铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物修饰酶基因研究

目的调查铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特性及氨基糖苷类药物修饰酶基因表达。方法用Phoen ixTM-100系统鉴定细菌和药敏试验。用琼脂扩散法检测20株多重耐药铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星4种药物的敏感性。采用聚合酶链反应(PCR)扩增4种氨基糖苷类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果190株铜绿假单胞菌对氯霉素、四环素、复方磺胺耐药率最高,均为98.9%;对亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为15.3%和6.8%。从20株菌中检出aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ3种修饰酶基因,阳性率分别为10%、60%和65%,未发现ant(3″)-Ⅰ基因。20株菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为35.0%、90.0%、70.0%、60.0%。结论本地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药与修饰酶基因的传播表达有关。

南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型的调查

目的调查和研究南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型及其耐药特性。方法用K-B法测定97株鲍曼不动杆菌对庆大霉素、阿米卡星2种抗菌药物的耐药性,用PCR法检测氨基糖苷类药物修饰酶基因。结果同时耐庆大霉素、阿米卡星的鲍曼不动杆菌44株,庆大霉素耐药阿米卡星敏感的有4株,庆大霉素敏感阿米卡星耐药的有3株,从51株表型耐药菌中检出4种修饰酶基因,其中带有aac(3)Ⅰ-基因19株(37.3%);带有aac(3)-Ⅱ基因15株(29.4%);有aac(6′)-Ⅰ基因8株(15.7%);ant(3″)Ⅰ-基因为3株(5.8%);同时具有aac(3)Ⅰ-和aac(6′)Ⅰ-基因的5株(9.8%);有aac(3)-Ⅱ和aac(6′)Ⅰ-基因的1株(1.9%)。结论南京地区鲍曼不动杆菌所带基因以aac(3)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ为主,其与氨基糖苷类药物耐药有一定的关系。

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型的研究

目的 研究常州地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型及其耐药特点。 方法 用琼脂稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星等 4种药物对 2 0株多重耐药性鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度。用PCR法检测氨基糖苷类药物修饰酶基因。 结果 庆大霉素、阿米卡星对 2 0株鲍曼不动杆菌MIC50 、MIC90 均 >10 2 4mg/L ,耐药率分别为 10 0 %、90 %。奈替米星、妥布霉素的耐药率分别为85 %、80 %。鲍曼不动杆菌对庆大霉素等 4种抗生素为高浓度耐药。从 2 0株菌中检出两种修饰酶基因 ,其中 16株带有aac(3) Ⅰ基因 ,3株带有aac(6 ') Ⅰ基因 ;3株菌同时具有上述两种基因 ,未检出aph(3) Ⅵ基因。 结论 常州地区鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药与aac(3) Ⅰ、aac(6 ')

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠埃希菌(ECO)新的氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法用聚合酶链反应(PCR)法对34株分离自患者的ECO进行aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果34株ECO中氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性8株(23.5%)、aac(3)-Ⅱ阳性27株(39.4%)、ant(3″)-Ⅰ阳性3株(8.8%),其余基因均阴性。结论氨基糖苷类高耐药性与氨基糖苷类修饰酶基因高检出率(85.3%)有关;在同一所医院的ECO中同时检出aac(6′)-Ⅰb和aac(6′)-Ⅰb-cr两种亚型,为国内外首次报道。

多药耐药铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的研究铜绿假单胞菌连续分离株的16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因的分布状况。方法以K-B法检测铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果20株铜绿假单胞菌检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);检出5种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为:aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ;1号株和3号株进行甲基化rmtB基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的rmtB氨基酸序列比较,均存在氨基酸序列差别,因此均可确认为新亚型。结论医院铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗菌药物耐药主要与16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB及5种氨基糖苷类修饰基因有关,并发现两种铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB新亚型。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学研究

目的 研究铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学。方法 用 PCR方法对 35 株铜绿假单胞菌的氨基糖苷类耐药相关基因、氨基糖苷类修饰酶基因 aac(3) Ⅰ、aac(3) Ⅱ、aac(3) Ⅲ、aac(3) Ⅳ、aac(6′) Ⅰ、aac(6′) Ⅱ、aph(3′) Ⅵ、ant(3″) Ⅰ和ant(2″) Ⅰ等9种基因进行了检测与分析。结果 35株中20株检出氨基糖苷类修饰酶基因(57 1%);9种基因由高到低的检出率分别为 aac(6′) Ⅱ(34 2%)、ant(2″) Ⅰ(28 6%)、aac(3) Ⅱ(17 1%)、aac(6′) Ⅰ(17 1%)、ant(3″) Ⅰ(14 3%) 、aac(3) Ⅰ(0)、aac(3) Ⅲ(0)、aac(3) Ⅳ(0)、aph(3′) Ⅵ(0)。结论 本研究表明,湖北襄樊地区铜绿假单胞菌耐氨基糖苷类药物,主要机制为产氨基糖苷类修饰酶(57 1%),本组铜绿假单胞菌中另有15株表型为氨基糖苷类药物不敏感但 9 种基因检测为阴性,可能存在其他修饰酶基因,或者存在16S rRNA基因突变。

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因型别研究

目的研究大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb各亚型的流行情况。方法对氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性的菌株进行DNA序列测定,测得序列与已在美国国立生物信息中心(NCBI)登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族序列比对,确定型别。结果6株aac(6′)-Ⅰb阳性的大肠埃希菌,经DNA序列测定,其中4株为经典型,1株为aac(6′)-Ⅰb-Cr型,另外1株为aac(6′)-Ⅰb新亚型。结论大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb至少存在3种型别,以经典型为主,同时存在aac(6′)-Ⅰb-Cr型和aac(6′)-Ⅰb新亚型。

产ESBLs肺炎克雷伯菌中新的氨基糖苷类修饰酶基因型

目的:了解一株产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因存在情况。方法:采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ,aac(3)-Ⅱ,aac(6′)-Ⅱ,ant(3″)-Ⅰ,ant(2″)-Ⅰ,aac(6′)-Ⅰb,TEM,SHV,LEN,OKP,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-9,GES,PER,VEB,OXA-10,OXA-1,DHA,ACT-1,intI1基因,部分产物进行测序。结果:TEM、aac(6′)-Ⅰb、intI1阳性,其他阴性。aac(6′)-Ⅰb经测序并与已在美国国立生物信息中心[NCBI]登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族比对,发现与先前登录的均不相同(包括2006年初美国学者发现的新氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb-Cr型)。结论:从该株产ESBLs肺炎克雷伯菌中发现的aac(6′)-Ⅰb氨基糖苷类修饰酶为新的基因型。以aac(6′)-Ⅰb-Suzhou型命名,已登录于美国NCBI(登录号:EF375621)。

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因存在情况。方法根据美国CLSI/NCCLS2004年版要求进行抗菌药物敏感性试验,应用PCR技术对AB菌进行氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因检测。结果AB菌对13种抗菌药物耐药严重。27株AB菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-I阳性23株(85.2%)、aac(6′)-Ⅰ阳性18株(66.7%)、ant(3")-Ⅰ阳性22株(81.5%)。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为85.2%。I类整合酶基因(intI1)阳性23株(85.2%)。结论我院AB菌不仅具有多重耐药性,而且氨基糖苷类修饰酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高。

20株多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)氨基糖苷类修饰酶基因存在情况。方法采用PCR对20株MDR-ABA进行了aac(6′)-Ⅰad、aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ等4种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果20株MDR-ABA中aac(3)-Ⅰ阳性12株(60%)、aac(6′)-Ⅰb阳性15株(75%)、ant(3″)-Ⅰ阳性18株(90%),aac(6′)-Ⅰad基因阴性;本组20株MDR-ABA中未发现AAC新亚型aac(6′)-Ⅰad基因。结论20株MDR-ABA中均检出氨基糖苷类修饰酶基因;基因型与氨基糖苷类耐药表型相符,可导致克隆传播医院感染,对鲍氏不动杆菌进行aac(6′)-Ⅰad基因研究为国内首次。

铜绿假单胞菌在重症监护病房分离株氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解分离自重症监护病房(ICU)患者的铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法对21株铜绿假单胞菌(PAE),采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果本组21株PAE菌中aac(3)-Ⅱ阳性4株(19.0%)、aac(6′)-Ⅰ阳性5株(23.8%)、aac(6′)-Ⅱ阳性2株(9.5%)、ant(3″)-Ⅰ阳性1株(4.8%)和ant(2″)-Ⅰ阳性4株(19.0%),aac(3)-Ⅰ为阴性,共有9株检出氨基糖苷类修饰酶基因(42.8%)。结论分离自ICU患者的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及qacEΔ1基因检测研究

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pa)的耐药机制,为临床使用氨基糖苷类药物治疗Pa感染和消毒灭菌工作提供参考。方法采用琼脂稀释法从临床分离的Pa中筛选出35株多重耐药菌株,用PCR方法检测这些菌株中氨基糖苷类修饰酶编码基因及qacEΔ1基因存在状况。结果35株Pa中aac(3)Ⅱ、aa(6′)Ⅱ、ant(3″)Ⅰ和ant(2″)Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为48.6%、40.0%、54.3%、45.7%和60.0%,绝大多数菌株携带2种或2种以上的氨基糖苷类修饰酶基因,而qacEΔ1基因检出率也达到94.3%。结论铜绿假单胞菌产生氨基糖苷修饰酶与该菌的多重耐药有密切关系,临床治疗Pa感染应参考药敏试验结果,慎选氨基糖苷类药物;同时在消毒灭菌工作中,不宜继续使用季铵盐类、双胍类等作为常用消毒剂。

肺炎克雷伯菌多重耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的探讨KPN多重耐药性及AMEs基因携带状况,为临床治疗及控制医院感染提供依据。方法采用K-B纸片法进行药敏试验,筛选多重耐药KPN,三维试验检测ESBLs和AmpC酶,再用PCR检测AMEs基因并序列分析。结果61株多重耐药KPN对IMP无耐药,氨基糖苷类抗菌药物耐药率为60.7-100.%,其他抗菌药物耐药率为44.3～100%;产ESBLs、AmpC酶、同时产ESBLs和AmpC酶检出率分别为31.1%、14.8%、45.9%,有8.2%均未检出;AMEs基因阳性检出率86.9%,其中aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ和ant(2")-Ⅰ阳性检出率分别为13.1%、60.7%、55.7%、11.5%、6.6%和26.2%。结论KPN多重耐药严重,临床可选择的药物有限,产ESBLs、AmpC酶和携带AMEs基因较高,临床应根据药敏试验结果,合理选用抗菌药物,以便减少耐药菌株传播流行。

鲍氏不动杆菌耐消毒剂磺胺基因、Ⅰ类整合酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解鲍氏不动杆菌耐消毒剂磺胺基因(qacE△1-sulⅠ)、Ⅰ类整合酶基因(intI1)及氨基糖苷类修饰酶(aminoglycoside-modifyingenzymes,AMEs)基因存在情况。方法自临床分离20株鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析qacE△1-sulⅠ、intI1及9种AMEs基因。结果qacE△1-sulⅠ、intⅠ1、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅱ基因的阳性率分别为90.0%、20.0%、55.0%、15.0%、35.0%、60.0%和5.0%,而aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、ant(2″)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅵ基因均阴性。结论浙江省立同德医院临床分离的鲍氏不动杆菌多重耐药严重,耐消毒剂磺胺基因及AMEs基因携带率较高。

产ESBLs肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解产ESBLs肺炎克雷伯菌中氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果35株肺炎克雷伯菌中,共有26株检出氨基糖苷类修饰酶基因(74.3%)。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。

鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解临床分离的鲍氏不动杆菌中β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因存在状况。方法自临床分离39株鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因(TEM、SHV、PER、VEB、GES、CARB、CTX-M-1群、OXA-23群、OXA-24群、IMP、VIM、DHA、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ)。结果39株中TEM阳性13株(33.3%)、OXA-23群阳性20株(51.3%)、aac(3)-Ⅰ阳性25株(64.1%)、aac(6′)-Ⅰ阳性25株(64.1%)、ant(3″)-Ⅰ阳性29株(74.4%),其余基因均阴性。结论在绍兴临床分离的鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因携带率高。

儿科患者鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因的表达

目的研究从儿科肺炎患者中分离的鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性和常见的7种氨基糖苷类修饰酶基因特征。方法56株鲍曼不动杆菌(AB)收集自2006年分离的儿科临床肺炎患儿的深部痰培养标本,均采用VITEK-32全自动微生物鉴定仪GNI和GNS卡进行细菌鉴定和药敏试验。氨基糖苷类修饰酶基因检测采用聚合酶链式反应(PCR)方法。结果检测的56株鲍曼不动杆菌菌有8株呈多重耐药性,阳性率14.29%,8株多重耐药菌对氨基糖苷类药物阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素均耐药,其余菌株对氨基糖苷类药物均敏感,氨基糖苷类药物的耐药率14.29%。除呋喃妥因及β-内酰胺类抗生素氨苄西林、头孢唑林和头孢曲松外其它抗生素的耐药率均在15%以下。7种氨基糖苷类修饰酶基因中检出2株aac(3)-Ⅱ(3.57%),2株aac(6')-Ⅰb(3.57%),4株aac(6')-Ⅱ(7.14%),6株ant(3″)-Ⅰ(10.71%);aac(3)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和aac(6')-Ⅰad均阴性。对3种氨基糖苷类抗生素耐药的菌株均检出了氨基糖苷类修饰酶基因。结论(1)儿科患者虽然极少应用氨基糖苷类抗生素,但由于氨基糖苷类修饰酶基因可借助于整合子、转座子和质粒等在同种和异种细菌间传播,使其对氨基糖苷类抗生素也产生了一定的耐药性。(2)鲍曼不动杆菌儿科患者分离株对阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素的耐药与aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ和ant(3″)-Ⅰ四种基因有关。不同地区细菌的修饰酶基因有很大差异,而儿童与成人患者亦有不同,因此要重视儿科患者鲍曼不动杆菌氨基糖苷类抗生素耐药性和耐药基因研究。

多重耐药大肠埃希菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解多重耐药大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类药物耐药机制。方法采用PCR检测20株多重耐药ECO菌11种16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因。结果1株检出16S rRNA甲基化酶基因(5.0%),并为新亚型;16株检出氨基糖苷类修饰酶基因(80.0%)。15号株rmtB基因测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库(GenBank)已登录的rmtB氨基酸不同,为新亚型。结论本组多重耐药ECO菌氨基糖苷类耐药机制与产16S rRNA甲基化酶和产氨基糖苷类修饰酶相关。多重耐药ECO菌存在新的氨基糖苷类药物耐药机制。