氨基脲敏感胺氧化酶对弓形虫感染小鼠组织器官毒性作用研究

[目的]以真核单细胞微生物弓形虫为实验对象研究氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)的细胞毒性作用。[方法]通过腹腔注射和脂肪组织感染途径小鼠感染来自腹腔液传代弓形虫,6d后,取脂肪组织制备组织切片并进行HE染色,观察脂肪组织病变及弓形虫在脂肪组织的存在情况,并采用酶联分光光度法检测小鼠脏器组织SSAO的活性。根据弓形虫P1基因设计引物,通过PCR方法检测脂肪组织、肝脏、脾脏、肺和脑各组织弓形虫的感染情况。[结果]腹腔注射组小鼠脂肪细胞病变严重,且发现有大量弓形虫存在,脂肪组织注射组小鼠非注射处脂肪组织结构基本正常,且没有检测出弓形虫感染,而其他组织器官检测到大量弓形虫感染。与其他组织器官相比较,小鼠脂肪组织中SSAO的活性最高。[结论]脂肪细胞由于表达大量SSAO其分解底物后对真核生物的细胞感染具有毒性作用,这可能与SSAO所致血管内皮细胞损伤从而引起的动脉粥样硬化的产生与发展有着内在的联系。

氨基脲敏感性胺氧化酶及其病理生理意义

氨基脲敏感性胺氧化酶是一类对氨基脲敏感的胺氧化酶,功能复杂、分布广泛,其催化的氧化脱氨反应与心血管疾病和糖尿病血管并发症等关系密切,如氨基脲敏感性胺氧化酶催化的氧化脱氨反应参与了内皮细胞介导的低密度脂蛋白氧化,从而引起内皮损伤,最终导致动脉粥样硬化。氨基脲敏感性胺氧化酶可以调节葡萄糖转运蛋白4从脂肪细胞或3T3F422A细胞的胞内转位至胞膜,进而摄取并转运葡萄糖。其代谢物甲胺和甲醛等有血管毒性,特别在糖尿病并发症的发生发展中具有不可忽视的作用。

酶联分光光度法测定3T3-F442A分化细胞表达氨基脲敏感胺氧化酶的活性

测定3T3-F442A细胞分化成脂肪细胞的过程中，细胞表达氨基脲敏感胺氧化酶（Semicarbazide-sensitiveamineoxidase，SSAO）活性的变化情况，用于SSAO病理生理学功能的研究。3T3-F442A细胞在分化的不同天数内，收集细胞，超声波破碎后制备SSAO初提物。用分光光度法研究酶活性的基础上加入一种氧化酶，即采用酶联分光光度法分别研究细胞分化不同时间所表达的SSAO活性。结果显示，体外3T3-F442A细胞在分化过程中，SSAO在细胞内的表达呈曲线上升趋势。分化前细胞内几乎检测不到SSAO的存在，分化的第3d只能检测到少量SSAO，此后，SSAO的表达呈急剧上升趋势，细胞分化后的第6～7dSSAO活性达到高峰。

Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎发病过程中氨基脲敏感性胺氧化酶的活性变化

目的探讨氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)活性在类风湿性关节炎发病过程中的变化。方法取25只Wistar大鼠,尾根部多点注射Ⅱ型胶原制作类风湿性关节炎大鼠模型,以造模当天为0 d,在造模第3、7、14和21天,分别处死5只大鼠,取血浆和踝关节组织,分别检测SSAO活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平。另取5只大鼠作为空白对照组。结果造模后第12天大鼠开始发病;关节组织SSAO活性于造模第3天开始升高,第7天升高到最高,之后开始降低;血浆SSAO活性变化不明显。血浆和组织中TNF-α及ICAM-1水平均随关节炎发病过程出现显著变化。结论Ⅱ型胶原大鼠关节炎发病过程中伴随有SSAO活性的变化。

糖尿病和氨基脲敏感性胺氧化酶活性

氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)分布广泛,可催化伯胺脱氨基生成醛、过氧化氢和氨。糖尿病、肥胖症等患者血浆SSAO活性增加。SSAO介导的毒性醛类产物增加可导致血管内皮损伤,从而促进动脉粥样硬化和多种糖尿病并发症的发生发展。SSAO对于脂肪组织的内稳态具有重要的调节作用,在脂肪组织的能量平衡中起到重要的作用。脂肪组织中SSAO活性的增加可能是由于甲胺或氨基丙酮等SSAO作用底物增加而对其产生了上调作用。抑制SSAO活性对于糖尿病可能具有治疗价值。

高血压与冠心病患者血浆氨基脲敏感性胺氧化酶活性和甲醛浓度改变的研究

目的研究原发性高血压(高血压)、冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血浆中内源性甲胺浓度、氨基脲敏感性胺氧化酶活性以及内源性甲醛浓度的变化,以及3者之间的相关性,进一步探讨其临床意义。方法入选健康人42名、高血压34例、冠心病37例、冠心病合并高血压25例,应用高效液相色谱仪检测血浆甲胺浓度、氨基脲敏感性胺氧化酶活性以及甲醛浓度。结果4组甲胺浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高血压组、冠心病组、冠心病合并高血压组氨基脲敏感性胺氧化酶活性均较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。冠心病并高血压组的氨基脲敏感性胺氧化酶活性高于单纯高血压组,差异有统计学意义(P<0.05);也高于单纯冠心病组,差异有统计学意义(P<0.05)。高血压组、冠心病组、冠心病合并高血压组甲醛浓度与对照组比较,均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01和P<0.05);高血压组、冠心病组、冠心病合并高血压组间甲醛浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。氨基脲敏感性胺氧化酶活性与甲醛浓度存在直线相关性(r=0.4463,P<0.01)。结论血浆的氨基脲敏感性胺氧化酶活性和甲醛浓度在高血压、冠心病患者明显升高,提示氨基脲敏感性胺氧化酶活性和甲醛浓度异常升高可能是动脉粥样硬化发生的始动因素之一。

氨基脲敏感性胺氧化酶病理生理功能的研究进展

氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)广泛分布于生物体内。SSAO病理生理功能复杂多样,至今尚未完全阐明。目前已知,SSAO催化体内内源性甲胺、丙酮胺脱氨基,生成醛类和过氧化氢等细胞毒性物质,与动脉粥样硬化和糖尿病血管并发症等密切相关。在脂肪细胞,SSAO可以调节葡萄糖转运及脂肪分解。在内皮细胞,SSAO介导白细胞与内皮细胞的黏附、渗出过程。该文就SSAO病理生理功能的研究现状进行综述。

氨基胍抑制氨基脲敏感性胺氧化酶活性对糖尿病大鼠血管并发症的预防作用

目的探讨氨基胍在体内外对氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)的抑制效果及对糖尿病大鼠血管并发症的预防作用。方法取雄性SD大鼠主动脉匀浆作为SSAO酶样来源,体外应用苯甲胺作为SSAO催化底物,在酶促反应体系中加入一系列浓度的氨基胍,采用高效液相色谱法检测SSAO活性;取雄性SD大鼠35只,随机分为正常对照组、糖尿病模型组(DM组)和氨基胍干预组(DM+氨基胍组),采用单次腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,DM+氨基胍组腹腔注射氨基胍25 mg/(kg·d)。8周末检测大鼠血浆SSAO活性、甲胺、甲醛、内皮素1(ET-1)、一氧化氮(NO)浓度,同时检测主动脉组织SSAO活性,HE染色及透射电镜分别观察大鼠胸主动脉、肾组织形态学改变。结果氨基胍对大鼠主动脉组织SSAO具有较强的抑制作用,IC50为12.47μmol/L;DM组SSAO活性、ET-1浓度高于正常对照组,血浆NO浓度低于正常对照组(P<0.01);氨基胍明显抑制糖尿病大鼠SSAO活性,降低ET-1浓度,升高甲胺、NO浓度(P<0.01);DM+氨基胍组主动脉、肾组织病理改变较DM组明显减轻。结论氨基胍可有效抑制SSAO活性,可通过抑制SSAO氧化脱氨作用预防糖尿病血管并发症。

重组氨基脲敏感型胺氧化酶在293T细胞中的定位及酶活性测定

目的:构建氨基脲敏感型胺氧化酶(SSAO)基因真核表达载体,并在293T细胞中进行瞬时表达,确定SSAO体外表达效率、亚细胞定位及酶活性。方法:以pcDNA3-SSAO质粒为模板,PCR扩增获取SSAO编码区全序列,分别构建SSAO与绿色荧光蛋白(GFP)的融合表达质粒pEGFP-N3-SSAO和共表达质粒pIRES2-EGFP-SSAO,并通过酶切和测序验证。再分别将pcDNA3-SSAO、pEGFP-N3-SSAO、pIRES2-EGFP-SSAO和pcFLAG-SSAO重组质粒瞬时转染293T细胞,在荧光显微镜下观察目的蛋白的分布及表达情况。采用高效液相色谱法(HPLC)测定转染上述4种重组质粒及相应空质粒细胞的SSAO活性。结果:测序结果表明重组真核表达质粒构建正确。在瞬时转染pEGFP-N3-SSAO和pIRES2-EGFP-SSAO重组质粒的293T细胞中,转染后3~36 h各组均可观察到绿色荧光,且转染36 h为最佳观察时间点。转染pIRES2-EGFP-SSAO质粒的绿色荧光分布于细胞质中;转染pEGFP-N3-SSAO和pcFLAG-SSAO质粒的绿色荧光及红色荧光均分布于细胞膜上。酶活性检测结果显示转染pcFLAG-SSAO、pIRES2-EGFP-SSAO和pcDNA3-SSAO载体质粒的293T细胞中的SSAO活性分别为111.50±7.07、117.22±9.54、215.74±21.44 nmoL/(mg·h),较各自的空白质粒对照组均显著升高(P均<0.01),但转染pEGFP-N3-SSAO质粒的细胞SSAO活性极低,仅为2.09±0.29 nmoL/(mg·h)。结论:293T细胞中,体外重组表达的SSAO蛋白主要分布于细胞膜上,以pcDNA3为载体外源表达的天然状态SSAO活性最高。

氨基脲敏感型胺氧化酶介导的甲胺代谢产物对成纤维细胞的毒性作用

目的：研究氨基脲敏感型胺氧化酶（SSAO）催化甲胺（MA）产生的代谢产物对大鼠皮肤成纤维细胞（RSFCs）的毒性作用。方法：原代分离培养新生SDRSFCs，用高效液相色谱法检测细胞及培养基酶活性。MTT法检测细胞经过不同浓度MA和不同活性SSAO处理后的细胞活力，β半乳糖苷酶染色检测细胞衰老。结果：当SSAO为1．02×10^-3u／mL时，成纤维细胞活力随着培养体系中MA浓度的升高（0．2—1．0mmol／L）而降低。当MA为1．0mmol／L时，随着酶活性的增高（0．6×10^-3-1．58×10^-3u／mL），细胞活力逐渐降低。给予SSAO抑制剂氨基脲或肼届嗪可显著抑制细胞活力下降。给予抗氧化剂谷胱苷肽可显著提高细胞活力，并显著降低培养基中甲醛浓度（P〈0．05）；如同时给予过氧化氢酶和谷胱苷肽，则细胞活力升高更明显。此外，0．2mmol／LMA作用3代，可引起肛半乳糖苷酶染色增强。结论：SSAO催化的MA氧化对RSFCs有明显的毒性作用，这种毒性作用由其代谢产物引起；在SSAO催化下低浓度MA可能与细胞衰老有关。

氨基脲敏感性胺氧化酶与心血管病及糖尿病的研究进展

氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)是人体内广泛存在的一种具有多种生理功能的胺氧化酶。SSAO主要催化短链伯胺氧化脱氨并生成相应的醛类、过氧化氢和氨。甲胺和氨基丙酮是SSAO的生理性底物。心血管病及糖尿病患者血浆SSAO活性明显增高,其催化生成的毒性产物可导致血管内皮损伤、氧化应激,从而促进动脉粥样硬化与糖尿病血管并发症的发生、发展。因此,SSAO与心血管病及糖尿病的病理生理研究已成为新的研究热点。

氨基脲敏感型胺氧化酶在心肌缺血再灌注损伤中的作用(英文)

目的研究抑制氨基脲敏感型胺氧化酶(SSAO)是否可缓解心肌缺血再灌注(I-R)损伤。方法SD雄性大鼠随机分为4组,每组10只。假手术组:左冠状动脉(LCA)穿线不结扎;假手术+氨基脲组:结扎前10min给予氨基脲(30mg·kg-1,ip)处理,LCA穿线不结扎;I-R组:LCA结扎致缺血30min,再灌注180min;I-R+氨基脲组:缺血前10min给予氨基脲(30mg·kg-1,ip),随后缺血30min,再灌注180min。采用四氮唑蓝染色法测定心肌梗死范围;吸光度法测定血浆肌酸激酶(CK)和髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)和羟自由基含量;高效液相色谱法测定血浆SSAO酶活性;HE染色法进行心肌组织病理学观察。结果与假手术组比较,假手术+氨基脲组各指标均无明显变化;I-R组血浆MPO和SSAO活性、MDA和羟自由基含量均升高,出现明显心肌梗死。与I-R组比较,I-R+氨基脲组心肌梗死范围明显减小,由(43.2±3.1)%减小到(27.7±3.7)%;血浆MPO活性及MDA和羟自由基含量均降低,分别由(27.5±9.3)μmol.min-1.L-1,(2.6±0.4)mmol·L-1和(628±50)mmol.min-1.L-1降低到(14.2±5.6)μmol.min-1.L-1,(1.7±0.5)mmol·L-1和(503±88)mmo.lmin-1.L-1;组织病理学观察结果表明,心肌组织白细胞聚集减少。结论心肌I-R损伤导致血浆SSAO酶活性升高,抑制SSAO酶活性可缓解心肌I-R损伤。

siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA降解分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株。用SMO-siRNA质粒转染的细胞中,SMO mRNA和酶活性的基础水平分别降低53%和14%。用10μmol·L-1 CPENSpm处理对照细胞24h可使SMO mRNA和酶活性分别升高10倍和20倍,但在SMO-siRNA质粒转染的细胞中,这种药物对SMO的表达诱导被抑制。细胞增殖实验发现,SMO表达抑制的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO表达,抑制细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SMO高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。

精胺氧化酶高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响

目的研究精胺氧化酶(SMO)稳定性高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响。方法含SMO全长编码序列的真核表达质粒用脂质体法稳定转染人宫颈癌Hela细胞后,QT-RT-PCR和酶活性分析法筛选SMO高表达的细胞株。MTS法检测细胞的增殖和对抗癌药物的敏感性。流式细胞分析法检测细胞周期和细胞凋亡。结果成功获得SMO稳定高表达的人Hela宫颈癌细胞株。MTS分析发现,SMO高表达细胞的生长速度显著性高于对照细胞,且对多胺类似物抗癌药物CPENSpm的敏感性明显下降。与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO高表达细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论 SMO稳定性高表达可降低宫颈癌细胞对抗癌药物CPENSpm的敏感性。

2-溴乙胺抑制氨基脲敏感性胺氧化酶活性对糖尿病大鼠血管内皮的保护作用

本研究旨在观察糖尿病大鼠主动脉氨基脲敏感性胺氧化酶(semicarbazide-sensitive amine oxidase,SSAO)的活性变化,探讨2-溴乙胺(2-bromoethylamine,2-BEA)抑制SSAO活性对糖尿病大鼠血管内皮的保护作用。制备大鼠主动脉组织匀浆作为SSAO来源,体外应用苯甲胺作为SSAO催化底物,检测不同浓度2-BEA对主动脉SSAO活性的抑制作用。采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射诱导1型糖尿病大鼠模型,将成年Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照(NC)组、糖尿病模型(DM)组、2-BEA 5 mg/kg组、2-BEA 20 mg/kg组,每组10只,2-BEA每天腹腔注射给药,连续8周。8周末,腹主动脉采血,硝酸还原酶法测定血浆一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,放射免疫分析法测定血浆内皮素-1(endothelin-1,ET-1)浓度,高效液相色谱法测定大鼠主动脉SSAO活性,观察主动脉形态及超微结构变化。结果显示,与NC组比,DM组大鼠主动脉SSAO活性、血浆ET-1浓度显著升高(P<0.01),而血浆NO含量显著降低(P<0.01);2-BEA抑制糖尿病大鼠主动脉SSAO活性,降低了血浆ET-1浓度并升高了血浆NO含量(P<0.01),2-BEA 20 mg/kg组效果比5 mg/kg组更明显(P<0.05),2-BEA组大鼠主动脉内皮损伤较DM组明显减轻。以上结果表明,2-BEA通过抑制主动脉SSAO活性保护糖尿病大鼠血管内皮。

SSAO介导的氧化脱氨反应对3T3-L1脂肪细胞的氧化应激作用

目的：观察氨基脲敏感型胺氧化酶（SSAO）催化其底物甲胺（MA）和苯甲胺（BZA）的氧化脱氨反应对成熟3T3-L1脂肪细胞的氧化应激作用。方法：3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞;高效液相色谱法检测不同分化天数下细胞SSAO活性的变化;MTT法检测不同浓度的MA或BZA对细胞活力的影响;荧光探针方法检测细胞在药物作用下产生的活性氧;以0.5 mmol/L MA或BZA处理成熟脂肪细胞或未经诱导分化的前脂肪细胞4 h,观察细胞产生的甲醛（FA）、苯甲醛（BZ）、脂质过氧化指标丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽（GSH）的变化。结果：SSAO活性随细胞分化天数的增加而增加,并于第8天达到高峰;不同浓度MA或BZA作用细胞4 h对细胞活力无显著影响（P〉0.05）;0.5 mmol/L MA或BZA孵育后,细胞产生的活性氧增高,约为阴性对照组的3~4倍,差异有统计学意义（P〈0.05）;在成熟脂肪细胞中,MDA的含量增加,而T-SOD和GSH的活性和含量减少,与阴性对照组相比,差别有统计学意义（P〈0.05）;MA和BZA作用未经诱导分化的前脂肪细胞,其MDA和SOD和GSH的变化不明显,差别无统计学意义（P〉0.05）。结论：SSAO可能通过其介导的氧化脱氨反应引起3T3-L1成熟脂肪细胞产生氧化应激。

脂多糖通过上调SSAO活性抑制泡沫细胞ABCA1表达和促进细胞内脂质蓄积

目的探讨脂多糖(LPS)是否通过调节氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)活性改变血管平滑肌细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白质的表达和脂质蓄积。方法氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育小鼠主动脉平滑肌原代细胞使其泡沫化,不同浓度LPS和SSAO抑制剂氨基脲(SEM)处理细胞6 h后,高效液相色谱分析细胞SSAO活性、总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测培养基葡萄糖含量,荧光分光光度计检测过氧化氢(H2O2)含量,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,Western blot检测ABCA1蛋白质表达的变化。结果 LPS增加泡沫细胞SSAO活性,促进葡萄糖消耗,增加H2O2生成,SEM作用后完全抑制此作用;LPS抑制细胞ABCA1蛋白质的表达,细胞内胆固醇流出减少,细胞总胆固醇、游胆固醇与胆固醇酯增加;SEM作用后部分抑制LPS的这种作用。结论 LPS下调ABCA1蛋白质表达而促进细胞内脂质蓄积与SSAO活性增加相关。

2-溴乙胺减轻小鼠急性酒精性肝损伤

目的探讨抑制氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)对急性酒精性肝损伤的保护作用。方法将AOC3基因敲低的HepG2细胞分为对照组、乙醇暴露组、AOC3敲低组和AOC3敲低后乙醇暴露组,分析细胞SSAO活性变化,检测细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度和过氧化氢(H_(2)O_(2))浓度,检测细胞核内NF-κB p65蛋白质表达的变化。建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,分为对照组、2-溴乙胺处理组、乙醇暴露组、低剂量2-BEA组和高剂量2-BEA组。各组每6只按0、2、4、6、8、10、12h时间点测血糖浓度,其余12h后收集肝组织和血浆,观察肝组织病理学改变,分析血浆SSAO活性,检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶等含量,测定肝匀浆中丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽的含量,检测血浆TNF-α和H_(2)O_(2)水平,检测小鼠肝细胞核内NF-κB p65蛋白质表达情况。结果敲低HepG2细胞AOC3基因后,SSAO活性降低,乙醇暴露后细胞H_(2)O_(2)释放减少,但TNF-α水平和细胞核内NF-κB p65蛋白质表达无显著变化;2-BEA减轻急性酒精性肝损伤小鼠的肝组织病理学损伤,抑制血浆SSAO活性,显著降低乙醇引起的血糖和转氨酶的升高,减轻氧化还原反应,降低血浆TNF-α和H_(2)O_(2)的释放,下调肝组织细胞核内NF-κB p65蛋白质的表达。结论SSAO抑制剂2-BEA可有效减轻小鼠急性酒精性肝损伤。

脂多糖诱导急性肺损伤过程中SSAO酶的活性变化

背景与目的:探讨SSAO酶在脂多糖诱导急性肺损伤过程中的活性变化。材料与方法:将15只雄性成年新西兰兔随机分为模型A组、模型B组和对照组,每组5只。模型组通过气管插管直接给予脂多糖2mg/kg,其中A组在给药后48h与对照组均用于制作肺组织HE切片;B组用于动物体征观察、外周血白细胞计数和SSAO酶活性检测,并对给药前、后各指标的变化进行比较。结果:模型组给药后外周血白细胞数目和肺组织HE染色等炎症指标与对照相比均有明显变化,SSAO酶活性在给药后的16h酶活性迅速上升至最高,然后在48h逐渐下降至最低点,其升高或降低幅度,较给药前均有统计意义(P<0.05或P<0.01)。结论:采用气管直接插管法给予脂多糖的造模方法稳定可靠,在产生急性肺损伤过程中会导致外周血SSAO酶活性明显的规律性波动。