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定点突变提高碱性果胶酶热稳定性
被引量:
3
1
作者
刘松
汪明星
+1 位作者
堵国成
陈坚
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期1-6,共6页
碱性果胶酶(PGL,E.C.4.2.2.2)是一种重要的工业酶,在碱性条件下催化聚半乳糖醛酸的α-1,4糖苷键裂解,广泛应用于食品、纺织和造纸等行业。为提高酶热稳定性,将Bacillus sp.WSHB04-02 PGL与3种耐热酶进行氨基酸序列比对,确定7个在耐热酶...
碱性果胶酶(PGL,E.C.4.2.2.2)是一种重要的工业酶,在碱性条件下催化聚半乳糖醛酸的α-1,4糖苷键裂解,广泛应用于食品、纺织和造纸等行业。为提高酶热稳定性,将Bacillus sp.WSHB04-02 PGL与3种耐热酶进行氨基酸序列比对,确定7个在耐热酶中保守但在PGL中不保守的位点(158、N189、G191、S229、K314、S315和I325)作为改造的目标位点,单独突变为耐热酶中的保守氨基酸。酶学性质分析显示,PGL突变体热稳定性均有提高。与野生酶相比,N189E、S229K和I325F的55℃半衰期分别提高2.32倍、2.11倍和1.89倍;I58V和K314M 55℃半衰期分别提高19.4%和38.9%,比酶活分别提高65%和91%。结构分析显示,除S315G外的PGL突变体的分子内的多种作用力数量均发生改变。上述结果表明,定点突变能有效提高PGL热稳定性,分子间作用力的变化可能是酶学性质变化的重要原因之一。
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关键词
碱性果胶酶
氨基酸序列比对
定点突变
热稳定性
作用力
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职称材料
斑马鱼SDC4基因的克隆与遗传进化分析
2
作者
崔佳
温炟
+1 位作者
陈广信
吴长新
《长治医学院学报》
2022年第3期161-165,171,共6页
目的:克隆斑马鱼多配体聚糖(SDC)4基因并分析其遗传进化关系,为探究斑马鱼SDC4基因的功能奠定分子生物学基础。方法:将分子克隆得到的斑马鱼SDC4基因全长cDNA利用Gibson组装方法构建至pCS2+载体并对其进行序列分析;利用qRT-PCR检测受精...
目的:克隆斑马鱼多配体聚糖(SDC)4基因并分析其遗传进化关系,为探究斑马鱼SDC4基因的功能奠定分子生物学基础。方法:将分子克隆得到的斑马鱼SDC4基因全长cDNA利用Gibson组装方法构建至pCS2+载体并对其进行序列分析;利用qRT-PCR检测受精后1 d和3 d的AB、Tübingen(TU)野生型斑马鱼SDC4 mRNA表达量和胚胎发育前10 d的TU野生型斑马鱼SDC4 mRNA的表达差异;根据NCBI和ensemble网络信息,对斑马鱼SDC4、人SDC4和小鼠SDC4基因在染色体上的基因连锁信息作出分析,并利用MegAlign软件对斑马鱼SDC4、人SDC4和小鼠SDC4蛋白进行氨基酸序列比对分析其同源性,再应用MEGAX软件对不同物种SDC4蛋白构建系统发生树。结果:测序结果显示克隆得到的斑马鱼SDC4基因与ensemble公布的序列一致;AB、TU野生型斑马鱼在受精后前3 d的SDC4 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),TU野生型斑马鱼SDC4 mRNA表达在胚胎发育前期呈现一定程度的母系遗传控制;染色体连锁基因座位图发现斑马鱼SDC4与人SDC4、小鼠SDC4的连锁基因不完全相同,蛋白序列比对分析斑马鱼SDC4蛋白与人SDC4、小鼠SDC4蛋白同源性分别为38.3%、44.2%,根据不同物种的SDC4氨基酸序列构建的系统发生树反映了生物进化的关系。结论:成功克隆了斑马鱼SDC4基因并对其进行了遗传进化分析,补充了斑马鱼SDC4的分子生物学信息。
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关键词
斑马鱼
SDC4
MRNA表达
染色体连锁基因
氨基酸序列比对
系统进化树
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职称材料
拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK12与bZIP转录因子ABF4相互作用研究
被引量:
2
3
作者
刘盈盈
刘宇
+4 位作者
黄奎
姚润东
王健美
李旭锋
杨毅
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1301-1306,共6页
为分析拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK12在不同物种中序列的相似性,并研究CPK12与ABA信号通路的关系,本研究对不同物种CPK12氨基酸序列进行比较,以及通过体内和体外实验验证CPK12与ABF4之间是否存在直接相互作用关系.通过对拟南芥(Arabidopsis...
为分析拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK12在不同物种中序列的相似性,并研究CPK12与ABA信号通路的关系,本研究对不同物种CPK12氨基酸序列进行比较,以及通过体内和体外实验验证CPK12与ABF4之间是否存在直接相互作用关系.通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana),油菜(Brassica napus)与荠菜(Capsella rubella)等物种的同源氨基酸序列进行比较,获得了它们的亲缘关系.利用酵母双杂交系统,将CPK12与ABF4共转酵母后,在四缺型培养基上能够正常生长,这说明CPK12与ABF4在体外有相互作用.同时,利用双分子荧光互补实验,CPK12与ABF4共转烟草后能够在激发光下观察到烟草细胞核中出现明显荧光信号,这说明CPK12与ABF4在植物体内也存在相互作用,为CPK12参与ABA信号途径提供了直接证据.
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关键词
钙依赖蛋白激酶12
ABA响应原件结合因子4
氨基酸序列比对
酵母双杂交实验
双分子荧光互补实验
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职称材料
题名
定点突变提高碱性果胶酶热稳定性
被引量:
3
1
作者
刘松
汪明星
堵国成
陈坚
机构
工业生物技术教育部重点实验室
江南大学生物工程学院
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期1-6,共6页
基金
国家自然科学基金:融合自组装双亲短肽提高Pseudomonas aeruginosa脂肪氧合酶热稳定性机制的研究
国家高技术研究发展计划(863计划):重要食品酶微生物发酵生产与高效制备关键技术
文摘
碱性果胶酶(PGL,E.C.4.2.2.2)是一种重要的工业酶,在碱性条件下催化聚半乳糖醛酸的α-1,4糖苷键裂解,广泛应用于食品、纺织和造纸等行业。为提高酶热稳定性,将Bacillus sp.WSHB04-02 PGL与3种耐热酶进行氨基酸序列比对,确定7个在耐热酶中保守但在PGL中不保守的位点(158、N189、G191、S229、K314、S315和I325)作为改造的目标位点,单独突变为耐热酶中的保守氨基酸。酶学性质分析显示,PGL突变体热稳定性均有提高。与野生酶相比,N189E、S229K和I325F的55℃半衰期分别提高2.32倍、2.11倍和1.89倍;I58V和K314M 55℃半衰期分别提高19.4%和38.9%,比酶活分别提高65%和91%。结构分析显示,除S315G外的PGL突变体的分子内的多种作用力数量均发生改变。上述结果表明,定点突变能有效提高PGL热稳定性,分子间作用力的变化可能是酶学性质变化的重要原因之一。
关键词
碱性果胶酶
氨基酸序列比对
定点突变
热稳定性
作用力
Keywords
alkaline polygalacturonate lyase
alignment of amino acid sequence
site-directed mutagenesis
thermal stability
interaction
分类号
TS201.25 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
斑马鱼SDC4基因的克隆与遗传进化分析
2
作者
崔佳
温炟
陈广信
吴长新
机构
长治医学院微生物学教研室
山西大学生物医学研究院
出处
《长治医学院学报》
2022年第3期161-165,171,共6页
基金
山西省基础研究计划(自由探索类)项目(20210302124230)
山西省高等学校科技创新计划项目(2021L340)
长治医学院博士科研启动基金(BS202121)。
文摘
目的:克隆斑马鱼多配体聚糖(SDC)4基因并分析其遗传进化关系,为探究斑马鱼SDC4基因的功能奠定分子生物学基础。方法:将分子克隆得到的斑马鱼SDC4基因全长cDNA利用Gibson组装方法构建至pCS2+载体并对其进行序列分析;利用qRT-PCR检测受精后1 d和3 d的AB、Tübingen(TU)野生型斑马鱼SDC4 mRNA表达量和胚胎发育前10 d的TU野生型斑马鱼SDC4 mRNA的表达差异;根据NCBI和ensemble网络信息,对斑马鱼SDC4、人SDC4和小鼠SDC4基因在染色体上的基因连锁信息作出分析,并利用MegAlign软件对斑马鱼SDC4、人SDC4和小鼠SDC4蛋白进行氨基酸序列比对分析其同源性,再应用MEGAX软件对不同物种SDC4蛋白构建系统发生树。结果:测序结果显示克隆得到的斑马鱼SDC4基因与ensemble公布的序列一致;AB、TU野生型斑马鱼在受精后前3 d的SDC4 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),TU野生型斑马鱼SDC4 mRNA表达在胚胎发育前期呈现一定程度的母系遗传控制;染色体连锁基因座位图发现斑马鱼SDC4与人SDC4、小鼠SDC4的连锁基因不完全相同,蛋白序列比对分析斑马鱼SDC4蛋白与人SDC4、小鼠SDC4蛋白同源性分别为38.3%、44.2%,根据不同物种的SDC4氨基酸序列构建的系统发生树反映了生物进化的关系。结论:成功克隆了斑马鱼SDC4基因并对其进行了遗传进化分析,补充了斑马鱼SDC4的分子生物学信息。
关键词
斑马鱼
SDC4
MRNA表达
染色体连锁基因
氨基酸序列比对
系统进化树
Keywords
zebrafish
SDC4
mRNA expression
chromosome linkage genes
amino acid sequence alignment
phylogenetic tree
分类号
Q959.4 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK12与bZIP转录因子ABF4相互作用研究
被引量:
2
3
作者
刘盈盈
刘宇
黄奎
姚润东
王健美
李旭锋
杨毅
机构
四川大学生命科学学院、生物资源与生态环境教育部重点实验室
出处
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1301-1306,共6页
基金
国家转基因重大专项(2016zx08009003-002)
文摘
为分析拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK12在不同物种中序列的相似性,并研究CPK12与ABA信号通路的关系,本研究对不同物种CPK12氨基酸序列进行比较,以及通过体内和体外实验验证CPK12与ABF4之间是否存在直接相互作用关系.通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana),油菜(Brassica napus)与荠菜(Capsella rubella)等物种的同源氨基酸序列进行比较,获得了它们的亲缘关系.利用酵母双杂交系统,将CPK12与ABF4共转酵母后,在四缺型培养基上能够正常生长,这说明CPK12与ABF4在体外有相互作用.同时,利用双分子荧光互补实验,CPK12与ABF4共转烟草后能够在激发光下观察到烟草细胞核中出现明显荧光信号,这说明CPK12与ABF4在植物体内也存在相互作用,为CPK12参与ABA信号途径提供了直接证据.
关键词
钙依赖蛋白激酶12
ABA响应原件结合因子4
氨基酸序列比对
酵母双杂交实验
双分子荧光互补实验
Keywords
CPK12
ABF4
Sequence alignment of amino acid
Yeast two-hybrid system
BIFC
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
定点突变提高碱性果胶酶热稳定性
刘松
汪明星
堵国成
陈坚
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
下载PDF
职称材料
2
斑马鱼SDC4基因的克隆与遗传进化分析
崔佳
温炟
陈广信
吴长新
《长治医学院学报》
2022
0
下载PDF
职称材料
3
拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK12与bZIP转录因子ABF4相互作用研究
刘盈盈
刘宇
黄奎
姚润东
王健美
李旭锋
杨毅
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
下载PDF
职称材料
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