良预后相关。

RNAi抑制食管癌细胞Eca-109中OGT的表达研究

目的:研究RNAi表达载体对食管癌细胞Eca-109中OGT基因表达的抑制作用。方法:构建针对OGT基因的干扰载体,用质粒转染食管癌细胞Eca-109,RT-PCR分析干扰载体对OGT基因的抑制情况,Western blot分析干扰后OGT蛋白的表达情况。结果:OGT基因在食管癌细胞Eca-109中高表达,三个干扰序列中瞬时转染干扰载体RNAi-OGTB-Eca109的干扰效率最高,可达80%。稳转干扰OGT蛋白水平抑制率65.21%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05),O-GlcNAc水平下降(RL2反映)率37.5%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:用RNAi表达载体可以有效抑制食管癌细胞Eca-109中OGT基因的表达。

OGT蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨OGT蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其与临床病理的关系。方法:收集66例ESCC组织标本及其癌旁组织标本,免疫组化法测定OGT蛋白的表达。结果:OGT在ESCC组织的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),OGT的高表达与TNM分期、病理分级相关(P<0.05),而与性别、年龄及淋巴结转移无相关性(P>0.05)。结论:OGT在食管癌组织中表达增高,提示OGT的异常高表达在食管癌的发生发展中起重要作用。

EOGT介导的O-GlcNAc修饰对Notch信号通路的影响及其在疾病中的作用

O-连接-N-乙酰氨基葡萄糖(O-linked-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)修饰是一种特殊的翻译后修饰,在众多细胞过程中发挥调节作用,例如转录、胞内信号转导、内吞作用和蛋白质稳定性。表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)结构域特异性O-GlcNAc转移酶(EGF domain-specific O-linked-N-acetylglucosamine transferase,EOGT)是一种内质网(endoplasmic reticulum,ER)驻留蛋白质,能够对含有EGF结构域的分泌或膜(跨膜)糖蛋白丝氨酸/苏氨酸残基进行糖基化修饰。Notch信号通路是一种普遍存在的细胞间通讯过程,通过邻近细胞间的相互作用调节细胞生物过程。目前,已经在多种人类疾病中发现有EOGT介导的O-GlcNAc修饰参与,并且通常与Notch信号通路相关。然而,其中具体分子机制尚未完全阐明。本文对近年来EOGT介导的O-GlcNAc修饰,以及相关Notch信号通路在多种人类疾病中的作用研究现状进行简要回顾。

大鼠脊髓神经元细胞核中TET3与OGT相互作用的分析与鉴定

目的分析与鉴定大鼠脊髓神经元细胞核中10-11易位蛋白3(TET3)与氧连氮-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)的相互作用。方法原代培养大鼠脊髓神经元并提取总RNA,采用RT-PCR法获得TET3和OGT基因片段。采用DNA重组技术在TET3、OGT蛋白编码序列的羧基端融合Flag和HA标签蛋白,构建pcDNA3.0-TET3-Flag-HA和pcDNA3.0-OGT-Flag-HA重组融合蛋白质粒,经双酶切验证后分别转染大鼠脊髓神经元。48 h后提取神经元核蛋白,采用Western blot法验证融合蛋白TET3-Flag-HA和OGT-Flag-HA;采用串联亲和纯化法富集与TET3或OGT结合的蛋白复合物,经电泳分离和质谱分析筛选出与TET3或OGT相互作用的候选蛋白,并采用免疫共沉淀进行验证。结果证实重组融合蛋白质粒pcDNA3.0-TET3-Flag-HA和pcDNA3.0-OGT-Flag-HA构建成功,融合蛋白TET3-Flag-HA和OGT-Flag-HA在大鼠脊髓神经元细胞核中表达。在大鼠脊髓神经元细胞核中,与TET3相互作用蛋白是OGT,与OGT相互作用蛋白包括TET3和视网膜母细胞瘤结合蛋白5。结论TET3与OGT在大鼠脊髓神经元细胞核中形成复合体,可能参与调控相关功能蛋白的转录表达。

miR-107对宫颈癌细胞系HeLa生物学行为的影响

目的探讨miR-107调控氧连接氮乙酰葡萄糖胺转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase, OGT)对宫颈癌细胞HeLa增殖、迁移和侵袭的影响。方法 40例宫颈癌患者均行手术治疗,取其手术切除的宫颈癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测2种组织miR-107和OGT mRNA相对表达量。对数生长期宫颈癌细胞HeLa随机分为对照组、模拟剂对照组、模拟剂组、抑制剂对照组、抑制剂组,对照组细胞正常培养,模拟剂对照组、模拟剂组、抑制剂对照组、抑制剂组细胞分别转染mimic-NC、miR-107 mimic、inhibitor-NC、miR-107 inhibitor,转染48 h后,采用MTT法检测细胞存活率,采用划痕实验检测细胞迁移距离,采用Transwell法检测侵袭细胞率,采用Western blot法检测细胞OGT、上皮钙黏蛋白、神经钙黏蛋白相对表达量,采用双荧光素酶报告基因法检测miR-107与OGT的靶向关系。结果宫颈癌组织miR-107相对表达量(3.53±0.17)低于癌旁组织(14.82±0.22)(P<0.05),OGT mRNA相对表达量(7.49±0.25)高于癌旁组织(5.38±0.24)(P<0.05);模拟剂组细胞存活率[(47.53±3.36)%]、划痕愈合百分比[(12.62±2.11)%]低于对照组[(99.93±1.02)%、(26.40±2.16)%]、模拟剂对照组[(99.85±2.11)%、(25.73±2.24)%]、抑制剂组[(99.96±3.24)%、(75.33±3.50)%](P<0.05),侵袭细胞数[(23.40±5.16)个]少于对照组[(82.83±6.47)个]、模拟剂对照组[(79.61±6.28)个]、抑制剂组[(121.44±5.10)个](P<0.05);抑制剂组细胞划痕愈合百分比高于对照组、抑制剂对照组[(26.48±3.02)%](P<0.05),侵袭细胞数多于对照组、抑制剂对照组[(80.93±5.08)个](P<0.05),细胞存活率与抑制剂对照组[(99.93±2.16)%]、对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。模拟剂组细胞OGT、神经钙黏蛋白相对表达量低于对照组、模拟剂对照组、抑制剂组(P<0.05),上皮钙黏蛋白相对表达量高于对照组、模拟剂对照组、抑制剂组(P<0.05);抑制剂组细胞OGT、神经钙黏蛋白相对表达量高于对照组、抑制剂对照组(P<0.05),上皮钙黏蛋白相对表达量低于对照组、抑制剂对照组(P<0.05);以上指标对照组、模拟剂对照组、抑制剂对照组组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-107可靶向OGT。结论宫颈癌组织miR-107呈低表达,miR-107过表达可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能是通过抑制OGT蛋白表达逆转上皮-间质转化发挥调控作用。

敲减OGT对肝细胞脂肪合成的作用研究

目的探讨敲减N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)对肝细胞脂肪合成的影响。方法建立L02正常肝细胞脂肪变模型,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测OGT及O-连接糖基化(O-GlcNAc)表达。建立L02细胞OGT敲减细胞系,油酸诱导后检测其脂质形成能力。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测脂肪合成相关酶的mRNA和蛋白表达。采用独立样本t检验。结果Western blot显示L02细胞脂肪变后OGT及O-GlcNAc表达均升高(P<0.05)。shOGT慢病毒感染L02细胞后,OGT mRNA相对表达水平明显下调(P<0.01)。油红O染色显示,L02 shOGT细胞内脂质减少,qRT-PCR显示系列脂肪合成酶:乙酰辅酶A羟化酶、脂肪酸合成酶和硬脂酰辅酶A去饱和酶mRNA相对表达水平均降低,差异具统计学意义(P值均<0.05),蛋白水平与mRNA相对表达量一致。结论敲减OGT后可通过降低O-GlcNAc水平抑制肝细胞脂肪合成。

蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰的生物合成途径与检测方法

蛋白质氧连-N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)糖基化修饰,是一种重要的蛋白质翻译后修饰(PTM),广泛存在于细胞核和细胞质中。蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰,由O-GlcNAc转移酶(OGT)和O-GlcNAc水解酶(OGA)共同维持细胞内糖基化水平稳定,动态调节细胞信号转导途径中多种酶的功能,在许多生命活动中发挥着重要调节作用,并与多种代谢性疾病,如妊娠期糖尿病等的发生密切相关。笔者拟就蛋白质O-GlcNAc糖基化的生物合成途径、检测方法的最新研究进展进行综述。