一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡

目的研究脑缺血区周边组织一氧化氮合酶(NOS)的表达与应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK)及p38MAP激酶(p38MAPK)激活的关系;探讨一氧化氮(NO)诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡的可能机制。方法采用TUNEL染色法观察脑缺血再灌注不同时段模型鼠缺血区周边组织凋亡的阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法检测活化型Caspase-3、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和SAPK/JNK,p38MAPK及其磷酸化组分的表达。结果再灌注后1h、2h缺血区周边组织nNOS表达明显增强;自1h起iNOS开始表达,12 h达到高峰。1h p-SAPK/JNK表达较强,以后逐渐减弱;p38MAPK各时段表达均明显增强,以6h为著,p-p38MAPK表达高峰亦在6h。6h活化型Caspase-3开始表达,12 h达到高峰;12 h开始出现TUNEL阳性神经元,24 h达到高峰。结论缺血区周边组织NOS表达的增强可能通过激活SAPK/JNK及p38MAPK诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡。

应激活化蛋白激酶在大鼠缺血后适应中的变化及其对细胞凋亡影响的研究

目的:探讨应激活化蛋白激酶(JNK MAPK)在大鼠缺血后适应中的变化,并进一步分析其对细胞凋亡的影响。方法:60只SD大鼠随机分为假手术(Sham)、缺血再灌注(R/I)、后适应(Post)、JNK抑制剂(I JNK)、JNK激活剂+后适应(Ani+Post)和JNK激活剂(Ani)6组,建立急性心肌梗死再灌注和缺血后适应模型,在再灌注开始前5min经颈静脉注射抑制剂(SP600125,6mg/kg)和激动剂(anisomycin,2mg/kg)。再灌注6h后处死取心肌组织测定磷酸化JNK(P-JNK)、TNFα、Caspase-8、Bcl-2、Bax,并提取胞浆测定其中细胞色素c(Cyt-c);各组其余大鼠再灌注24h后测定血流动力学,抽血测定心肌酶,取心脏进行TUNEL凋亡检测或使用伊文氏蓝-三苯基氯化四氮唑法检测心肌梗死面积。结果:后适应组可显著改善缺血对左室压力最大上升/下降速度、心率血压积的抑制,限制心肌梗死面积,减轻细胞凋亡和坏死,抑制了P-JNK的生成(1.12±0.21 vs 1.90±0.32,P<0.05);同时,伴随TNFα和Caspase-8表达显著减少,Bcl-2的升高和Bax的降低,胞浆Cyt-c(0.33±0.04 vs 1.00±0.11,P<0.05)含量明显减少。I JNK组可以模拟后适应在信号分子的上述变化,从而表现出显著的心肌保护作用[凋亡指数:(6.23±2.43)%vs(18.22±5.10)%,P<0.05;心肌梗死面积:(23.44±6.34)%vs(42.31±8.21)%,P<0.05]。反之,Ani+Post则因为JNK激活剂的应用,部分抵消了后适应的保护效应,在心肌酶、心肌凋亡和梗死面积方面表现出保护作用的减弱[凋亡:(14.12±2.00)%vs(18.22±5.10)%,P>0.05;心肌梗死面积:(35.27±5.28)%vs(42.31±8.21)%,P>0.05]。结论:后适应可以抑制JNK MAPK在再灌注损伤中的磷酸化,并通过P-JNK MAPK的减少抑制TNFα细胞受体途径和Bcl-2/Bax线粒体途径,从而减少细胞凋亡。

增生性瘢痕内应激活化蛋白激酶及其上游信号分子基因表达的变化

目的 探讨增生性瘢痕和自身对照正常处皮肤中应激活化蛋白激酶 (SAPK)及其上游信号分子MAPKs(MKK4和 MKK7)基因表达的变化。 方法 提取 8例增生性瘢痕和自身对照正常处皮肤组织的总 RNA后 ,分离纯化 m RNA,用 RT- PCR方法检测 SAPK,MKK4和 MKK7基因在不同组织中的表达变化规律。 结果 增生性瘢痕中 ,MKK7和 SAPK基因表达较弱 ,自身对照皮肤组织中 ,这两种基因 PCR结果的灰度比分别为增生性瘢痕的 1.5倍和 2 .6倍 ,基因表达量明显升高 (P<0 .0 1) ,而 MKK4在这两种不同类型组织中的表达量无统计学意义 (P>0 .0 5 )。 结论 增生性瘢痕中 MKK7和 SAPK基因表达降低引起细胞凋亡减少 ,可能是瘢痕内成纤维细胞大量增殖 ,增生性瘢痕形成的机制之一。

应激活化蛋白激酶与蛋白激酶p38活性测定

应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）和Ｐ３２是丝裂素活化蛋白激酶家系（ＭＡＰＫｓ）的主要成员。与应激和某些炎性细胞因子引起的细胞反应有关，参与心血管疾病、细胞凋亡与机体的应激反应。本文主要介绍用免疫沉淀法提取ＳＡＰＫ和ｐ３８，据ＳＡＰＫ和ｐ３８分别可以磷酸化ｃＪｕｎ和ＡＴＦ２的原理，采用聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）方法，分别测定ＳＡＰＫ和ｐ３８将３２Ｐ参入其特异性底物的量，反映其活性。

应激活化蛋白激酶介导氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡作用探讨

目的 了解氯化镉 (CdCl2 )对豚鼠肾上腺皮质细胞应激活化蛋白激酶 (stressactivatedproteinkinase ,SAPK)活性的影响及与凋亡的可能关系。方法 以 0 6 2 5、1 2 5和 2 5 0mg/kgCdCl2 整体腹腔注射染毒雄性豚鼠 ,分别于染毒 1h和 12h处死动物 ,取肾上腺皮质进行SAPK活性测定 (免疫沉淀 -蛋白印迹杂交 -化学发光法 )和电镜观察细胞凋亡。结果 整体染毒 1h ,SAPK活性随CdCl2 染毒剂量的增加呈增加的趋势 ;染毒 12h ,各组SAPK活性变化不明显。电镜观察染毒 1h肾上腺皮质细胞未见凋亡征象 ;但染毒 12h可见早期细胞凋亡。结论 SAPK活化在CdCl2

氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞应激活化蛋白激酶活性及凋亡的影响

目的 观察氧化型低密度脂蛋白 (Ox LDL)对血管平滑肌细胞凋亡及应激活化蛋白激酶 (SAPK)活性的影响。方法 采用 3个时间水平 (2 4、48、72h)、4个剂量水平 (0、 5 0、 10 0、 2 0 0μg/ml)的两因素析因设计观察Ox LDL对兔主动脉血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMCs)凋亡影响的时间、剂量效应关系 ;Ox LDL对兔主动脉血管平滑肌细胞SAPK活性影响。结果 Ox LDL诱导VSMCs凋亡随时间和剂量升高而不断增加 ,呈现一定的时间、剂量效应关系 (P <0 0 1) ;Ox LDL可引起各血管平滑肌细胞SAPK活性升高。结论 Ox LDL诱导血管平滑肌细胞凋亡与其作用浓度、时间相关 ;SAPK信号通路可能在Ox

不同胎龄胎儿皮肤内应激活化蛋白激酶基因的表达及其变化

目的:探讨应激活化蛋白激酶1,应激活化蛋白激酶2,应激活化蛋白激酶3及其上游信号分子(分子丝裂素活化蛋白激酶激酶4和分子丝裂素活化蛋白激酶激酶7)基因在不同胎龄的胎儿皮肤和出生后机体皮肤组织中的表达及其变化特征。方法:实验于2004-01/05在解放军军事医学科学院放射医学研究所毒理研究室完成。用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤和6例出生后机体(4～16岁)皮肤组织的总RNA,分离mRNA,用反转录-多聚酶链反应方法检测这5种基因在不同组织中的表达变化规律。结果:在早期妊娠胎儿的皮肤组织中,应激活化蛋白激酶2,应激活化蛋白激酶3,分子丝裂素活化蛋白激酶激酶4和分子丝裂素活化蛋白激酶激酶7基因表达较弱,分别为0.277±0.084,0.077±0.020,0.004±0.005,0.060±0.012,随着胎龄的增加,皮肤组织内这4种基因表达水平逐渐升高,分别为0.383±0.072,0.168±0.078,0.046±0.005,0.105±0.052,在出生后机体皮肤中,这4种基因的转录含量升至最高,分别为0.571±0.061,0.220±0.054,0.081±0.007,0.103±0.027,分别是早期胚胎皮肤的2.1,2.9,20.1和1.7倍(P<0.01)。应激活化蛋白激酶1基因表达水平在中期妊娠胎儿皮肤组织中升至最大为0.307±0.028,然后随着胎龄的增加,该基因表达量逐渐降低,在出生后机体皮肤内该基因表达量是0.111±0.002,与早期妊娠胎儿皮肤相比基因表达水平显著降低(P<0.05)。结论:在早期胚胎皮肤组织中,应激活化蛋白激酶2,应激活化蛋白激酶3,分子丝裂素活化蛋白激酶激酶4和分子丝裂素活化蛋白激酶激酶7基因的低表达可能与皮肤细胞快速增殖、创面迅速愈合、细胞趋向凋亡减少相关。

氟西汀对抑郁大鼠行为及海马组织内应激活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨氟西汀对抑郁大鼠行为学表现及海马组织内丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)及Jun氨基末端激酶(JNK)通路蛋白表达的影响。方法40只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常组、抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组,每组10只。正常组大鼠不给予任何刺激;抑郁症组、生理盐水组和氟西汀组大鼠给予8周慢性不可预见性应激(CUMS),于CUMS第5~8周,氟西汀组大鼠给予氟西汀(10 mg·kg^-1·d^-1)灌胃,生理盐水组大鼠给予生理盐水(10 mg·kg^-1·d^-1)灌胃;正常组和抑郁症组大鼠不给予任何干预措施。分别于CUMS前(造模前),CUMS 4周后(造模后)、8周后(干预后)评估4组大鼠行为学变化,最后一次行为学评估后处死大鼠,并取海马组织,采用Western blot法检测海马组织内MKP-1、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平,并计算p-JNK/JNK比值。结果造模前各组大鼠体质量、蔗糖偏好指数、强迫游泳不动时间及旷场实验结果比较差异均无统计学意义(P>0.05)。正常组大鼠造模前后各行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05);与造模前比较,造模后抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。与正常组比较,造模后抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。造模后,抑郁症组、生理盐水组、氟西汀组大鼠各种行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,干预后生理盐水组及抑郁症组大鼠体质量降低,蔗糖偏好指数下降,强迫游泳不动时间增加,水平运动距离和直立次数减少(P<0.05)。干预后,氟西汀组与正常组大鼠各项行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05),生理盐水组与抑郁症组大鼠各项行为学指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与生理盐水组和抑郁症组比较,氟西汀组大鼠体质量增加,蔗糖偏好指数上升,强迫游泳不动时间减少,水平运动距离和直立次数增加(P<0.05)。抑郁症组和生理盐水组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量高于正常组(P<0.05),氟西汀组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量低于抑郁症组和生理盐水组(P<0.05),氟西汀组与正常组大鼠海马组织内MKP-1蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组大鼠海马组织内p-JNK、JNK蛋白表达量及p-JNK/JNK比值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MKP-1改变可能是抑郁症发病的一个重要基因,其影响抑郁症发病的机制可能不是通过JNK信号通路。氟西汀可能通过下调MKP-1表达水平而改善大鼠抑郁状态。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞c-Jun氨基末端激酶通路活化的影响

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成以及c-Jun氨基末端激酶表达的影响。方法选用新生Wistar大鼠心脏成纤维细胞作为实验研究材料,MTT法检测心脏成纤维细胞代谢活性的改变,免疫细胞化学法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的改变,Western Blotting检测大鼠心脏成纤维细胞中磷酸化JNK(p-JNK)和JNK蛋白及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果 10μg/L血小板源生长因子刺激下,代表大鼠心脏成纤维细胞代谢活性的OD值增加,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达增强,表明血小板源生长因子刺激了心脏成纤维细胞增殖,促进了胶原的合成。同时p-JNK蛋白表达增高,而JNK蛋白表达无明显改变。10-9mol/LAcSDKP能够抑制血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞代谢活性,同时抑制了Ⅰ型、Ⅲ型胶原及p-JNK蛋白的表达,而JNK蛋白表达无明显改变。结论 AcSDKP能够通过阻断血小板源生长因子介导的JNK通路激活进而抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达。

硫氯双酚通过应激活化蛋白激酶通路诱导人胶质瘤细胞凋亡

目的探讨抗寄生虫药物硫氯双酚对人胶质瘤细胞U251的作用及其机制。方法应用CCK8法、流式细胞仪和Western blotting观察不同浓度硫氯双酚对人胶质瘤细胞U251的存活率、细胞凋亡、应激活化蛋白激酶(c-Jun N-terninal kinase,JNK)及其磷酸化水平变化,以及JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK活性对硫氯双酚诱导细胞凋亡的影响。结果与对照组相比,硫氯双酚作用U251细胞24 h后,U251细胞存活率明显降低(P<0.05),死亡率明显升高(P<0.05),且有剂量依赖性;凋亡相关Capspase3、DNA修复酶PARP(paly ADP-ribose polymerase,PARP)表达和JNK和其化水平均显著升高(P<0.05);SP600125抑制JNK活性可显著阻断硫氯双酚诱导的细胞凋亡。结论硫氯双酚可诱导人胶质瘤细胞U251凋亡,其机制可能与激活JNK信号通路有关。

应激活化蛋白激酶参与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染和调节病毒诱导细胞因子的产生

本研究验证了PRRSV感染时，在永生化猪肺泡巨噬细胞（PAM）中p38MAPK和JNK路径的作用。感染PRRSV后36小时内逐渐地激活p38和JNK1／2，感染后48小时它们的磷酸化水平显著下降到原点。相比之下，紫外线灭活的PRRSV不能刺激这些SAPKs的磷酸化，

c-Jun氨基末端激酶在慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织的表达及氟伐他汀的干预作用

建立慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠模型,观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)在狼疮样小鼠肾组织中的表达及氟伐他汀的干预作用。(C57BL/6J×DBA/2)F1代小鼠随机分为正常对照组、氟伐他汀高剂量组(10mg/kg)、低剂量组(5mg/kg)和模型组,16周后处死,采用双缩脲比色法观察各组小鼠24h尿蛋白量,免疫组织化学法定位检测JNK、p-JNK在肾组织的表达,RT-PCR法检测各组JNK mRNA表达及Western blotting半定量检测JNK、p-JNK蛋白表达。结果显示,模型组小鼠24h尿蛋白量、JNK mRNA及JNK、p-JNK蛋白表达较正常对照组均显著增加(P<0.01);氟伐他汀干预组较模型组上述指标均明显降低(P<0.01);高剂量组较低剂量组降低更明显(P<0.05)。JNK可能参与了狼疮肾炎病情进展,氟伐他汀可能通过影响JNK的表达从而延缓狼疮肾炎肾纤维化进程。

抑制脊髓转化生长因子β激活激酶影响大鼠鞘内吗啡耐受的信号机制

目的探讨转化生长因子B激活激酶（TAK1）选择性抑制剂5Z-7-oxozeaenol缓解慢性吗啡耐受的信号机制。方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠，体重220～250g，采用Yaksh法行鞘内置管。将40只置管成功的大鼠随机分入5组，每组8只。对照组大鼠鞘内注射0．9％氯化钠溶液10μL。吗啡组大鼠鞘内注射吗啡15μg。抑制剂＋0．9％氯化钠溶液组大鼠鞘内注射5Z-7-oxozeaenol1μg，30min后鞘内注射0．9%氯化钠溶液10μL。20％二甲基亚砜（DMSO）＋吗啡组鞘内给予20％DMSO 10μL，30min后鞘内注射吗啡15μg。抑制剂＋吗啡组大鼠鞘内注射5Z-7-oxozeaenol 1μg，30min后鞘内注射吗啡15μg。每天给药1次，连续给药7d。每天给药结束30min后行缩爪实验检测大鼠缩爪痛阈值，计算最大镇痛效应百分比（MPEP）。连续给药7d后，大鼠断头取脊髓腰膨大。采用免疫印迹法测定脊髓内c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表达，以及磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）水平。结果吗啡组和20％DMSO＋吗啡组大鼠给药第1～5天的MPEP均显著高于对照组（P值分别〈0．001、0．05），抑制剂＋吗啡组大鼠给药第1～7天的MPEP均显著高于对照组（P值均〈0．001），抑制剂＋吗啡组大鼠给药第3～7天的MPEP均显著高于吗啡组（P值分别〈0．01、0．001）。吗啡组和20％DMSO＋吗啡组的p-JNK表达水平均显著高于对照组（P值均〈0．01），抑制剂＋吗啡组的p-JNK表达水平显著低于吗啡组（P〈0．001）。吗啡组和20％DMSO＋吗啡组的P—p38MAPK表达水平均显著高于对照组（P值均〈0．001），抑制剂＋吗啡组的p-p38MAPK表达水平显著低于吗啡组（P〈0．001）。结论5Z-7-oxozeaenol与吗啡合用可有效缓解吗啡耐受，抑制慢性吗啡处理所致脊髓内p-JNK和p-p38MAPK表达水平的升高。5Z-7-oxozeaenol通过下调TAK1／JNK和TAK1／p38MAPK活化水平缓解吗啡耐受。

Rho激酶抑制剂对急性心肌梗死患者心肌纤维化的影响

目前研究认为慢性心力衰竭的基本机制是心肌重塑,因此,预防急性心肌梗死（AMI）后的心肌重塑是防治心肌衰竭发生的重要治疗原则之一。而心肌重塑的基础是心肌细胞和细胞外基质的变化,心肌细胞外基质的变化主要是胶原沉积和纤维化〔1〕。有研究表明,Rho激酶抑制剂抑制胶原Ⅲ的表达,防治心肌纤维化,延缓心肌重塑,改善心功能〔2〕。本研究观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对AMI患者Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP）和基质金属蛋白酶（MMP）-9的影响。

益肝康药物血清对肝星状细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的抑制作用

目的探讨肝星状细胞丝裂原活化蛋白激酶(HSCs MAPK)通路中信号调节蛋白激酶(ERK)、C-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)的活化情况,并进一步研究益肝康药物血清对P-ERK、P-JNK蛋白表达的影响。方法制备肝纤维化模型鼠。分为正常大鼠血清干预组(A组);正常大鼠益肝康药物血清干预组(B组);肝纤维化模型大鼠血清干预组(C组);肝纤维化大鼠益肝康药物血清干预组(D组)。每组8组,B、D组为药物组,A、C组为对照组。造模毕,药物组以每天20 ml/kg剂量分2次灌服益肝康;对照组灌以等量0.9%氯化钠溶液。连续给药6 d后经下腔静脉取血并分离血清。采用盲法,用上述10%药物血清培养HSCs 24 h后,采用Western blot技术检测各组HSCs P-ERK、P-JNK蛋白表达。结果 Western blot分析结果显示,各组在大概42、44 KD的位置上均出现杂交带,表明活化的HSCs同时表达P-ERK1和P-ERK2;各组在大概46、54 KD的位置上均出现杂交带,表明HSCs同时表达P-JNK1和P-JNK2。经肝纤维化大鼠益肝康药物血清干预后,P-ERK、P-JNK蛋白表达水平较病理对照组显著降低(P<0.01);正常大鼠益肝康药物血清干预后,P-ERK、P-JNK蛋白表达水平与正常大鼠血清干预组比较,也均显著减少(P<0.05)。结论活化的HSCs中ERK、JNK保持着较高的磷酸化水平。提示两者介导的信号转导通路是HSCs活化和增殖的重要途径之一;阻断MAPK信号通路可能是益肝康治疗肝纤维化的重要作用途径之一。

人单核细胞上尿激酶型纤溶酶原激活物受体参与细胞迁移

目的研究单核细胞膜蛋白-尿激酶型纤溶酶原激活物受体在细胞迁移过程中的作用及相关机制。方法采用密度梯度离心和粘附法分离、纯化人外周血单核细胞;在单核细胞趋化蛋白1诱导下,观察尿激酶型纤溶酶原激活物及其抗体、纤溶酶原激活物抑制剂1和尿激酶型纤溶酶原激活物受体抗体等因子对单核细胞迁移的影响。结果在25μg/L单核细胞趋化蛋白1诱导下,尿激酶型纤溶酶原激活物有促进单核细胞迁移的倾向,迁移细胞由对照组的179.40±38.49升高至251.00±26.11,P=0.076;尿激酶型纤溶酶原激活物抗体和纤溶酶原激活物抑制剂1对细胞迁移没有明显影响;而尿激酶型纤溶酶原激活物氨基末端则抑制迁移的细胞数至56.40±76.98,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。加入抗尿激酶型纤溶酶原激活物受体抗体之后单核细胞迁移也受到抑制,160μg/L组迁移细胞数为151.20±20.33,与10μg/L组(228.40±83.96)比较显著降低(P<0.05)。结论尿激酶型纤溶酶原激活物受体参与单核细胞趋化蛋白1诱导的单核细胞迁移,尿激酶型纤溶酶原激活物氨基末端对迁移具抑制作用,该作用甚至强于尿激酶型纤溶酶原激活物受体抗体,提示单核细胞迁移中尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体分子间相互作用的重要性。

促分裂原活化的蛋白激酶信号通路与能量代谢的关系

能量代谢每时每刻都伴随着物质代谢在生命体内发生。生物通过利用物质代谢产生的高能磷酸化合物以维持各项生命功能的运转,不同状态下的细胞通过利用各种物质通过不同的通路进行不同的代谢方式。促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路作为生命体里广泛存在的一类信号蛋白,影响着细胞、生物体的生命活动。MAPK通路在能量代谢的各个环节起着非常重要的作用。通过研究MAPK通路中的胞外信号调节激酶(ERK)通路、Jun激酶(JNK)通路、P38通路均与能量代谢有关的蛋白、靶点、关键酶、转运体,与三大营养物质能量代谢相结合,从而为能量代谢相关的细胞功能进一步研究铺垫,并为今后治疗肿瘤性疾病、感染性疾病、代谢性疾病等提供新思路。

姜黄素通过抑制内质网应激和JNK通路过度活化减轻小鼠肺缺血再灌注损伤

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)是否通过抑制内质网应激和c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路过度活化来减轻小鼠肺缺血再灌注(I/R)损伤。方法:采用C57BL/6J小鼠左侧肺原位I/R损伤模型。实验随机分为6组(每组10只),包括假手术组(sham组)、I/R组、DMSO组(I/R+DMSO组)和Cur组(I/R+Cur低、中、高剂量组)。实验结束后处死小鼠,留取左肺,检测肺湿干重比(W/D)和总肺水含量(TLW);光镜、电镜观察肺组织形态结构变化,并进行肺组织损伤评估(IQA);RT-PCR检测JNK和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA表达;West-ern blotting检测磷酸化JNK(p-JNK)和GRP78的蛋白表达;原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测肺细胞凋亡指数(AI)。结果:与sham组相比,I/R组和DMSO组W/D、TLW、IQA及AI均明显升高(P<0.01),JNK、GRP78 mRNA和p-JNK、GRP78蛋白表达量上升(P<0.01),光镜、电镜均显示肺组织结构出现明显损伤性变化。I/R组与DMSO组相比,上述各指标无显著差异(P>0.05)。与I/R组和DMSO组相比,I/R+Cur低、中、高剂量组各组GRP78mRNA和蛋白表达量无明显变化(P>0.05),W/D、TLW、IQA及AI下降(P<0.05或P<0.01)且肺组织损伤减轻,JNK mRNA和p-JNK蛋白质表达量亦下降,以I/R+Cur高剂量组下降最为明显(P<0.01)。结论:缺血/再灌注引发肺组织细胞发生过度的内质网应激,损伤肺组织。Cur能减轻肺缺血/再灌注损伤,其机制可能与抑制JNK信号通路的过度活化有关。

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏内质网应激相关c-jun氨基末端激酶通路的影响

目的:观察银杏叶提取物(Gb E)对肝纤维化大鼠肝组织内质网应激相关c-jun氨基末端激酶(JNK)通路的影响,探讨Gb E抗肝纤维的作用机制。方法:采用40%的CCl4皮下注射(3m L·kg-1·d-1,2次/周,首剂加倍),连续6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以低、中、高剂量(50、100、200m L·kg-1·d-1)Gb E灌胃干预6周,空腹取肝组织,Real-time PCR法检测JNK m RNA表达,Western blot技术检测大鼠肝组织中JNK通路关键分子凋亡信号调节激酶(ASK)及JNK的总蛋白及其磷酸化表达。结果:肝组织JNK m RNA表达及ASK、JNK总蛋白活化水平较正常组明显增强(P<0.05,P<0.01);Gb E低、中、高剂量组大鼠肝组织JNK m RNA表达及ASK、JNK总蛋白活化水平较模型组不同程度下降(P<0.05,P<0.01)。结论:CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏内质网应激相关的JNK通路被激活,Gb E可通过调节肝纤维化大鼠JNK通路防止肝纤维化的进展。