肠球菌对氨基糖苷类高水平耐药机制的临床研究进展

耐氨基糖苷类高水平肠球菌(HLAR)是医院感染的重要病原菌,氨基糖苷类修饰酶(AME)是肠球菌对氨基糖苷类高水平耐药的主要机制,其中N-乙酰转移酶(AAC)、O-核苷转移酶(ANT)和O-磷酶转移酶(APH)是参与耐药基因表达的主要氨基糖苷类修饰酶类。现就氨基糖苷类修饰酶的耐药基因及其耐药基因的传播进行临床研究,从而为减少医院HLAR感染的发生提供分子生物学依据。

对氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌检测及药敏分析

近年来由于抗生素的大量使用，肠球菌氨苄青霉素耐药株和氨基糖苷类高耐药株逐渐增多，已使肠球菌所致重症感染的治疗成为临床棘手问题之一。临床上常采用联合用药来治疗肠球菌引起的感染，如青霉素、氨苄西林或万古霉素与氨基糖苷类药物的联合使用，但氨基糖苷类与其它药物联合使用在临床上是否有效，则取决于肠球菌对氨基糖苷类高水平筛选的药敏是否敏感。

肠球菌氨基糖苷类高水平耐药基因与毒力基因研究进展

肠球菌是引起医院感染常见的重要条件致病菌。近年来随着抗菌药物在临床的广泛使用,肠球菌的耐药水平迅速上升,肠球菌耐药机制的研究备受关注。本文就肠球菌氨基糖苷类高水平耐药基因与毒力基因研究综述如下。

牛、羊源大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及其耐药基因检测

为研究陕西榆林地区牛、羊源大肠杆菌的流行特点及其对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采集746份牛、羊粪便样本进行细菌分离纯化和大肠杆菌特异性引物phoA PCR鉴定,并对鉴定得到的大肠杆菌进行氨基糖苷类抗生素耐药性试验,对5种钝化酶基因AadA1、AbdB、Aph(3′)-Ⅰ、Aac(6′)-Ⅰb、Aac(3′)-Ⅱ进行PCR检测和同源性序列分析。结果显示,榆林地区大肠杆菌总检出率为42.49%;牛、羊源大肠杆菌对6种氨基糖苷类药物的耐药率从高到低依次为链霉素(70.7%)、卡那霉素(64.3%)、阿米卡星(47.9%)、庆大霉素(45.1%)、新霉素(39.4%)和妥布霉素(30.3%);多重耐药率(耐3种及3种以上药物)为67.0%;耐药基因AadA1和Aph(3′)-Ⅰ的检出率分别为79.5%和83.0%。综上表明,榆林地区检出的牛、羊大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性比较强,耐药基因以AadA1、Aph(3′)-Ⅰ为主。

阴沟肠杆菌的耐药性分析及氨基糖苷类相关耐药基因的初步研究

目的分析阴沟肠杆菌的耐药性,探讨氨基糖苷类相关耐药基因情况。方法应用PCR技术扩增阴沟肠杆菌的6种AMEs基因,2种16SrRNA甲基化酶基因和I类整合子基因(intI),分析这些基因与氨基糖苷类抗生素耐药的相关性。结果本院阴沟肠杆菌除对一代头孢、个别β-内酰胺酶抗生素耐药率较高外,其他抗生素耐药情况较好。9株氨基糖苷类耐药株共检出AMEs基因5种,其中aac(6')-Ib检出率最高,为66.67%,未检出aac3-Ⅲ基因;armA检出率44.44%;intI检出率77.78%。阴沟肠杆菌的耐药表型和基因型的相符合率为84.24%。结论本院阴沟肠杆菌耐药情况尚可,氨基糖苷类药物耐药性与AMEs基因密切相关,说明临床仍需加强对抗生素的监测与合理应用。

肠球菌氨基糖苷类高水平耐药基因的检测

目的 调查肠球菌对高水平氨基糖苷类的耐药情况 ,并检测其耐药基因。方法 琼脂稀释法筛选对氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌 ,PCR扩增 5种高耐药基因 :双功能酶AAC(6′) -APH(2″)的编码基因aac(6′) Ie -aph(2″) Ia ,磷酸转移酶APH(2″) Id、APH(2″) Ib的编码基因aph(2″) Id、aph(2″) Ib ,核苷酸转移酶ANT(6′)、ANT(3″) (9)的编码基因ant(6′) Ia和ant(3″) (9) ,并通过PCR产物的基因测序及寡核苷酸探针斑点杂交试验验证结果的可靠性。结果 粪肠球菌对氨基糖苷类高水平耐药率达 6 3% ,屎肠球菌达 84 %。 95 %以上庆大霉素高耐肠球菌 (HLGR)检测到aac(6′) Ie aph(2″) Ia、3株HLGR肠球菌检测到aph(2″) Id ,99%以上HLSR肠球菌检测到ant(6′) Ia。结论 肠球菌对氨基糖苷类高水平耐药十分普遍 ,双功能酶AAC(6′) -APH(2″)、核苷转移酶ANT(6′)分别介导了大多数肠球菌对庆大霉素、链霉素的耐药。

鸡大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶检测

为了解河南地区鸡源大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶的流行情况,对2005-2008年在河南地区病鸡的病料中分离保存的429株大肠杆菌进行药敏试验,并分别设计特异性引物对其进行16S rRNA甲基化酶基因的聚合酶链式反应扩增。检测结果显示,在6种氨基糖苷类药物高水平耐药的16SrRNA甲基化酶基因中,仅检测出ArmA和RmtB,检出率分别为20.7%（89/429）和23.3%（100/429）。且随时间的推移,ArmA和RmtB的出现几乎是逐年增高。提示河南地区鸡大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶产生率较高,且以ArmA和RmtB为主。

氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因在动物源大肠杆菌中的检测

为了解郑州地区氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA)在健康动物大肠杆菌中的流行情况,对2009年在郑州地区鸡、犬、猪的肛门拭子中分离保存的231株大肠杆菌进行了药敏试验,并分别设计特异性引物对其进行16S rRNA甲基化酶基因的聚合酶链式反应扩增。结果显示:在6种基因中,鸡、犬源大肠杆菌可检测到armA和rmtB,而猪源大肠杆菌仅检测出rmtB。鸡、犬源大肠杆菌armA的检测率分别为7.6%和3.3%;鸡、犬、猪源大肠杆菌rmtB的检出率分别为47.8%、20.0%和0.9%。其中,鸡、犬中分别有3.3%的大肠杆菌可同时检测到armA和rmtB。

氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶的研究进展

16S rRNA甲基化酶的出现可直接导致革兰氏阴性菌对氨基糖苷类药物高度耐药,已成为临床治疗中面临的重大难题。作者简要概述了细菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶的发现过程、作用机制、医学和兽医临床分布、遗传背景及扩散机制,以期引起对该类药物耐药机制的关注。

雏鸭腹泻大肠埃希菌耐药性和氨基糖苷类抗生素耐药基因检测与分析

目的 研究雏鸭腹泻大肠埃希菌的耐药性和氨基糖苷类抗生素耐药基因的存在情况。方法 采取山东济宁某养鸭场腹泻雏鸭粪便病料,通过实验室分离培养,对雏鸭腹泻大肠埃希菌进行药敏试验,比较雏鸭腹泻大肠埃希菌分离株对抗菌药物的敏感性,并采用PCR法对氨基糖苷类抗生素耐药菌株进行氨基糖苷类抗生素耐药基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、aac(6’)-Ⅱ、ant(3”)-Ⅰ和aph(3’)-Ⅱ的检测。结果 在24种药物敏感性试验中,雏鸭腹泻大肠埃希菌对头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟和阿米卡星4种药物敏感,对氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟和大观霉素4种药物中度敏感;对青霉素、链霉素、庆大霉素和四环素等16种药物耐药。在20株菌株中,检测的氨基糖苷类抗生素耐药基因中5株细菌检测出aac(3)-Ⅰ,10株细菌检测出aac(3)-Ⅱ,5株细菌检测出aac(6’)-Ⅰb,6株细菌检测出aac(6’)-Ⅱ,8株细菌检测出ant(3”)-Ⅰ,17株细菌检测出aph(3’)-Ⅱ。结论此次试验分离培养出的雏鸭腹泻大肠埃希菌呈现普遍耐药性,普遍检测出氨基糖苷类抗生素耐药基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、aac(6’)-Ⅱ、ant(3”)-Ⅰ和aph(3’)-Ⅱ,其中aph(3’)-Ⅱ检出率高达85%。

患病和痊愈牦牛源大肠杆菌对氨基糖苷类和磺胺类耐药性比较分析

[目的]为了探讨患病和痊愈牦牛源大肠杆菌的抗菌药物及其耐药性之间的相关性。[方法]采用微量肉汤稀释法对91株牦牛源大肠杆菌进行氨基糖苷类药物(链霉素和庆大霉素)和磺胺类药物(磺胺甲噁唑和磺胺二甲基嘧啶)敏感性试验,同时采用PCR方法检测氨基糖苷类相关耐药基因aac(6')-Ib、aac(3')-IV及磺胺类相关耐药基因sul2、sul3的携带情况。[结果]结果表明:39株患病牦牛源菌株对链霉素、庆大霉素、磺胺甲噁唑和磺胺二甲基嘧啶的耐药率分别为30.77%、5.13%、61.54%和87.18%,aac(6')-Ib、aac(3')-IV、sul2和sul3的检出率分别为43.59%、25.64%、38.46%和41.03%;52株痊愈牦牛源菌株对链霉素、庆大霉素、磺胺甲噁唑和磺胺二甲基嘧啶的耐药率分别为42.30%、21.15%、94.23%和71.15%,aac(6')-Ib、aac(3')-IV、sul2和sul3的检出率分别为71.15%、19.23%、69.23%和51.92%。[结论]试验结果表明,痊愈牦牛源大肠杆菌对氨基糖苷类和磺胺类药物耐药率及相关耐药基因检出率均高于患病动物源大肠杆菌,应科学合理选用和使用抗菌药物以减少耐药性的产生以提升牦牛大肠杆菌病的治疗效果。

动物源性大肠杆菌的耐药性和氨基糖苷类耐药基因的检测

为调查不同动物源性大肠杆菌的耐药性,本试验对65株源于畜禽的大肠杆菌进行18种常见抗菌药的药敏试验,用PCR法检测3种氨基糖苷类耐药基因aac(3)-II、arm(A)和aac(6′)-Ib。结果显示:65株大肠杆菌中对氨基糖苷类药物链霉素耐药率最高(75.38%),其次为复方新诺明(69.23%),耐药率最低的是头孢哌酮舒巴坦(0%);耐药基因aac(3)-II、arm(A)和aac(6′)-Ib的检出率分别为29.23%、1.54%和9.23%;有51株分离菌株存在多重耐药,占总株数的78.46%。结果表明,动物源大肠杆菌对多种抗菌药具有耐药性,在氨基糖苷类耐药基因中以携带aac(3)-II为主。

氨基苷类高水平耐药肠球菌的耐药性及修饰酶基因分布

目的明确临床分离的氨基苷类高水平耐药肠球菌(HLAR)耐药性及修饰酶基因类型。方法用琼脂筛选法筛选出HLAR、庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)及链霉素高水平耐药肠球菌(HLSR);采用K-B法测定粪肠球菌及屎肠球菌对12种抗菌药物的耐药性;PCR及序列分析法检测7种氨基苷类修饰酶基因。结果肠球菌中HLAR为73.6%。利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁对HLAR的抗菌作用最好,未检出耐药株。屎肠球菌中β内酰胺类抗生素耐药株以及喹诺酮类药物耐药株明显高于粪肠球菌。所有的屎肠球菌氨基苷类高耐株对氨苄西林、氨苄西林-舒巴坦及环丙沙星均耐药。aac(6')-Ie-aph(2")-Ia基因是HLGR的主要耐药基因,占HLGR的92.6%;3株HLGR存在与aph(2")-Id高同源性的基因。而6-'ant、3"-ant及str基因在HLSR中的检出率低。结论HLAR已成为医院感染的重要耐药菌。HLGR主要通过aac(6')-Ie-aph(2")-Ia基因编码的修饰酶造成对庆大霉素高度耐药。

高水平氨基糖苷类耐药肠球菌体外耐药监测

目的了解肠球菌的分布和高水平氨基糖苷类耐药肠球菌(HLAR)的耐药现状,为临床合理用药提供依据。方法鉴定采用API鉴定系统,抗生素敏感试验采用Kirby-Bauer纸片扩散法。结果2005年1月至2007年9月检出肠球菌292株,43.1%来源于尿液标本;粪肠球菌占65.3%,屎肠球菌占30.1%,HLAR检出率占80.5%。粪肠球菌和屎肠球菌、HLAR和非HLAR的耐药性均不同。结论加强肠球菌的鉴定和HLAR的检测,有利于临床根据体外药敏试验结果选择用药。

高水平氨基糖苷耐药肠球菌的监测

目的了解高水平氨基糖苷耐药(HLAR)肠球菌的分离率,探讨青霉素类或糖肽类与氨基糖苷类药物合用对院内感染肠球菌的协同杀菌作用,为临床治疗肠球菌感染提供参考与指导。方法采用VITEK-AMS仪器对分离自临床标本的101株肠球菌进行氨苄西林、青霉素、万古霉素耐药性和高水平庆大霉素耐药(HLGR)及高水平链霉素耐药(HLSR)测定。结果101株肠球菌中,粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、母鸡肠球菌和耐久肠球菌菌株分别为71、13、8、7和2株。药敏测试结果显示肠球菌对氨苄西林、青霉素、万古霉素耐药分别为21、34和0株;HLGR和HLSR分别为79株和46株。结论院内感染肠球菌对抗菌药物存在严重耐药性,合理的抗菌药物治疗对高水平氨基糖苷耐药肠球菌感染患者的康复尤为重要。

西藏牦牛源牛支原体对氨基糖苷类抗生素耐药靶位突变分析

掌握西藏牦牛源牛支原体对氨基糖苷类药物的敏感性及其耐药机制,为牛支原体病的临床治疗与预防提供依据。本研究通过微量稀释法对10株牦牛源牛支原体进行了氨基糖苷类药物敏感性与耐药性试验,并对敏感株进行体外高度耐药诱导,同时分别提取敏感株、临床耐药株和体外诱导高度耐药株基因组进行氨基糖苷类药物耐药基因靶位分析与药物主动外排系统研究。结果显示,敏感株和耐药株在靶位基因中未检测到相应位点的碱基突变,体外诱导高度耐药株M.bovis 3和M.bovis 7发生了A1409G基因位点突变,M.bovis 1和M.bovis 5发生了A1409G和C1192T基因位点突变,M.bovis 4和M.bovis 9发生了A1408T和C1192T基因位点突变;经药物主动外排系统检测分析,结果显示,西藏牦牛源牛支原体不存在以氨基糖苷类抗生素为底物的主动外排系统。研究结果表明,西藏牦牛源牛支原体不同分离株对氨基糖苷类药物敏感性存在较大差异,其耐药菌株的产生可能与临床长期使用单一抗生素有关。体外诱导高度耐药株对大观霉素、卡那霉素和庆大霉素产生高度耐药的原因是其耐药基因发生碱基突变,但碱基突变在牛支原体对氨基糖苷类药物耐药中是否起主导作用还有待深入研究。

对氨基糖甙类高水平耐药肠球菌的检测及药敏结果分析

目的 了解肠球菌对高水平庆大霉素的耐药情况及用于耐万古霉素肠球菌 (VRE)治疗的氯霉素 (C)、红霉素 (E)、四环素 (TE)、利福平 (RA)的耐药情况 .方法 应用纸片扩散法药敏试验检测从临床标本中分离出的 4 0株肠球菌 .分析其药敏结果 .结果 庆大霉素高水平耐药株 (HLGR) 16株 (40 .0 % )、氯霉素耐药株 17株 (42 .5 % )、红霉素耐药株 2 6株 (6 5 .0 % )、四环素耐药株 2 8株 (70 .0 % )、利福平耐药株 2 2株 (5 5 .0 % ) ,未检出对万古霉素耐药肠球菌 .结论 治疗肠球菌感染时 ,应根据分离株的耐药特点选择不同的治疗方案 .

98株鸭源致病性大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因型与耐药表型的比较

旨在调查鸭致病性大肠杆菌氨基糖苷修饰酶耐药基因(AMEs基因)的携带情况,探讨耐药基因与氨基糖苷类抗生素耐药表型的相关性。对98株鸭致病性大肠杆菌采用了K-B法,选用氨基糖苷类抗生素链霉素、新霉素、庆大霉素、阿米卡星、大观霉素和卡那霉素进行药敏试验,用建立的检测氨基糖苷类AMEs主要基因的四重PCR方法对上述菌株进行分子检测,并随机选取耐药基因ant(3″)-Ⅰa、aac(3)-Ⅱa和aph(3′)-Ⅱa各3个阳性扩增进行克隆测序,对药敏试验结果和基因检测结果进行比较分析。结果表明,98株鸭致病性大肠杆菌有67株对上述氨基糖苷类药物中的一种或多种耐药,耐药率为68.4%(67/98);有49株扩增出AMEs基因,AMEs基因的检出率为50%(49/98),其中ant(3″)-Ⅰa的检出率为30.6%(30/98),aac(3)-Ⅱa为13.3%(13/98),aph(3′)-Ⅱa为3.1%(3/98),ant(3″)-Ⅰa+aac(3)-Ⅱa为2.0%(2/98)、aac(3)-Ⅱa+aph(3′)-Ⅱa为1.0%(1/98),未检出aac(6′)-Ⅰb基因;序列分析结果表明,扩增产物与GenBank中的相应序列有很高的同源性(>99%);AMEs耐药基因与耐药表型的符合率为73.1%(49/67),符合率从高到低依次为大观霉素60%(3/5)、庆大霉素55%(11/20)、链霉素33.3%(22/66)、卡那霉素19%(4/21)、新霉素12.5%(1/8)、阿米卡星0%(0/3)。另外有4株细菌检测到相关耐药基因但耐药表型为敏感,而有22株耐药表型为耐药却未检测到相关耐药基因。鸭致病性大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因以ant(3″)-Ⅰa和aac(3)-Ⅱa两种为主,耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关。

鲍曼不动杆菌质粒上氨基糖苷类耐药基因的研究

目的探讨鲍曼不动杆菌(Acinotobacter baumannii)对氨基糖苷类抗生素的耐药性及其耐药机制。方法对71株MDR A.baumanni用VITEK分析仪进行药敏分析,通过PCR和测序探索质粒上的相关耐药基因(aaaCl,aacC2,aacC3,aacA4和armA)。结果 71株A.baumanni对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为100%、73%和20%,其中20%的菌株对3种氨基糖苷类抗生素完全耐药,且aaaCl、aacA4和armA基因阳性率分别为100%、100%和84.5%。结论质粒上广泛携带aacCl、aacA4和armA基因是鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素多重耐药的主要机制之一。

禽致病性大肠杆菌中四种抗氨基糖苷类药物耐药基因的分子流行病学调查

氨基糖苷类药物曾经是临床最为常用而有效的抗生素,长期应用与不合理使用使得该药物效果不尽理想。本研究参照GenBank中耐药基因相关序列,设计引物,结果从禽源大肠杆菌基因组中扩增出4种抗氨基糖苷类药物基因aadA1、strA、strB、aph(3′),经pGEX-T-easy和pET32a载体克隆和序列分析,证明扩增获得的基因序列与GenBank中参考序列同源性达到97%以上。对分离保存的216株禽致病性大肠杆菌进行氨基糖苷类药物耐药基因的分子流行病学检测,结果表明:aadA1阳性率高达49.1%,strA和strB的阳性率分别为56%和65.7%,aph(3′)的阳性率为16.2%;近三分之二的被检菌株携带有2种以上氨基糖苷类药物耐药基因。药敏试验结果显示所有被检菌株对链霉素耐药率为68.9%,而对阿米卡星的耐药率为38.9%。本研究结果说明禽类细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有着很大的关系,提示控制禽源耐药细菌对人类健康与卫生安全有重要意义。