铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

目的了解氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌16S r RNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的携带情况,探讨铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药机制。方法收集临床分离的氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌35株,采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)检测arm-A、rmt-A、rmt-B、rmt-C、rmt-D 5种16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ6种氨基糖苷修饰酶基因。结果对氨基糖苷类药物耐药的铜绿假单胞菌同时对多种其他抗菌药物耐药,仅碳青霉烯类的亚胺培南耐药率较低,为5.7%。21株检出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因,占60.0%;30株检出氨基糖苷修饰酶基因,占85.7%,其中28株检出aac(3)-Ⅱ基因,占80.0%,18株检出ant(3″)-Ⅰ基因,占51.4%,其余8种基因未检出。结论在铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药的菌株中,检测出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷修饰酶基因,铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。

88株嗜麦芽窄食单孢菌氨基糖苷类耐药性及其修饰酶基因分析

目的明确2005年8月至2007年7月临床分离的88株嗜麦芽窄食单孢菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及其修饰酶基因的存在状况。方法用Kirby-Bauer(K-B)药敏试验分析88株嗜麦芽窄食单孢菌对3种常用氨基糖苷类抗生素阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的敏感性,再用聚合酶链反应(PCR)法分别扩增常见的8种氨基糖苷修饰酶基因。结果这88株嗜麦芽窄食单孢菌同时对3种氨基糖苷类抗生素都耐药的有19株,占21.6%(19/88);同时对这3种抗生素都敏感的有12株,占13.6%(12/88);对阿米卡星,庆大霉素和妥布霉素的耐药率分别为22%,69.3%和58%,敏感率分别为70%,22.7%和23.9%。氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅰ和ant(4′)-Ⅱ未检测到;其余6种基因中,aac(3)-Ⅱ,ant(2″)-Ⅰ,aac(6′)-Ⅰ,aac(3)-Ⅲ,aac(3)-Ⅳ和aac(6′)-Ⅱ)的检出率分别是2.3%,5.7%,8%,11.4%,11.4%和12.5%。结论临床分离的嗜麦芽窄食单孢菌对氨基糖苷类修饰酶携带率不是很高,但氨基糖苷类抗生素耐药情况却很严重。

广州地区产AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的调查广州地区临床分离产AmpC酶肺炎克雷伯菌对抗菌药物耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分布。方法采用纸片扩散法(即K-B法)测定51株产AmpC肺炎克雷伯菌对15种抗菌药物的耐药情况,聚合酶链反应(PCR)分析ampC和氨基糖苷修饰酶基因型。结果51株产AmpC肺炎克雷伯菌呈现多重耐药,对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为39.2%、66.7%、58.8%和43.1%,除亚胺培南外其余抗生素耐药率在47.0%-100%;41株(80.3%)检出氨基糖苷修饰酶基因。结论临床分离的产AmpC酶肺炎克雷伯菌多重耐药严重,氨基糖苷修饰酶基因携带率很高。

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠埃希菌(ECO)新的氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法用聚合酶链反应(PCR)法对34株分离自患者的ECO进行aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果34株ECO中氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性8株(23.5%)、aac(3)-Ⅱ阳性27株(39.4%)、ant(3″)-Ⅰ阳性3株(8.8%),其余基因均阴性。结论氨基糖苷类高耐药性与氨基糖苷类修饰酶基因高检出率(85.3%)有关;在同一所医院的ECO中同时检出aac(6′)-Ⅰb和aac(6′)-Ⅰb-cr两种亚型,为国内外首次报道。

铜绿假单胞菌在重症监护病房分离株氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解分离自重症监护病房(ICU)患者的铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法对21株铜绿假单胞菌(PAE),采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果本组21株PAE菌中aac(3)-Ⅱ阳性4株(19.0%)、aac(6′)-Ⅰ阳性5株(23.8%)、aac(6′)-Ⅱ阳性2株(9.5%)、ant(3″)-Ⅰ阳性1株(4.8%)和ant(2″)-Ⅰ阳性4株(19.0%),aac(3)-Ⅰ为阴性,共有9株检出氨基糖苷类修饰酶基因(42.8%)。结论分离自ICU患者的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及qacEΔ1基因检测研究

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pa)的耐药机制,为临床使用氨基糖苷类药物治疗Pa感染和消毒灭菌工作提供参考。方法采用琼脂稀释法从临床分离的Pa中筛选出35株多重耐药菌株,用PCR方法检测这些菌株中氨基糖苷类修饰酶编码基因及qacEΔ1基因存在状况。结果35株Pa中aac(3)Ⅱ、aa(6′)Ⅱ、ant(3″)Ⅰ和ant(2″)Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为48.6%、40.0%、54.3%、45.7%和60.0%,绝大多数菌株携带2种或2种以上的氨基糖苷类修饰酶基因,而qacEΔ1基因检出率也达到94.3%。结论铜绿假单胞菌产生氨基糖苷修饰酶与该菌的多重耐药有密切关系,临床治疗Pa感染应参考药敏试验结果,慎选氨基糖苷类药物;同时在消毒灭菌工作中,不宜继续使用季铵盐类、双胍类等作为常用消毒剂。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物修饰酶基因研究

目的调查铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特性及氨基糖苷类药物修饰酶基因表达。方法用Phoen ixTM-100系统鉴定细菌和药敏试验。用琼脂扩散法检测20株多重耐药铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星4种药物的敏感性。采用聚合酶链反应(PCR)扩增4种氨基糖苷类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果190株铜绿假单胞菌对氯霉素、四环素、复方磺胺耐药率最高,均为98.9%;对亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为15.3%和6.8%。从20株菌中检出aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ3种修饰酶基因,阳性率分别为10%、60%和65%,未发现ant(3″)-Ⅰ基因。20株菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为35.0%、90.0%、70.0%、60.0%。结论本地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药与修饰酶基因的传播表达有关。

儿科患者鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因的表达

目的研究从儿科肺炎患者中分离的鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性和常见的7种氨基糖苷类修饰酶基因特征。方法56株鲍曼不动杆菌(AB)收集自2006年分离的儿科临床肺炎患儿的深部痰培养标本,均采用VITEK-32全自动微生物鉴定仪GNI和GNS卡进行细菌鉴定和药敏试验。氨基糖苷类修饰酶基因检测采用聚合酶链式反应(PCR)方法。结果检测的56株鲍曼不动杆菌菌有8株呈多重耐药性,阳性率14.29%,8株多重耐药菌对氨基糖苷类药物阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素均耐药,其余菌株对氨基糖苷类药物均敏感,氨基糖苷类药物的耐药率14.29%。除呋喃妥因及β-内酰胺类抗生素氨苄西林、头孢唑林和头孢曲松外其它抗生素的耐药率均在15%以下。7种氨基糖苷类修饰酶基因中检出2株aac(3)-Ⅱ(3.57%),2株aac(6')-Ⅰb(3.57%),4株aac(6')-Ⅱ(7.14%),6株ant(3″)-Ⅰ(10.71%);aac(3)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和aac(6')-Ⅰad均阴性。对3种氨基糖苷类抗生素耐药的菌株均检出了氨基糖苷类修饰酶基因。结论(1)儿科患者虽然极少应用氨基糖苷类抗生素,但由于氨基糖苷类修饰酶基因可借助于整合子、转座子和质粒等在同种和异种细菌间传播,使其对氨基糖苷类抗生素也产生了一定的耐药性。(2)鲍曼不动杆菌儿科患者分离株对阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素的耐药与aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ和ant(3″)-Ⅰ四种基因有关。不同地区细菌的修饰酶基因有很大差异,而儿童与成人患者亦有不同,因此要重视儿科患者鲍曼不动杆菌氨基糖苷类抗生素耐药性和耐药基因研究。

氨基糖苷类修饰酶基因aac(2')-Ib型在耐药鲍曼不动杆菌中流行

目的调查一组耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类的耐药机制。方法收集2013年1至3月江苏省淮安市第一人民医院住院患者标本中分离到的鲍曼不动杆菌共32株,用分子鉴定法确认为鲍曼不动杆菌,再用聚合酶链反应(PCR)方法分析9种氨基糖苷类修饰酶基因与7种16S r RNA甲基化酶基因。结果本组32株耐药鲍曼不动杆菌共检出5种氨基糖苷类修饰酶基因:aac(2')-Ib 32株(100.0%)、aac(3)-I 15株(46.9%)、aac(6')-Ib 19株(59.4%)、ant(3'')-I 20株(62.5%)、aph(3')-I 19株(59.4%),与1种16S r RNA甲基化酶基因arm A 25株(78.1%)。阳性基因共分为7种检测模式,其中以aac(2')-Ib+aac(3)-I+aac(6')-Ib+ant(3'')-I+aph(3')-I+arm A等6种基因均阳性的模式最高,为12株(37.5%)。结论产5种氨基糖苷类修饰酶基因(aac(2')-Ib、aac(3)-I、aac(6')-Ib、ant(3'')-I、aph(3')-I)与1种16S r RNA甲基化酶基因arm A是本组耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类耐药的重要原因。在鲍曼不动杆菌临床分离株检出aac(2')-Ib型氨基糖苷类修饰酶基因为国内首次报道。

烧伤病房鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解医院烧伤病房鲍氏不动杆菌的耐药情况及氨基糖苷类修饰酶基因表达。方法收集2005年1月-2006年12月间,从烧伤病房住院患者中分离到鲍氏不动杆菌共76株,采用K-B法进行抗菌药物敏感试验,根据美国CLSI/NCCLS 2006年版要求进行抗菌药物敏感性判断,应用聚合酶链反应(PCR)技术对鲍氏不动杆菌进行氨基糖苷类修饰酶基因检测。结果鲍氏不动杆菌对11种抗菌药物耐药严重,耐药率:哌拉西林/他唑巴坦61.85%、头孢哌酮/舒巴坦23.69%、头孢他啶64.48%、头孢吡肟63.17%、亚胺培南63.17%、阿米卡星56.58%、环丙沙星73.69%;76株鲍氏不动杆菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰ阳性48株(63.16%)、aac(6′)-Ⅰ阳性39株(51.32%)、ant(3″)-Ⅰ阳性46株(60.53%),其余基因均阴性,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为63.16%。结论烧伤病房鲍氏不动杆菌具有多药耐药性,3种氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为63.16%,另3种氨基糖苷类修饰酶基因检测阴性,可能存在其他修饰酶基因。

浙江丽水铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶编码基因研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶编码基因存在状况。方法对临床分离的40株铜绿假单胞菌采用聚合酶链反应(PCR)检测基因[aac(3)-II、aac(6′)-I、aac(6′)-II、ant(3")-I、ant(2")-I]。结果40株菌中aac(6′)-I阳性18株(45.0%)、ant(2")-I阳性21株(52.5%),其余基因均阴性。结论丽水临床分离的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶编码基因携带率高。

产ESBLs大肠杆菌的耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠杆菌的耐药性,尤其要了解产ESBLs大肠杆菌氨基糖苷类的耐药性及其修饰酶基因流行情况。方法2006年1～12月我院分离的大肠杆菌用VITEK-32GNI+鉴定,K-B法检测对氨基糖苷类、β-内酰氨类等18种抗菌药物的耐药性,并对其中17株产ESBLs大肠杆菌用聚合酶连反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ。结果产ESBLs大肠杆菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢唑啉、头孢匹肟、头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、头孢西丁、呋喃妥因、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、复方新诺明的耐药率分别为100%、100%、41.6%、100%、69.5%、30.5%、98.2%、81.0%、81.0%、79.6%、79.2%、34.4%、12.5%、7.1%、7.9%、5.4%、81.0%、,未见亚安培南耐药株,产ESBLs检出率为46.4%。其中17株产ESBLs大肠杆菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率分别为52.9%(9/17)、100%(17/17)和100%(17/17)。氨基糖苷类酰基转移酶基因检出率以aac(3)-Ⅱ最高,占94.1%,aac(6′)-Ⅰb次之,占35.3%,ant(3″-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ较低,分别占11.8%和5.9%,其中1株表型耐药,但未检出以上基因。6株aac(6′)-Ⅰb阳性的大肠杆菌,经DNA序列测定,其中4株为经典型,1株为aac(6′)-Ⅰb-Cr型,另外1株为aac(6′)-Ⅰb新亚型。结论大肠杆菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠杆菌多重耐药更为突出。氨基糖苷糖苷类修饰酶基因以aac(3)-Ⅱ最高,aac(6′)-Ⅰb次之,ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ较低,aac(3)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅱ未检出。大肠杆菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb至少存在3种型别,以经典型为主,同时存在aac(6′)-Ⅰb-Cr型和aac(6′)-Ⅰb新亚型。

多重耐药大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶与Ⅰ类整合酶基因的研究

目的探讨本地区临床分离多重耐药大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的氨基糖苷类修饰酶和I类整合子基因存在情况。方法纸片扩散法(K-B法)测定71株大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药性,应用PCR技术对E.coli进行氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因的检测。结果 71株大肠埃希菌对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟、头孢他啶的耐药率分别分为66.20%、63.38%、59.15%、18.31%,其中23株为多重耐药株(32.39%)。氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-II阳性40株(56.34%),aac(6')-I阳性22株(30.99%),ant(3")-I阳性14株(19.72%),未检出aac(6')-II阳性株,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为74.65%;I类整合酶基因(intI1)阳性53株(74.65%)。多重耐药与非多重耐药大肠埃希菌中aac(3)-II、aac(6')-I、总氨基糖苷类修饰酶基因、intI1的阳性率有统计学差异(P<0.05)。结论本地区多重耐药E.coli的氨基糖苷类修饰酶基因、I类整合酶基因携带率高。

多耐药肺炎克雷伯菌同时携带16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因

目的调查肺炎克雷伯菌中16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)的存在情况。方法收集绍兴市人民医院2007年10月到2009年6月患者标本中分离的肺炎克雷伯菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析6种16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA)和14种AMEs基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、aadA4/5、aadA6/16、ant(4′)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅱa、aph(3′)-Ⅱb]。结果 20株肺炎克雷伯菌共检出1种16S rRNA甲基化酶基因:rmtB8株(40.0%);5种氨基糖苷类修饰酶基因:aac(3)-Ⅱ17株(85.0%),ant(3")-Ⅰ12株(60.0%),aph(3′)-Ⅰ6株(30.0%),aac(6′)-Ⅰb2株(10.0%),aadA52株(10.0%),其余14种基因未检出。20株菌均检出16S rRNA甲基化酶基因2氨基糖苷类修饰酶基因,与庆大霉素全部耐药的表型相符。8株rmtB阳性株同时携带氨基糖苷类修饰酶基因,可分为4种阳性检出模式,其中[rmtB+aac(3)-Ⅱ+ant3"-Ⅰ]模式检出率最高,共4株(20.0%)。结论在多耐药肺炎克雷伯菌中发现同时携带16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因的菌株国内鲜见报道。携带16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因是本组菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。

嗜麦芽窄食单胞菌产氨基糖苷类修饰酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ的克隆与表达

目的对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch810(SM gzch810)携带的产氨基糖苷类修饰酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ进行扩增、测序及原核表达,为下一步功能试验的开展提供基础材料。方法提取SM gzch810基因组染色体,PCR扩增APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分析;将APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ基因克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果以染色体DNA为模板,成功扩增800bp APH(3′′)-Ⅰ基因和550bp AAC(2′)-Ⅰ基因;序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性分别达91%及95%;SM gzch810APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ序列已登录GenBank(登录号:HQ315852和HQ315853);SDS-PAGE显示,融合基因表达的蛋白相对分子质量分别约为56×103和46×103。结论从SM gzch810中成功克隆及表达了APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ基因,为下一步检测上述两种重组体大肠杆菌对相应抗菌药物的耐药性及其功能评价做好准备。

肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因检测的临床应用

目的评价应用检测氨基糖苷类修饰酶基因判断肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药性。方法对61株肺炎克雷伯菌采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,再采用聚合酶链反应检测氨基糖苷类修饰酶基因并比较分析。结果61株肺炎克雷伯菌对AMK、GEN、TOB、NET耐药率分别为52.4%、86.9%、91.8%、78.7%;氨基糖苷类修饰酶基因检出率(56/61)91.8%,其中aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ检出率分别为13.1%、60.7%、55.7%、4.0%、6.6%、26.2%。结论采用聚合酶链反应法检测肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因判断耐药与K-B纸片扩散法高度一致,灵敏度高,特异性强,是筛选氨基糖苷类抗菌药物耐药的可靠方法。

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的:对临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因进行研究,以指导临床合理应用抗生素。方法:K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验,PCR法检测8种氨基糖苷类修饰酶基因,并对PCR产物进行测序。结果:70株ABA对13种药物的耐药率均在65%以上,仅对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美洛培南的敏感率较高。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为64.29%(45/70),其中aac(6')-Ⅰ检出率最高为41.40%,其次为基因aac(3)-Ⅱ,aac(3)-Ⅰ和ant(3〞)-Ⅰ,检出率分别为34.29%,31.435%和25.71%;未检出aac(6')-Ⅱ,ant(2〞)-Ⅰ,aph(3')-Ⅰ及aph(3')-Ⅱ基因。结论:氨基糖苷类修饰酶基因aac(6')-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ及ant(3〞)-Ⅰ为本地区鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。

产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药性及其耐药基因序列分析

目的研究云南玉溪市江川地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性及其耐药基因表达的频率,并对其耐药基因进行测序分析。方法采用纸片扩散法检测32株产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药性。采用聚合酶链反应(PCR)检测7种氨基糖苷类修饰酶(AME)基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰad、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ]和6种16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA),采用双脱氧末端终止法对aac(3)-Ⅱ基因进行测序分析。结果 32株产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素、阿米卡星、奈替米星、卡那霉素和妥布霉素的耐药率分别为100%、0%、0%、18%和87%。有6株菌株同时携带2种AME基因。从32株产ESBLs大肠埃希菌中检出aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ4种AME基因,阳性率分别为100%、9.4%、6.2%和3.1%;未检出16S rRNA甲基化酶基因。32株产ESBLs大肠埃希菌中有4株发生相同的aac(3)-Ⅱ突变,分别为G232A、T251C、G580A和T612A。8株不产ESBLs大肠埃希菌均未检出AME基因及16S rRNA甲基化酶基因。结论云南玉溪市江川地区产ESBLs大肠埃希菌耐氨基糖苷类药物与AME基因表达有关,奈替米星的耐药率增加可能与aac(3)-Ⅱ基因突变有关。

耐阿米卡星铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药基因及其基因型研究

目的了解耐阿米卡星(AMK)铜绿假单胞菌(Pa)的氨基糖苷类修饰酶基因和氨基糖苷耐药基因的存在情况及其基因型。方法对临床分离的72株多重耐药Pa(其中对AMK耐药Pa组和对AMK敏感Pa组各36株)分别用聚合酶链反应(PCR)测定9种主要的氨基糖苷类修饰酶基因和2种氨基糖苷耐药基因,用基因外重复回文序列(REP)-PCR进行基因型研究。结果在分组研究中AMK耐药Pa组表现为aac(6′)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ基因同时阳性的占42.4%,aac(6′)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ基因同时阳性的占36.4%,是耐药组的主要修饰酶基因;AMK敏感Pa组表现为aac(6′)-Ⅰ基因阳性的占50.0%,aac(3)-Ⅱ基因阳性的占33.2%,是敏感组的主要修饰酶基因。2种氨基糖苷耐药基因(RmtA和RmtD)均为阴性。REP-PCR显示耐药菌株可分为A～G 7型,其中AMK耐药Pa组的主要分型为F型(其中尤以F1型为多);AMK敏感Pa组以E型为多见。结论通过2种或多种氨基糖苷类修饰酶同时作用于AMK是Pa对AMK耐药的重要途径之一。

泛耐药鲍曼不动杆菌新疆分离株氨基糖苷类药物耐药机制研究

目的:探讨一组分离自新疆的泛耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物的耐药机制。方法:收集患者标本中分离的泛耐药鲍曼不动杆菌共20株,用聚合酶链反应(PCR)的方法分析5种氨基糖苷类修饰酶基因、2种16SrRNA甲基化酶基因和外排泵蛋白AdeB编码基因adeB。结果:本组20株泛耐药鲍曼不动杆菌检出aac(3)-Ⅰ、aac(6’)-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ、aph(3’)-Ⅰ等4种氨基糖苷类修饰酶基因和armA 16SrRNA甲基化酶基因以及adeB外排泵基因,阳性基因共分为6种阳性模式。主要的阳性模式为(aac(3)-Ⅰ+aac(6’)-Ⅰb+ant(3")-Ⅰ+aph(3’)-Ⅰ+armA+adeB)六种基因阳性11株,占55%;(aac(3)-Ⅰ+aac(6’)-Ⅰb+ant(3")-Ⅰ+aph(3’)-Ⅰ+adeB)五种基因阳性4株,占20%;未检出ant(2")-Ⅰ及rmtB基因。结论:产修饰酶和产靶位甲基化酶以及AdeABC外排泵系统是导致本组菌株对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。