诺氟沙星对中国圆田螺氨基比林-N-脱甲基酶活性的影响

在沉积物中均匀加入诺氟沙星,模拟研究了沉积物中诺氟沙星对中国圆田螺不同组织氨基比林-N-脱甲基酶活性的影响。结果表明,诺氟沙星的处理使中国圆田螺各组织中的氨基比林-N-脱甲基酶活性发生了变化,不同和相同含量诺氟沙星对同种或不同组织中氨基比林-N-脱甲基酶的活性的影响不同。总的趋势为:低含量诺氟沙星对肝、肾、胃等组织氨基比林-N-脱甲基酶活性的作用为前期诱导后期抑制;中、高含量诺氟沙星抑制肾、胃等组织氨基比林-N-脱甲基酶活性;诺氟沙星一直抑制卵巢和肌肉组织中氨基比林-N-脱甲基酶的活性。

(R)-醇腈酶催化法合成(R)-(-)-1-(2-萘基)-2-N-甲基氨基乙醇

以2-萘甲醛为原料,经酶致转氰化、氰基还原、甲酰化、酰胺还原合成了光学活性(R)-(-)-1-(2-萘基)-2-N-甲基氨基乙醇5。转氰化过程采用来源于苦杏仁、枇杷仁、桃仁、黑布林果仁和苹果籽仁的醇腈酶催化HCN对底物醛的加成获得(R)-氰醇,通过比较反应产率和产物对映体过量值(ee)发现苦杏仁醇腈酶的催化效果最好,相应值分别为68.8%和88.3%;(R)-氰醇的O-保护衍生物2经化学法转化为标题化合物5,总产率达47%,ee值达88.0%,其结构经IR和1H-NMR确证。实验结果表明,醇腈酶催化合成的手性氰醇光学纯度较高,是合成手性氨基醇化合物的优秀原料,并且在随后的化学转化过程中各步反应产物均很好地保留了光学纯度。

27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)及其修饰酶在小鼠不同组织中分布

目的研究出生后7日龄和2月龄小鼠各组织器官中27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)的水平及其修饰酶Zeste基因增强子同源物2(EZH2)、赖氨酸特异性脱甲基酶6B(Kdm6B/JMJD3)和赖氨酸特异性脱甲基酶6A(Kdm6A/UTX)的表达。方法免疫组织化学染色法检测7日龄和2月龄小鼠脑、涎腺、背部脂肪、胸腺、肺、心脏、胃、肠、肝、睾丸、皮肤组织中H3K27me3、EZH2、JMJD3和UTX表达,实时定量PCR验证,统计分析H3K27me3水平与EZH2、JMJD3和UTX表达之间的关系。结果 H3K27me3在7日龄和2月龄小鼠被检测组织中均持续存在;EZH2在7日龄和2月龄小鼠脑、心肌、肝及皮肤中表达,但仅在2月龄小鼠涎腺、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胸腺中持续表达;JMJD3在7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胃中表达,但在2月龄小鼠的肺、脂肪组织、胃中不再表达;UTX在7日龄小鼠的脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺及脂肪组织中表达,但仅在2月龄小鼠睾丸中表达;大部分免疫组织化学染色阳性的H3K27甲基调节酶相应的mRNA呈中等或较高水平表达。结论 H3K27me3在小鼠不同时期各组织中均持续存在;EZH2多存在于2月龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、肝、胸腺;JMJD3、UTX多存在于7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺、脂肪组织;H3K27me3分布与EZH2的表达之间无明显一致关系,与JMJD3或UTX不存在明显反向分布关系,EZH2与JMJD3或UTX的表达分布也不存在反向关系。提示EZH2、JMJD3和UTX在小鼠出生后多种组织中可能起重要作用;在体内H3K27me3水平及其修饰酶可能受多因素控制,以完成复杂的生理功能。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶新型底物的合成及在肾小管疾病诊断中的应用

目的优化N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的新型底物6-甲基-2-吡啶基-1-硫-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)的合成方法,探讨其在肾小管疾病诊断中的应用价值。方法采用活泼中间物(1-氯-1-脱氧乙酰糖)与6-甲基-2-巯基吡啶成苷合成底物;以MPT-NAG为底物,采用全自动生化仪测定糖尿病肾病、肾病综合征、肾移植患者和正常对照者尿液样本中NAG的活性。结果底物MPT-NAG的结构经元素分析和1HNMR谱鉴定,高效液相色谱(HPLC)检测纯度达99.8%。NAG活性测定结果表明,糖尿病肾病、肾病综合征和肾移植患者的尿NAG活性增高,与正常对照者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论经优化制备工艺合成获得NAG新型底物MPT-NAG,所用原料成本低、操作简便且产物得率较高,在肾小管疾病的诊断中具有临床应用价值。

对氨基水杨酸钠对染锰大鼠肝混合功能氧化酶的作用

给予大鼠iPMnCl2·4H2O15mg/kg·d84天抑制肝微粒体氨基比林N-脱甲基酶活性和细胞色素P-450含量下降,经ipPAS-Na80mg/kg·d或120mg/kg·d 21天后。

MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值

目的应用新型底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)建立检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的紫外动力学新方法,用于尿液中NAG活性测定。方法基于NAG催化水解对硝基苯-N-乙酶-β-D-氨基葡萄糖苷生成有色的对硝基酚这一反应,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究。用该法测定了多种病尿样中NAG活活性。结果该法最低检出限为1.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.998 9),批内CV为<3%,批间CV<5%,回收率为101.3%。结论本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生物化学分析仪操作。

脉络宁注射液对小鼠肝药酶活性的影响

目的:通过测定细胞色素P450(CYP450)含量和甲醛生成率,考察脉络宁注射液对小鼠总CYP450以及红霉素-N-脱甲基酶(CYP3A)和氨基比林-N-脱甲基酶(CYP2E1)活性的影响。方法:采用紫外分光光度法和体外温孵反应,测定并比较了给药组和对照组小鼠在肝脏系数、微粒体蛋白含量、CYP450含量及甲醛生成速率方面的差异。结果:两种剂量脉络宁对小鼠肝脏系数和CYP450含量影响都不显著,但均能提高微粒体蛋白含量;两种剂量脉络宁均可抑制CYP2E1的活性,临床等效用量时对CYP3A活性影响不显著,高剂量时可能抑制CYP3A活性。结论:脉络宁注射液对CYP3A和CYP2E1亚型活性有影响。

新型Hsp90抑制剂——SNX-2112对大鼠肝药酶活性的影响

目的研究SNX-2112注射液对大鼠肝药酶活性的影响。方法大鼠分为苯巴比妥钠诱导组、CCl4抑制组、SNX-2112高、中、低(10、5、2.5mg·kg-1)剂量组、生理盐水对照组、空白溶媒组。用紫外分光光度法测定了SNX-2112注射液对大鼠肝脏系数、CYP450含量以及甲醛生成速率的影响。结果3种剂量SNX-2112对大鼠肝脏系数以及蛋白含量的影响都不明显,但均能抑制CYP450含量。从甲醛生成速率结果看,高、中两种剂量SNX-2112均能抑制大鼠氨基比林-N-脱甲基酶活性及红霉素-N-脱甲基酶活性,而低剂量对其影响不明显。结论SNX-2112注射液在高浓度对大鼠肝药酶CYP3A和CYP2E1亚型活性有抑制作用。

白花前胡中总香豆素组分对小鼠肝药酶活性的影响

目的 :观察白花前胡中总香豆素组分 (TCP)对小鼠肝药酶活性的影响。方法 :将小鼠随机分组 ,以氯霉素(2 5mg·kg 1 ,ig)为阳性对照 ,观察TCP(5 0 ,10 0 ,2 0 0mg·kg 1 ,ig)分别对戊巴比妥钠 (3 6mg·kg 1 ,ip)和巴比妥钠 (180mg·kg 1 ,ip)催眠作用的影响 ;并用分光光度法测定肝微粒体苯胺羟化酶 (ANH)和氨基比林N 脱甲基酶 (ADM)活性。结果 :TCP呈剂量依赖性地延长戊巴比妥钠的催眠时间 ,但对巴比妥钠的催眠时间无明显影响 ;且TCP能显著降低ANH和ADM活性。结论 :TCP能抑制小鼠肝药酶活性。

预混合自组装辣根过氧化物酶生物活性膜及其催化活性研究

以阳离子化的辣根过氧化物酶 (HRP)和阴离子聚苯乙烯磺酸钠 (PSS)的预混合溶液 ,与阳离子聚电解质聚二甲基二烯丙基氯化铵 (PDDA)通过逐层组装 ,在阴离子化聚对苯二酸乙二酯 (PET)表面构建了多层生物活性膜 .用紫外 可见光谱仪 (UV Vis)和原子力显微镜 (AFM)研究了交替自组装膜的结构和表面形膜 ,并测定了自组装膜的生物催化活性 .结果表明 ,预混合溶液中的PSS与HRP一起沉积在PDDA膜层上组装成 (PSS+HRP)膜层 ,且每层中PSS和HRP的比例一致 ;(PSS +HRP)膜层呈条状分布 ,膜表面较为平整 ;多层膜中的HRP催化H2 O2 与 4 氨基安替比林的显色反应的表观米氏常数为 9 7× 10 - 5mol·L- 1 (相对于H2 O2 底物 ) ,较溶液中 (1 5 2× 10 - 4mol·L- 1 )的小 .

灯盏花素注射液对鼠催眠、肝脏指数、肝微粒体细胞色素P450系及相关酶系的影响研究

目的观察灯盏花素注射液对鼠催眠时间、肝脏指数、肝微粒体细胞色素P450（CYP）、细胞色素b5（Cytb5）及苯胺羟化酶（ANH）、氨基比林N-脱甲基酶（ADM）活性的影响。方法采用随机方法将实验动物分为对照组、苯巴比妥（40mg）组、灯盏花素注射液25mg和50mg组，均每日给药1次，连用20d。观察各药对动物催眠时间的影响；计算肝脏指数；用双缩脲法测定肝微粒体蛋白质和CYP含量；用分光光度法测定肝微粒体CYP和Cytb5的含量及ANH、ADM的活性。结果①灯盏花素两个剂量组对小鼠催眠时间显著缩短，但缩短程度显著小于苯巴比妥组（P均〈0.01）。②灯盏花素两个剂量组小鼠肝脏指数及CYP含量均较对照组显著提高，且高剂量组更加明显，但提高程度显著小于苯巴比妥组（P〈0.05或P〈0.01）。③灯盏花素两个剂量组大鼠肝CYP和Cytb5含量均较对照组显著增加，尤以CYP含量增加更为显著，但增加程度明显小于苯巴比妥组（P〈0.05或P〈0.01）。与对照组比较，灯盏花素两个剂量组ANH活性未见明显变化（P均〉0.05），但能显著提高ADM活性（P均〈0.01）。苯巴比妥组ANH和ADM活性均显著升高，且明显高于灯盏花素两个剂量组（P〈0.05或P〈0.01）。结论灯盏花素注射液对鼠催眠时间、肝脏指数和肝微粒体CYP、Ctyb5、ANH、ADM有影响和诱导作用，但影响和诱导能力显著弱于苯巴比妥。

2甲基3羟基丁酰辅酶A脱氢酶缺陷症一家系基因突变分析

目的对一个2甲基3羟基丁酰辅酶A脱氢酶缺陷症（MHBDD）家系进行基因突变分析，为疾病的诊断及遗传咨询提供依据。方法采集患儿及父母外周静脉血，分别提取，e2,RNA及基因组DNA。应用RT—PCR方法扩增ACATl基因全编码区序列。应用PCR方法扩增ACATl基因启动子序列及HADH2基因全部外显子编码区及两侧内含子区域。所有扩增产物，均进行直接测序并与参考序列进行比对。结果患儿1岁1个月，主要表现为精神运动发育迟缓，就诊时尚不能独站，生化检测血乳酸升高（3．19mmol／L），头颅核磁提示髓鞘发育延迟，气相色谱质谱检测提示乙酰乙酰辅酶A硫解酶缺陷症。ACATl基因全编码区及启动子区域未见异常突变位点，HADH2基因第4外显子发生c．388C〉T（P．R130C）半合子改变，使编码的第130位精氨酸变成了半胱氨酸。患者母亲该位点为杂合改变，父亲正常。结论通过基因突变分析确诊了1例2甲基3羟基丁酰辅酶A脱氢酶缺陷症患儿，P.R130C是该患儿的致病突变，为准确的遗传咨询提供了可能。

大口黑鲈原代肝细胞的培养及其应用于CYP450活性的诱导

体外培养大口黑鲈（Micropterus salmoides）原代肝细胞，观察其在培养过程中的形态变化，同时检测培养上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）、白蛋白（ALh）含量，从而判定肝细胞的增殖和代谢能力，进而应用于CYP450的诱导研究。结果表明：培养5d后，肝细胞连接成片，分裂增多；培养至7d，细胞渐至单层；14d后，细胞停止生长，出现老化迹象。培养至第3—4天的细胞上清液中LDH的渗出量呈上升趋势，在第4天时达到峰值，随着培养时间的延长，肝细胞的酶渗出量逐渐减少。ALh的分泌量在第3—5天呈上升的趋势，第4—8天维持在较高水平，在第5天达到最高，此后随着培养时间的延长，ALb的分泌量呈下降趋势，故选择培养至第5天的大口黑鲈肝细胞应用于CYP450酶系中的氨基比林-N-脱甲基酶（ANDM）的诱导研究。40μM利福平诱导24h后，ANDM活性最高。ANDM的诱导研究为鱼类细胞药物代谢酶体外诱导奠定基础。

三种中药及绿茶对烟焦油引起的小鼠肝ANDM和GST活性变化的影响

通过烟焦油对小鼠肝微粒体ANDM和GST的作用,探讨甘草、黄芪、五味子及绿茶的抗烟毒作用。采用钙沉淀法制备肝微粒体,Lowry法测定蛋白含量并测定小鼠肝微粒体中的ANDM、GST活性水平。结果表明,2%LD50(0.01 g/kg)的烟焦油可使小鼠肝脏中ANDM显著升高,对GST的影响不明显,经统计学检验差异无显著性(P>0.05)。大剂量甘草、黄芪、五味子及绿茶组可使焦油升高的ANDM明显降低,并明显升高GST活性,经统计学检验差异有显著性(P<0.01)。说明甘草、黄芪、五味子及绿茶有明显的抗烟毒作用。

不同浓度磺胺二甲嘧啶对中国对虾APND、ECOD和GST活性的影响

为研究药物代谢酶对磺胺二甲嘧啶作用的响应及其在中国对虾代谢磺胺二甲嘧啶过程中的作用,以50、100和150mg/kg(干重)磺胺二甲嘧啶连续投喂中国对虾5d,于投喂后的第1、2、3、4、5天和停止投喂药物的第1、2、3、4、5、7、10天取样,测定中国对虾肝胰腺、鳃和血清中的氨基比林-N-脱甲基酶(Aminopyrine-N-demethylase,APND)、7-乙氧基香豆素-O-脱乙基酶(7-ethoxycoumarin-O-Deethylase,ECOD)和谷胱甘肽还原转移酶活性(Glutathione-S-transferase,GST)的含量。研究表明:磺胺二甲嘧啶对中国对虾肝胰腺、鳃和血清中I相药物代谢酶(APND、ECOD)活性的抑制作用均具有剂量依赖性。投喂药物期间,酶活性呈逐渐下降趋势,而停止投喂后,酶活性呈逐渐上升趋势,至实验结束时均恢复至对照组水平。在整个实验周期内,高浓度组的血清GST活性呈现抑制作用,其它浓度磺胺二甲嘧啶组的各组织中GST活性呈现诱导作用。磺胺二甲嘧啶对中国对虾肝胰腺和鳃ECOD活性发生抑制作用的时间较ANPD晚。结果表明:中国对虾对磺胺二甲嘧啶的代谢,一方面通过抑制I相代谢酶的活性,抑制药物的活化,另一方面通过诱导II相代谢酶的活性,加速药物的解毒与代谢。在实际生产中,磺胺类药物通常会与增效剂甲氧苄啶合用以提高药效,应考虑磺胺二甲嘧啶对药物代谢酶的抑制作用,以减轻甲氧苄啶可能在体内的蓄积和毒效作用。

烟焦油及被动吸烟对小鼠肺微粒体ANDM、GST活力的影响

目的探讨烟焦油和被动吸烟对小鼠肺微粒体氨基比林-N-脱甲基酶(ANDM)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的影响。方法以1%LD50(5.29 mg/kg)、2%LD50(10.58 mg/kg)和3%LD50(15.87 mg/kg)的烟焦油腹腔注射使小鼠染毒,每日1次。3 d后测定小鼠肺微粒体中的ANDM、GST活力。被动吸烟组置于体积50 L的染毒柜中,烟雾浓度为69.41 g/m2,每日2次,每次30 min。对照组不吸烟但处于相同条件,2周后测定肺中ANDM和GST的活力。结果2%LD50和3%LD50的烟焦油及被动吸烟组小鼠肺脏中ANDM升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),两种处理法对GST活力的影响与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论烟焦油和被动吸烟可以升高小鼠肺微粒体ANDM的活力,对GST的活力影响不明显。

恩诺沙星对脊尾白虾APND、ECOD和GST活性的影响

为研究脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)药物代谢酶对恩诺沙星的响应及其在恩诺沙星代谢过程中的作用,作者以10、20和40 mg/kg恩诺沙星连续投喂脊尾白虾3 d,于投喂后的第1、2天以及停止投喂药物的第1、4、8、12、24、48、72、120小时取样,测定了脊尾白虾肝胰腺、鳃和血清中的氨基比林-N-脱甲基酶(aminopyrine-N-demethylase,APND)、7-乙氧基香豆素-O-脱乙基酶(7-ethoxycoumarinO-Deethylase,ECOD)和谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)的活性。结果表明:不同浓度恩诺沙星对脊尾白虾肝胰腺、鳃和血清中Ⅰ相药物代谢酶APND和ECOD活性均呈现显著抑制作用(P<0.05)。投喂药物后,APND和ECOD活性呈现先下降后逐渐上升趋势,3个剂量组酶活性均在最后一次给药后8 h达到最低。与对照组相比,不同浓度恩诺沙星对各组织中Ⅱ相药物代谢酶GST活性呈现显著诱导作用(P<0.05),此作用呈现先上升后下降的趋势。恩诺沙星对脊尾白虾APND、ECOD及GST活性的作用均呈现剂量依赖性。本研究表明,脊尾白虾Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶均会对药物做出反应,可作为其养殖过程中药物代谢及适用性的指示物。

草鱼肝细胞系中CYP3A活性检测方法

红霉素-N-脱甲基酶(ERND)是细胞色素P450 3A(CYP3A)依赖的酶类,可通过测定该酶催化代谢产物甲醛的量来反映其活性,从而评价CYP3A活性的高低。以草鱼肝细胞系(GCL)为模型,红霉素为底物,采用Nash比色法检测ERND产物甲醛含量,Lowry比色法测定细胞蛋白含量,建立鱼类细胞中CYP3A活性的简便检测方法。研究表明,底物以0.4 mmol/L作用60 m in后进行检测较为合适。细胞样品中ERND产物甲醛平均回收率为78.80%±4.37%,平均日内精密度为2.80%±1.40%,平均日间精密度为3.91%±1.45%,通过计算探针酶ERND活性可为鱼类细胞CYP3A活性的评价提供简便可靠的方法,从而为鱼类药物代谢酶体外诱导模型的研究奠定了基础。

葛根素对鼠肝微粒体细胞色素P450的影响

目的:观察葛根素对鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP)的影响。方法:实验动物分别腹腔注射生理盐水、苯巴比妥(40mg/kg.d)、葛根素(100和200 mg/kg.d),给药7d后,用分光光度法测定肝微粒体CYP和细胞色素b5(Cytb5)的含量,以及苯胺羟化酶(ANH)和氨基比林N-脱甲基酶(ADM)的活性。结果:苯巴比妥和葛根素均能显著缩短戊巴比妥钠对小鼠的催眠时间,显著提高小鼠肝脏指数、CYP含量,以及大鼠CYP和Cytb5含量,且以苯巴比妥组更为显著。苯巴比妥能非常显著地提高大鼠ANH和ADM活性,葛根素仅提高ADM活性,对ANH无明显影响。结论:葛根素对小鼠和大鼠肝微粒体CYP有诱导作用,但诱导能力显著弱于苯巴比妥。