氨基酸类阳离子脂质体在基因转染中的应用

通过化工程序合成阳离子脂质TMA-C2-Glu-C12,经双蒸水超声分散后制得相应的氨基酸类阳离子脂质体,实验共合成了八种氨基酸类阳离子脂质,经过二次整流后分散成对应的质体。实验结果表明,在HBL100、HT1080和GC-1细胞系中,TMA-C2-Glu-C12的转染效率与Lipofectamine 2000相当,在HEK293、Ges-1、Huvce、HeLa和SW480细胞系中进行结果对比,实验表明TMA-C2-Glu-C12的细胞毒性不强,是一种高效的基因转载体。

阳离子脂质体增加造血系统恶性肿瘤细胞株对寡核苷酸G3139的摄入

目的 观察阳离子脂质体 DOSPER介导或 Bcl- 2反义寡核苷酸 G3139直接作用时 ,造血系统恶性肿瘤细胞株对 G3139的摄入 ,为阳离子脂质体和反义寡核苷酸的进一步应用提供依据。 方法 利用异硫氰酸荧光素标记的 G3139,流式细胞仪 (FCM)测定造血系统恶性肿瘤细胞株 HL6 0、K5 6 2、U937、CA46和 CEM细胞内的平均荧光强度。 结果 G3139直接作用于细胞时 ,细胞内荧光强度 U937>HL6 0 >CA46 >K5 6 2 >CEM(P<0 .0 5 ) ;DOSPER介导转染时 ,各细胞内的荧光强度均显著高于直接转染时 (P<0 .0 1) ,而且当 DOSPER/ G3139(μg/μg )为 2～ 3∶ 1时 ,转染效率最佳 ,但此时各细胞间细胞内平均平均荧光强度无明显的差别 (P>0 .0 5 )。 结论 不同造血系统恶性肿瘤细胞株对 G3139的摄入不同 ,阳离子脂质体 DOSPER可普遍提高细胞对 G3139的摄入。

阳离子脂质体介导AADC基因重组体脑内直接注射治疗帕金森病的实验研究

目的 探讨芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)基因脑内移植对帕金森病的治疗作用及其在左旋多巴 (L dopa)治疗过程中的地位 ,并探讨阳离子脂质体介导的基因治疗方法的有效性。 方法 实验组与对照组分别以 pCDNA3 AADC重组体和 pCDNA3空载体进行阳离子脂质体包裹后 ,注射于帕金森病SD大鼠纹状体内 ,观察两组大鼠旋转行为的改善 ;并在该基础上对两组大鼠分别采用一定浓度的L dopa进行治疗 ,观察脑内移植AADC基因后对大鼠旋转行为的进一步改善。采用免疫组化方法确定AADC的表达。结果 (1 )阳离子脂质体包裹的pCDNA3 AADC重组体脑内注射后 ,在 3、7、1 4、2 1、2 8d时大鼠的旋转行为获得了一定的改善 (P <0 0 5) ,分别改善 56 0 % ,62 6 % ,49 4% ,36 3 % ,2 7 4% ,以第 1周时最为明显 ,在第 5周时 ,其旋转行为则与移植前差异无显著意义 (P >0 0 5) ;(2 )使用同等浓度的左旋多巴 (L dopa ,1 0mg·kg- 1 ·d- 1 )治疗后 ,在上述相同的时间点时 ,实验组较对照组明显改善模型大鼠的旋转行为 (P <0 0 5) ,以第 1周时最为明显 ,其旋转行为改善达93 4% ,在第 5周时 ,两组间差异无显著意义 (P >0 0 5) ;(3)免疫组化方法确定AADC在纹状体区的稳定表达。

小球藻类金属硫蛋白的结构表征研究

金属硫蛋白（metallothionems，MTs）是一类低分子量、高巯基含量，且能大量结合金属离子的蛋白质，通常由61个氨基酸残基组成，分子量为6～7ku。MTS具有两个重要特征即金属亲和性和金属诱导性。因此，MTs对多种重金属如Hg、Pb、Zn、Cd等具有螯合作用，且在重金属诱导作用下，MTS可在生物体内诱导合成。近年来小球藻被广泛应用于污水净化，能够去除水体中的多种重金属，其机制是小球藻细胞壁带有负电荷的官能团能吸附金属阳离子，

阳离子脂质体的细胞毒性

基因治疗中,基因载体起着关键作用。阳离子脂质体作为一种非病毒基因载体,在基因治疗中有着广阔的应用前景。阳离子脂质体的细胞毒性与类脂结构有关,按照头部结构的不同,阳离子脂质体有季铵盐类、胺类、氨基酸或多肽类、胍盐和杂环类等。本文主要介绍了头部结构为季铵盐类、胺类、氨基酸或多肽类的阳离子脂质体及不同的连接键和尾部导致的细胞毒性分析。

福建产舟山眼镜蛇毒细胞毒素的快速分离纯化及鉴定

目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素 (CTX) ,并鉴定其理化性质。 方法 采用 SP- SephadexC- 2 5阳离子交换色谱及 Sephasil Peptide C1 8反相高效液相色谱法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化 CTX,SDS- PAGE(Tris- Tricine系统 )鉴定纯度 ,Edman降解法测定 N端氨基酸序列。 结果 粗毒经阳离子交换色谱 ,得到 1 4个蛋白峰 ,其中第 ～ 峰具 CTX活性 ;再分别经反相色谱纯化 ,得到 4个 CTX,总得率为 32 .4 8% ;SDS- PAGE显示为均一蛋白 ,分子量依次为 :7.2 8,7.33,7.2 4和 7.38k D;测定它们 N端 2 0个氨基酸序列。 结论 采用阳离子交换和反相高效液相色谱可快速、高效地从眼镜蛇毒中获得 4个

人增生性瘢痕成纤维细胞最佳转染条件:α_1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的实验

目的:选择α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。方法:实验于2003-10/2004-06在中山大学附属第一医院外科实验室进行。以阳离子脂质体Oligofectamine转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,应用荧光显微镜记录荧光素在细胞内的空间分布,用流式细胞术作荧光细胞计数和观察细胞凋亡,通过不同细胞接种数量、反义寡核苷酸浓度和脂质体量转染条件的比较,逐步获得各转染过程中的最佳条件。结果:①在6孔板上转染反义寡核苷酸,所用各转染条件未引起细胞凋亡。②其最佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104/皿,反义核酸浓度150nmol/L,脂质体量3μL/孔;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集。结论:获得α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳转染条件,可为下一步试验提供基础。

抗菌肽对皮肤感染的保护作用

皮肤频繁与环境中的微生物接触而不被感染,阳离子抗菌肽起了重要作用。人类阳离子抗菌肽主要包括防御素和cathelicidin类的18000人类阳离子抗菌蛋白衍生的LL-37。为此,综述角质形成细胞产生的人类防御素1、2、3和LL-37的抗炎抗菌特性和对皮肤的保护作用。