基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶信号通路探讨胆宁片干预非酒精性脂肪性肝病的作用及机制

目的基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶(IRE1α/JNK)信号通路,探讨胆宁片对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的作用及机制。方法将32只SD大鼠随机分为正常饮食组(A组,等体积生理盐水,8只)和高脂饮食组(24只);高脂饮食组大鼠喂养10周复制NAFLD模型成功后,再随机分为模型组(B组,等体积生理盐水)、多烯磷脂酰胆碱组[C组,142.5 mg/(kg·d)]和胆宁片组[D组,562.5 mg/(kg·d)],各8只。各组小鼠均灌胃相应药物干预6周。测定大鼠的体质量、血糖(GLU);采用苏木精-伊红染色(HE)法观察大鼠肝组织病理形态变化,采用油红染色法观察肝组织脂质沉积;检测血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测肝组织IRE1α、JNK1、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)的蛋白表达水平。结果与B组比较,D组大鼠血糖和TC,TG,LDL-C,NEFA,ALT,AST水平均显著降低(P<0.01),血清INS和HDL-C水平显著升高(P<0.01);脂肪变性程度及细胞肿胀明显减轻,脂滴空泡体积缩小,数量减少;肝脏IRE1α,JNK1,p-IRS1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论胆宁片可能通过下调IRE1α/JNK信号通路,减轻肝脏脂肪变性,从而改善NAFLD。

c-Jun氨基末端激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导腹主动脉瘤小鼠模型中的作用机制研究

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)小鼠模型中的作用机制。方法将C57BL/6 ApoE-/-(ApoE knock out,ApoE KO)雄性小鼠随机分为3组,假性手术组、模型组和抑制剂组;假性手术组背部肩胛间皮下手术植入预装生理盐水微量缓释泵,模型组、抑制剂组小鼠背部肩胛间皮下手术植入AngⅡ的痕量缓释泵(1000 ng/(min·kg)),造模周期为28 d,抑制剂组术前48 h腹腔注射JNK抑制剂SP600125(2 mg/kg)1 mL/d进行预处理,假性手术组和模型组给予等体积的生理盐水。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察小鼠炎性反应指标,双氯荧光素(2′,7′-dichlorfluorescein-diacetate,DCFH-DA)染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的荧光强度,蛋白免疫印迹检测p-JNK、p-c-Jun蛋白表达。结果与假性手术组相比,模型组小鼠AAA病理症状明显,AAA组织中绿色荧光明显增强,ROS含量明显升高,p-JNK及p-c-Jun的表达出现了明显的增强,差异均具有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比,抑制剂组小鼠AAA病理症状相对好转,AAA组织中荧光强度明显减弱,ROS含量明显降低,p-JNK及p-c-Jun的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论JNK信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导小鼠腹主动脉瘤模型中起着重要的调控作用,抑制该通路能抑制氧化应激反应,改善AAA症状。

探讨降糖消渴颗粒对高脂饮食诱导2型糖尿病肾脏氨基末端激酶信号通路的影响

目的:运用降糖消渴颗粒治疗高脂饮食诱导2型糖尿病并探讨其对肾脏氨基末端激酶信号通路的影响。方法:72只Wistar大鼠,在SPF级条件下饲养,根据随机数字表法分为干预组、对照组和正常对照组,每组24只,通过链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg腹腔注射协同高脂饮食诱导2型糖尿病进行动物造模,造模后干预,正常对照组予标准饲料;对照组予高糖高脂饲料;干预组予高糖高脂饲料,降糖消渴颗粒根据大鼠体重9 g/kg的计算灌胃剂量,1次/d。疗程8周。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测大鼠的血糖(Glu)、三酰甘油(TG),总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr);常规HE染色,观察各组肾脏结构变化;实时荧光聚合酶链式反应(q-PCR)检测肾组织中氨基末端激酶(JNK)和胰高血糖样肽-1(GLP-1)mRNA的表达,蛋白质印迹法(Western Blot)检测肾组织中JNK信号通路的激活情况情况,JNK、磷酸化氨基末端激酶(p-JNK)和GLP-1的蛋白表达情况。结果:1)干预组经治疗后Glu、TC、TG和Scr较对照组显著下降(P<0.05)。2)干预组较对照组明显改善肾小球结构改变的情况(P<0.05)。3)与正常对照组比较,对照组中p-JNK蛋白表达显著升高(P<0.05),GLP-1基因和蛋白显著降低(P<0.05);经治疗后干预组p-JNK蛋白较对照组降低(P<0.05),而GLP-1基因和蛋白升高(P<0.05)。结论:降糖消渴颗粒可调节糖、脂质代谢,发挥保护肾脏作用,其作用机制可能与抑制JNK信号通路,上调GLP-1有关。

c-Jun氨基末端激酶信号通路在大鼠脑缺血再灌注过程中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在大鼠脑缺血再灌注过程中所发挥的作用。方法雄性SD大鼠108只,体重290-310 g,随机分成假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组),分别于缺血前30 min侧脑室注射10 mL/L二甲基亚砜(DMSO)1、0 mL/L DMSO及JNK抑制剂SP600125。每组再根据再灌注时间分为2、6、12、24、487、2 h 6个亚组,每亚组6只动物。采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在预定时间点行灌注、固定、取脑、石蜡包埋切片;免疫组化方法检测p-JNK的表达变化,光镜下计数海马CA1区存活细胞,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果脑缺血再灌注后海马CA1区p-JNK在IR组有明显表达,于再灌注2 h时即明显升高,6 h时略有降低,后逐渐上升,24 h到高峰,之后表达量减小。SP组p-JNK的表达则无明显增高,各时点与IR组比较均有显著性差异(P<0.01)。海马CA1区神经元存活数目SP组明显高于IR组(P<0.01),凋亡指数显著低于IR组(P<0.01)。结论在大鼠全脑缺血再灌注损伤过程中,JNK信号通路发挥了重要作用,抑制JNK通路的激活可对脑缺血再灌注损伤导致的细胞损伤起到保护作用。

c-Jun氨基末端激酶信号通路抑制对白细胞介素-1诱导的大鼠椎间盘纤维环细胞基因表达的影响

目的研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路抑制对白细胞介素-1(IL-1)诱导的大鼠椎间盘纤维环细胞基因表达的影响,为阻止椎间盘退变提供新的治疗靶点。方法分离培养大鼠尾椎纤维环细胞,IL-1刺激纤维环细胞后,Western blot检测JNK信号通路的激活;传代的纤维环细胞培养48 h后,以IL-1(10 ng/ml)加或不加JNK通路抑制剂SP600125刺激24 h,Real-Time PCR检测JNK通路抑制对IL-1诱导的大鼠纤维环细胞基因表达的影响。结果 JNK通路抑制可显著抑制IL-1引起的诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(Cox-2)和基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13表达上调,同时,可显著逆转IL-1引起的Ⅰ型胶原和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达下调。结论 JNK通路抑制可作为阻断IL-1诱导的椎间盘退变的治疗靶点。

恩格列净通过c-Jun氨基末端激酶信号通路改善2型糖尿病性骨质疏松症的机制研究

目的探讨恩格列净通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路改善2型糖尿病性骨质疏松症(T2DOP)的机制。方法将大鼠随机分为假手术组(sham组)、T2DOP组、EM组(予恩格列净干预)和EM+Anisomycin组(予EM+JNK激活剂Anisomycin干预),每组各10只。收集4组大鼠体重、血糖、血酸水平、骨代谢指标及股骨生物力学特征。采用Micro-CT测定股骨显微结构;HE染色检测股骨组织病理学变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织中氨基末端激酶1(JNK1)、磷酸化JNK1(p-JNK1)、c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)蛋白表达水平并分组进行比较。结果T2DOP组大鼠体重明显低于sham组,空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显高于sham组;EM组大鼠体重明显高于T2DOP组,FPG、TG、TC及LDL-C水平均明显低于T2DOP组,TG、TC及LDL-C水平均明显高于sham组;EM+Anisomycin组大鼠体重明显低于EM组,FPG、TG、TC及LDL-C水平均明显高于EM组(P<0.05)。T2DOP组大鼠血清骨特异性转录因子(CBF-α1)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PⅠNP)、骨钙素(OC)及Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、骨小梁骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)均明显低于sham组,骨小梁间隔(Tb.Sp)高于sham组;EM组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP、OC及CTX-1水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显高于T2DOP组,Tb.Sp低于T2DOP组;EM组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP及OC水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显低于sham组,CTX-1水平及Tb.Sp均高于sham组;EM+Anisomycin组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP、OC及CTX-1水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显低于EM组,Tb.Sp高于EM组(P<0.05)。T2DOP组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显高于sham组;EM组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显低于T2DOP组;EM+Anisomycin组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显高于EM组(P<0.05)。结论恩格列净可改善T2DOP大鼠骨代谢量失衡和骨微结构,其作用机制可能和抑制JNK/c-Jun信号通路激活有关。

对乙酰氨基酚致急性肝损伤中的c-Jun氨基末端激酶信号通路

对乙酰氨基酚(APAP)是最常见的解热镇痛抗炎药,但过量使用往往会导致急性肝损伤,甚至急性肝衰竭,严重者会造成死亡,目前仍缺乏特异的治疗手段。c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路是近年来识别出的在过量APAP诱导的急性肝损害中极具潜力的治疗靶点之一。本文从APAP在肝脏代谢过程中的JNK信号通路、JNK信号通路的激活及氧化应激的放大、与JNK信号通路相关的其他通路或细胞过程、靶向JNK的药物可能面临的挑战等方面进行综述,以期为后续JNK信号通路靶点在APAP肝毒性中的进一步研究和临床应用提供方向并进行可行性分析,且为寻找其他靶点提供参考。

c-Jun氨基端激酶信号通路调控急性呼吸窘迫综合征中重要炎症介质表达机制的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种临床常见的危重症,其核心问题在于过度的炎症反应。c-Jun氨基端激酶(JNK)是促分裂原活化的蛋白质激酶(MAPK)家族最重要的成员之一,在调控细胞增殖、分化、凋亡、自噬及炎症等多个重要功能中发挥作用。JNK信号通路被过度激活时,会导致炎症反应的持续激活和炎症因子的过度生成,从而对机体造成严重损害。因此,明确JNK通过哪些信号通路参与炎症反应,对于控制ARDS的炎症进程和调节机体的免疫反应平衡具有重要意义。

温针灸对兔膝骨性关节炎模型软骨细胞中c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的观察温针灸治疗兔膝骨性关节炎(KOA)模型软骨中c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-13的表达,为温针灸治疗KOA提供现代医学理论支持。方法 40只新西兰大耳兔随机选择30只采用右膝关节伸直位石膏固定制备KOA模型,另10只为正常对照组。固定6周后行X线检查确定造模成功后随机分为温针灸组、双氯芬酸钠组、模型组,每组10只。温针灸组选取足三里、鹤顶、内膝眼穴给予温针灸治疗,每天1次,15min/次,治疗2周;双氯芬酸钠组按15mg/kg灌胃,每天1次,治疗2周;模型组及正常对照组不予任何干预,正常饲养。采用免疫组织化学法、RT-PCR、免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测软骨中JNK1、JNK2、MMP-1、MMP-13的表达。结果与正常对照组比较,模型组关节软骨中MMP-1、MMP-13、JNK1、JNK2mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),且温针灸组、双氯芬酸钠组关节软骨中MMP-1、MMP-13、JNK1、JNK2mRNA及蛋白表达较模型组降低(P<0.05),同时温针灸组MMP-1、MMP-13mRNA蛋白表达及JNK1、JNK2 mRNA表达较双氯芬酸钠组降低更为明显(P<0.05)。结论温针灸可抑制KOA软骨细胞中JNK1、JNK2、MMP-1、MMP-13的表达,温针灸治疗KOA可能是通过激活JNK信号通路,抑制MMP-1、MMP-13的表达而达到治疗作用。

抑制c-Jun蛋白氨基末端激酶信号通路对内毒素血症大鼠肠屏障功能的保护作用

目的探讨阻断细胞质内应激信号通路c-Jun蛋白氨基末端激酶（JNK）对内毒素血症大鼠肠屏障损伤的保护作用。方法24只雄性SD大鼠，按随机数字表法分为对照组、内毒素血症模型组、JNK抑制剂组3组，每组8只。对照组仅给予生理盐水2ml／kg＋JNK抑制剂SP600125的溶剂PPCES液2．5ml／kg；内毒素血症模型组静脉注射脂多糖（LPS）10mg／kg＋PPCES液2．5ml／kg；JNK抑制剂组静脉注射LPS10mg／kg＋JNK抑制剂SP600125iomg／kg。记录各组大鼠活动和生存情况；并于12h后取大鼠回肠，光镜下观察肠道黏膜病理改变；同时取血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血浆D-乳酸含量。结果对照组大鼠活动正常，无死亡；模型组大鼠精神萎靡、活动减少，12h内死亡1只；JNK抑制剂组大鼠活动较模型组活跃，无死亡。回肠黏膜病理检查显示：与对照组相比，模型组大鼠回肠组织黏膜水肿，绒毛缩短，炎性细胞浸润；JNK抑制剂组回肠组织病变较模型组减轻。模型组大鼠血浆D-乳酸含量（μg／L）较对照组显著升高（943．8±439．6比227．9±130．0，P〈0．05）；JNK抑制剂能显著降低内毒素血症大鼠血浆D-乳酸含量（637．4±114．4比943．8±439．6，P〈0．05）。结论抑制细胞质内应激信号通路JNK能减轻内毒素血症大鼠肠屏障损伤。

黄芩素对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及与c-Jun氨基末端激酶信号通路的关系

目的基于c-Jun氨基末端激酶信号通路观察黄芩素对胃癌AGS细胞增殖及凋亡的影响。方法以膜联蛋白V(Annexin V)染色检测黄芩素干预后胃癌AGS细胞凋亡,进而用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测黄芩素干预对胃癌AGS细胞增殖的影响。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测黄芩素干预后c-Jun氨基末端激酶信号通路下游信号分子B淋巴细胞瘤-2、c-Jun蛋白表达。应用SPSS18.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间差异采用单因素方法或t检验分析,计数资料采用χ^2检验。结果CCK-8检测结果显示,经0μmol/L(对照组)、25、50、100μmol/L的黄芩素干预48h后,对应4组胃癌AGS细胞增殖活力分别为100.00±3.38、79.49±4.47、68.67±2.26、57.02±3.28。与对照组比较,黄芩素干预能够显著降低胃癌AGS细胞的增殖活力,且呈剂量依赖性(P<0.05)。Annexin V染色和流式细胞仪验证,经0μmol/L(对照组)、25、50、100μmol/L的黄芩素干预48h后,对应4组胃癌AGS细胞凋亡比例为1.97±0.72、3.44±0.45、4.11±0.35、4.93±1.03。与对照组比较,黄芩素可显著促进胃癌AGS细胞凋亡(P<0.05)。Westernblot法显示黄芩素干预后胃癌AGS细胞B淋巴细胞瘤-2和c-Jun蛋白的表达均呈不同程度的降低。结论黄芩素干预显著抑制胃癌细胞活力、诱导其凋亡而抑制胃癌细胞生长,具有下调B淋巴细胞瘤-2和c-Jun表达的作用。

c—Jun氨基末端激酶信号通路与神经系统疾病的研究

c—Jun氨基末端激酶（c-Jun—terminal kinase，JNK）信号通路家族是促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）超家族的成员之一。它在基因表达、细胞增殖、细胞应激、促细胞凋亡等多种生理和病理过程中起重要作用。

电针对血管性痴呆大鼠海马区c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的:观察电针干预对血管性痴呆(VD)大鼠海马组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨电针治疗VD的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组10只。采用反复阻断双侧颈总动脉法制备VD大鼠模型。电针组电针"大椎""百会"及双侧"后三里""膈俞"穴,10min/次,1次/d,连续治疗14d。Morris水迷宫检测大鼠行为学变化,尼氏染色法观察海马神经元病理改变,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测海马神经元凋亡,Western blot法检测JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期明显延长,穿越原平台次数明显减少(P<0.01),海马神经元损伤加重,存活神经元明显减少(P<0.01),凋亡神经元增多,细胞凋亡指数明显升高(P<0.01),海马组织JNK、p-JNK、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期明显缩短,穿越原平台次数明显增多(P<0.01),海马神经元损伤减轻,存活神经元明显增多(P<0.01),凋亡神经元减少,细胞凋亡指数明显降低(P<0.01),海马组织JNK、p-JNK、Caspase-8、Caspase-3表达均显著降低(P<0.01)。结论:电针可提高VD大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与电针调控JNK信号通路相关蛋白表达,抑制神经元凋亡有关。

凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤

目的研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型。转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性。结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P<0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P<0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P<0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P<0.05)和增殖能力(P<0.05)明显上升,RGC的凋亡(P<0.01)和Caspase-3的活力(P<0.01)明显降低。沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平。结论抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关。

热休克蛋白70对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12、C／EBP同源蛋白和c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的观察热休克蛋白70（HSP70）表达对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-12、C／EBP同源蛋白（CHOP）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响。方法应用腺病毒基因表达技术诱导热休克蛋白70（HSP70）基因在SD乳鼠心肌细胞的表达和应用HSP70反义寡核苷酸导人技术抑制HSP70的表达，建立细胞培养和心肌细胞缺氧模型，测定细胞凋亡，提取内质网测定，采用免疫组织化学和Westernblot方法测定转染前后HSP70的表达水平及HSP70的表达对内质网应激导致的细胞凋亡、Caspase-12、CHOP、JNK通路引起的凋亡信息传递的改变。结果对照组细胞凋亡率（9．28±0．83）％、晚期（28．60±1．83）％，HSP70基因转染组早期细胞凋亡率（4．30±0．72）％、晚期（11．6±1．66）％，HSP70反义寡核苷酸处理组早期细胞凋亡率（29．3±2．54）％、晚期（34．4±2．43）％，免疫组织化学和Westernblot证实HSP70基因成功转染人心肌细胞内表达；HSP70表达抑制细胞凋亡，但HSPT0反义寡核苷酸则促进；HSPT0显著抑制Caspase-12和CHOP的表达，HSP70增加JNK的表达；HSP70反义寡核苷酸组明显增加CHOP的表达。结论转染HSP70表达通过调节内质网应激Caspase-12、CHOP和JNK信号通路调控心肌细胞凋亡。

Exendin-4通过抑制氨基末端激酶信号通路拮抗βTC6细胞脂性凋亡的研究

目的研究Exendin-4对棕榈酸(PA)诱导的小鼠胰岛βTC6细胞c-jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路活化及凋亡的影响。方法不同浓度PA(0.125、0.25、0.5mmol/L)干预βTC6细胞12、24和48h,cck-8法检测增殖活性;将βTC6细胞分为对照组、PA组、PA+SP 600125组和PA+Exendin-4组,观察细胞形态学变化;TUNEL法测细胞凋亡;Western blot法测p-JNK,JNK、p-c-jun,c-jun蛋白表达。结果 (1)随PA浓度升高及干预时间延长,细胞增殖活性逐渐降低。(2)0.5mmol/LPA干预24h后,βTC6细胞凋亡增加(29.3±2.5)%,JNK,c-jun磷酸化增多。加用SP 600125或Exendin-4后,凋亡减少(22.5±3.2)%和(18.3±2.9)%。PA+Exendin-4组p-JNK与p-c-jun表达有所下降。结论 PA所致的β细胞内JNK及其底物蛋白c-jun磷酸化活化可能是β细胞脂性凋亡的重要环节。Exendin-4可通过抑制β细胞内JNK活化拮抗脂性凋亡。

抑肽酶对脑缺血再灌注大鼠c-Jun氨基末端激酶信号转导通路的影响

目的探讨抑肽酶对脑缺血再灌注大鼠c—Jun氨基末端激酶（c-Jun NH2 terminal kinases，JNK）信号转导通路的影响。方法将30只健康雄性SD大鼠完全随机分为假手术组、模型组、抑肽酶组，每组10只。采用4-VO法建立大鼠全脑缺血模型，在预定时间行灌注、固定、取脑、石蜡包埋切片；免疫组化法检测p-JNK的表达，DNA断端末端标记法检测CA1区凋亡细胞。结果p-JNK在模型组大鼠海马CA1区大量表达（239．17±2．74），抑肽酶组p-JNK则无明显表达（176．53±O．36），2组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；抑肽酶组细胞凋亡指数（27．06±3．16）明显低于模型组（62．13±1．04），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论JNK信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用，抑肽酶能够抑制JNK信号转导通路的激活，对脑缺血再灌注损伤导致的细胞损伤起到保护作用。

c-Jun氨基末端激酶信号转导通路与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛关系的研究进展

脑血管痉挛（cerebral vasospasm,CVS）是蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后最严重的并发症之一,其发生率高达30%~90%。常引起严重局部脑组织缺血或迟发性缺血性脑损害,导致严重的神经功能障碍,成为SAH致死、致残的重要原因。

基于JNK-p62/SQSTM1信号通路探讨糖肾煎对2型糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用

目的 基于c-Jun氨基末端激酶(JNK)-p62/螯合体(SQSTM1)信号通路探讨糖肾煎对2型糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞的保护作用。方法 SD大鼠随机分成正常组、DN组、糖肾煎低、中、高[生药5、10、20 g/(kg·d)]剂量组(糖肾煎-L、M、H组)、二甲双胍组[100 mg/(kg·d)]。除正常组外,其余各组通过喂养高脂高糖饲料和腹腔注射链脲佐菌素(STZ)进行DN模型构建。药物干预结束后,检测大鼠血生化指标空腹血糖(FBG)、负荷后2 h血糖(P2 h BG)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)、六胺银(PASM)染色观察肾组织病理学变化;透射电镜(TEM)观察肾小球基底膜损伤和足细胞变化情况;Western印迹检测肾组织中微管相关蛋白1A/1B-轻链(LC)3、p-JNK、JNK、p62/SQSTM1、肾病蛋白(Nephrin)蛋白表达。结果 与正常组比较,DN组FBG、P2 h BG、SCr、BUN水平及p62/SQSTM1蛋白表达明显升高,LC3-Ⅱ、Nephrin蛋白表达和p-JNK/JNK明显降低(P<0.05);光镜下观察到肾小球缩小、管丛系膜明显扩张,并有基底膜增生增厚等现象;TEM下观察到肾小球基底膜增厚、足细胞排列紊乱、形态改变、足突融合等现象。与DN组比较,糖肾煎-L、M、H组和二甲双胍组FBG、P2 h BG、SCr、BUN水平及p62/SQSTM1蛋白表达明显降低,LC3-Ⅱ、Nephrin蛋白表达和p-JNK/JNK明显升高(P<0.05);并且肾小球基底膜增厚、足细胞足突融合等情况均获得一定程度减轻。结论 糖肾煎对2型DN大鼠足细胞具有一定保护作用,可能是通过调控JNK-p62/SQSTM1信号通路,提高足细胞自噬,从而起到肾脏保护功效。

c-Jun氨基末端激酶信号通路对肥胖诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡的调控作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路对肥胖诱导的大鼠胰岛B细胞凋亡的调控作用。方法采用高脂饲料喂养雄性SD大鼠建立肥胖模型。造模成功后，取对照组和肥胖组大鼠各10只，检测其空腹血糖、游离脂肪酸及血清胰岛素水平，计算胰岛素抵抗指数。观察其胰腺组织病理学变化，并检测其胰腺组织中胰岛素、胰岛细胞凋亡指数及胰腺组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、磷酸化JNK（p-JNK）、B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达水平。结果肥胖组大鼠胰腺组织出现腺泡结构破坏、脂质块状沉积等病理学改变。肥胖组大鼠空腹血糖、游离脂肪酸、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数、B细胞凋亡指数、TNF-β、IL-1β、胰腺组织中胰岛素、P-JNK、Bax的表达水平显著高于对照组（P均〈0．05）；而Bcl-2表达水平显著低于对照组（P〈0．05）。结论JNK信号通路在肥胖大鼠被激活，进而发挥促肥胖诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡的作用。