髓过氧化物酶、膜糖蛋白Ib及抗氨甲酰化蛋白在老年风湿性多肌痛中的表达与意义

目的分析髓过氧化物酶(MPO)、膜糖蛋白Ib(GPIb)及抗氨甲酰化蛋白(CarP)在老年风湿性多肌痛(PMR)中的表达与意义。方法选择2020年1月~2021年1月在浙江省温州市人民医院收治的PMR患者80例,依据年龄分组,其中老年PMR组(年龄≥60岁)40例,非老年PMR组(年龄<60岁)40例,两组均给予泼尼松治疗,另选择同期老年健康体检者40例作为对照组。测定两组血清中GPIb、MPO、CarP表达水平,并进行PMR-AS评分,分析GPIb、MPO、CarP水平与PMR-AS评分的相关性。结果治疗前,老年PMR组MPO、CarP及PMR-AS评分均高于其他两组,GPIb低于其他两组,差异具有极显著性意义(P<0.01);治疗后,老年PMR组与非老年PMR组GPIb均升高,MPO、CarP均降低,两组差异无统计学意义(P>0.05);GPIb与PMR-AS评分呈负相关(r=-0.668,P<0.01),MPO、CarP与PMR-AS评分呈正相关(r=0.651、r=0.689;P<0.01)。结论MPO、CarP在老年PMR中的表达升高,GPIb降低;激素治疗对不同年龄组的PMR患者疗效相当。

氨甲酰化促红细胞生成素对慢性心力衰竭大鼠心脏的保护作用

目的观察氨甲酰化促红细胞生成素(carbamylated erythropoietin,CEPO)对慢性心力衰竭(chronic heartfailure,CHF)大鼠的心脏保护作用并探讨其可能的作用机制。方法 90只Wistar大鼠采用随机抽签法选取10只作为对照组,剩余腹腔注射异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)建立大鼠CHF模型,喂养5周后,将造模成功的大鼠按随机数字表法再分为CEPO组及CHF组,CEPO组腹腔注射CEPO50μg/kg,2次/周,持续4周,CHF组及对照组同期腹腔注射等量生理盐水,4周后检测各组大鼠血流动力学指标、血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis-alpha,TNF-α)、白介素-6(interlerkin-6,IL-6)水平以及心肌细胞凋亡率的变化。结果与对照组比较,CHF组左室收缩压(LVSP)及左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)均显著降低(P<0.05),而左室舒张末压(LVEDP)则显著升高(P<0.05),心率(HR)也显著加快(P<0.05);与CHF组比较,CEPO组LVSP及±dp/dtmax均显著升高(P<0.05),而LVEDP则显著降低(P<0.05),HR也显著减慢(P<0.05)。与对照组比较,CHF组血清TNF-α、IL-6水平及心肌细胞凋亡率均显著升高[TNF-α:(4.01±0.20)vs(8.09±0.09)pg/ml,IL-6:(20.93±1.20)vs(30.26±0.94)pg/ml,心肌细胞凋亡率:(3.80±0.57)%vs(22.35±0.60)%,P<0.05];与CHF组比较,CEPO组血清TNF-α、IL-6水平及心肌细胞凋亡率均显著降低[TNF-α:(8.09±0.09)vs(6.40±0.14)pg/ml,IL-6:(30.26±0.94)vs(25.66±0.74)pg/ml,心肌细胞凋亡率:(22.35±0.60)%vs(13.67±0.36)%,P<0.05]。结论 CEPO可显著改善CHF大鼠的心功能,该作用可能与减轻局部炎症反应及抑制心肌细胞凋亡有关。

氨甲酰化促红细胞生成素经PI3-K/Akt信号通路抗脑缺血损伤

目的观察脑缺血后氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)的神经保护作用并探讨其可能机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=10):(1)假手术组;(2)缺血组;(3)EPO组;(4)CEPO组;(5)LY(LY294002)组;(6)CEPO+LY组。应用大脑中动脉线栓法(MCAO)制作大鼠局灶性脑缺血模型,评定大鼠神经功能并计算脑梗死体积,Western blot方法检测PI3-K/Akt活性变化。结果 EPO组与CEPO组脑梗死体积均明显缩小,神经功能显著改善,磷酸化Akt(p Akt)水平明显增高,且两组之间无明显差异,但CEPO的神经保护作用及对Akt磷酸化的诱导效应均可被PI3-K抑制剂LY294002部分抵消。结论 CEPO具有与EPO相当的缺血后脑保护作用,其机制可能与PI3-K/Akt信号通路激活有关。

氨甲酰化促红细胞生成素逆转慢性心力衰竭大鼠左室重构的研究

目的:探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心室重构的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠90只,随机选取10只作为对照组,其余腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)进行造模。5周后将造模成功者再分为CHF组和CEPO组,后者腹腔注射CEPO50μg/kg,2次/周,CHF组和对照组同期腹腔注射等量生理盐水,4周后检测各组大鼠血流动力学指标、血浆B型脑钠肽(BNP)水平,并计算左心室重量指数(LVW/BW)。结果:与对照组相比,CHF组左室内压峰值(LVSP)、左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)显著降低,左室舒张末压(LVEDP)显著升高(P<0.05),血浆BNP水平显著升高(P<0.05),LVW/BW也显著升高(P<0.05)。与CHF组相比,CEPO组LVSP、±dp/dtmax均显著升高,而LVEDP则显著降低(P<0.05),血浆BNP水平显著降低(P<0.01),LVW/BW也显著降低(P<0.05)。结论:CEPO可通过降低血浆BNP水平、减轻左心室重构来改善CHF大鼠的心功能。

促红细胞生成素和氨甲酰化衍生物对慢性心力衰竭大鼠抗心肌细胞凋亡及机制的研究

目的探究促红细胞生成素(EPO)及氨甲酰化抗慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其可能的机制。方法将39只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、EPO组及CEPO组。所有大鼠均采用腹腔注射异丙肾上腺素法建立大鼠心力衰竭模型。干预4周后,检测3组大鼠血流动力学指标变化,血清中iNOS、SOD水平及心肌细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI)和心肌细胞凋亡率。结果与对照组比较,EPO组与CEPO组LVSP、±dp/dtmax均显著提高,而HR及LVEDP显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);EPO组与CEPO组间血流动力学指标变化差异有统计学意义(P<0.05);EPO组与CEPO组SOD水平与对照组比较显著上升(P<0.05),而iNOS水平显著下降(P<0.05);EPO组与CEPO组间iNOS、SOD水平差异有统计学意义(P<0.05);3组大鼠心肌细胞凋亡指数以对照组最高(36.53%),EPO组次之(23.73%),CEPO组最低(19.64%),心肌细胞凋亡指数差异有统计学意义(P<0.05);3组大鼠不同时间点心肌细胞凋亡率按照对照组、EPO组及CEPO组的顺序依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EPO及CEPO可有效改善CHF大鼠的心功能,抑制心肌细胞凋亡CEPO的功效要优于EPO,其发生机制可能与机体内血清中的iNOS及SOD水平有关。

氨甲酰化促红细胞生成素抗大鼠慢性心力衰竭的实验研究

目的探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)抗慢性心力衰竭(CHF)的作用及其可能的机制。方法 90只Wistar大鼠随机分为心衰组、干预组及对照组。心衰组及干预组均采用腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)法建立大鼠CHF模型,干预组予以CEPO干预4周后,测定各组大鼠血流动力学指标、血清诱生型一氧化氮合酶(iNOS)及超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果心衰组及干预组左室内压峰值(LVSP)、左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)及血清SOD水平较对照组均显著降低(P<0.05),而左室舒张末压(LVEDP)、心率(HR)及血清iNOS水平均显著增高(P<0.05);干预组LVSP、±dp/dtmax及血清SOD水平较心衰组均显著增高(P<0.05),而LVEDP、HR及血清iNOS水平均显著降低(P<0.05)。结论 CEPO具有抗CHF的作用,可能与抑制过度的NO释放及清除氧自由基有关。

抗氨甲酰化蛋白抗体的制备及其ELISA检测方法的建立

为了制备抗氨甲酰化蛋白抗体,探讨了氨甲酰化与瓜氨酸化之间的关系,开发氨甲酰化蛋白检测试剂盒。以牛血清白蛋白(BSA)和氰酸钾(KCNO)为原料合成人工完全抗原(Hcit-BSA),然后免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠,获得抗血清,间接ELISA测定抗体效价,用方阵实验确定抗体最佳稀释倍数和包被抗原的最佳包被浓度,间接竞争ELISA检测抗体特异性。结果表明:抗体效价大于1∶8 000,抗体最佳稀释倍数为1∶4 000,包被原最佳包被浓度为0.25μg/mL,抗体能特异性识别氨甲酰化产物(carbamylation-derived products,CDPs)。Hcit-BSA具有较强免疫原性,使BALB/c小鼠产生抗氨甲酰化蛋白抗体,也为建立一种简便、快速、特异性强的免疫分析方法奠定了基础,为一些疾病的早期快速检测提供了可能。

氨甲酰化促红细胞生成素对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能、心肌细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白活化表达的影响。方法将30只雄性成年SD大鼠随机分为假手术(Sham)组(n=10)、CEPO组(n=10)和对照(Control)组(n=10),采用腹主动脉缩窄术制作慢性心力衰竭模型,术后第8周CEPO组开始经腹腔注射50μg/kg CEPO,3次/周,连续4周;Sham组、Control组同期经腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。术后第8周、12周行心脏彩超检测大鼠心功能。术后第12周末取大鼠心肌组织切片采用HE染色法观察心肌组织细胞形态;采用原味缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡及计算凋亡指数(AI);采用Western blot印迹法检测心肌活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达水平。结果与假手术组相比,建模大鼠术后第8周时出现心室肥厚及左室射血分数(LVEF)减退;CEPO组干预4周后左室射血分数较Control组明显升高(P<0.05),收缩末期室间隔厚度(IVSs)、收缩末期左心室后壁厚度(LVPWs)、舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)明显降低(P<0.05)。与Control组比较,CEPO组AI值显著降低[(23.87±1.45)%vs(30.15±0.67)%,P<0.05],cleaved Caspase-3表达水平(0.489 1±0.029 1)明显减少(P<0.01)。结论 CEPO可通过抑制凋亡关键酶Caspase-3的活化,显著减少cleaved Caspase-3蛋白的表达水平,减少心肌细胞凋亡以改善心功能。

山梨糖脱氢酶和氨甲酰化酶的融合表达

利用大肠杆菌-生黑醋杆菌穿梭载体pUG18构建了山梨糖脱氢酶基因sdh和氨甲酰化酶基因hyuC的融合表达质粒pUG18-SDH-HyuC。在JM109/pUG18-SDH-HyuC中检测到山梨糖脱氢酶(SDH)和氨甲酰化酶(HyuC)的酶活性,大量的SDH和HyuC不以融合蛋白形式存在。将质粒pUG18-SDH-HyuC电转化至生黑醋杆菌H24,检测到HyuC活性,但尚未检测到SDH酶活性。从生黑醋杆菌转化子中提取质粒,重新转化至JM109,又可同时检测到SDH和HyuC活性,传代实验和对质粒的鉴定结果也说明该质粒在H24中稳定存在。

肾移植术后氨甲酰化血红蛋白的动态观察

目的：了解氨甲酰化血红蛋白在肾移植术后肾功能恢复中的作用。方法：采用高效液相色谱法动态检测28例肾移植患者氨甲酰化血红蛋白含量。结果：肾功能稳定组氨甲酰化血红蛋白在本后第24天接近正常，并与第3天的尿素水平相关性最佳，急性排斥组却变化不大。结论：氨甲酰化血红蛋白是反映尿素浓度及作用时间的参数，可作为肾移植术后肾功能恢复的监测指标。

抗氨甲酰化蛋白抗体的研究进展

类风湿性关节炎(RA)诊治的关键是早期诊断、早期治疗,因而找寻敏感而又特异的生物学标志物成为RA早期实验诊断的迫切需要。近年来,抗氨甲酰化蛋白(Car P)抗体受到关注。抗Carp抗体可提高抗瓜氨酸蛋白抗体(ACPA)阴性RA患者的敏感性,约30%ACPA阴性RA患者能检测到该抗体。与ACPA一样,抗Car P抗体有望成为RA早期诊断的指标之一。文章就相关研究进展作一综述。

氨甲酰化诱导的牛晶状体3-磷酸甘油醛脱氢酶和硫醇转移酶的失活(英文)

目的:3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解过程中的一个关键酶,与老化和白内障发生密切相关,硫醇转移酶(TTase)可断裂晶状体蛋白质氧化形成的二硫键使硫醇化的蛋白质脱硫醇,对于维持晶状体透明性极为重要。氨甲酰化为重要的翻译后修饰。本研究观察氨甲酰化是否能诱导晶状体GAPDH和TTase的失活。方法:透明新鲜的晶状体取自2周岁健康牛,与100mmol/L氰酸钾于37℃水孵箱分别振动温育7d和12d。设透明晶状体为正常对照组。所有晶状体孵育在50mmol/LDMEM液中,然后每只晶状体去囊膜,匀浆,提取水溶性蛋白质。用分光光度计分别测量GAPDH和TTase的活性。结果:与氰酸钾孵育后GAPDH的活性与正常对照组相比显著降低(P<0.01),其中12d组与7d组相比,活性明显下降。TTase的活性在孵育7d后与对照组相比有统计学差异(P<0.05),12d组的活性与对照组相比有显著差异(P<0.01),7d组活性与12d组相比无统计学差异(P=0.19296)。结论:研究结果显示,分别与100mmol/L氰酸钾孵育7d和12d后,氨甲酰化组的GAPDH和TTase活性与对照组相比有统计学差异,证实氨甲酰化可以诱导GAPDH和TTase酶的失活,为TTase和GAPDH在白内障发病机制中的进一步研究提供了新思路。

蛋白质的氨甲酰化和动脉粥样硬化

氨甲酰化是蛋白质翻译后的一种修饰,来自于异氰酸和特殊的游离功能基之间的非酶促反应.氨甲酰化的蛋白质涉及在各种疾病的进展中,特别是动脉粥样硬化中.该综述阐述了氨甲酰化过程的生化基础,及在蛋白质分子衰老中它的作用,并讨论了这些生物标志物可能的临床关联.

蛋白质的氨甲酰化作为慢性肾衰时的生物标志物

许多研究已证实氨基甲酰化的蛋白质涉及各种疾病的进展,特别是慢性肾衰。本文的目的是介绍非酶促蛋白质翻译后修饰的概况以及其在体内的影响,并评价其作为生物标志物的临床用途。

抗氨甲酰化蛋白抗体检测在类风湿关节炎中的意义

目的探究类风湿关节炎(RA)患者中检测血清抗氨甲酰化蛋白(CarP)抗体的意义和应用价值。方法选取我院风湿免疫科2014年9月至2015年10月收治的RA初诊患者135例(RA组),同时选取健康体检者85例作为对照组(健康组),采用ELISA方法分别测定患者血清中抗CarP抗体、抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体的水平,并详细记录每例患者肿胀关节数、压痛关节数、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)等临床观察指标。分析并比较抗CarP抗体与抗CCP抗体之间以及与各种临床指标的相关性,初步探讨定量测定抗CarP抗体、抗CCP抗体的水平与疾病活动度和影像学改变的关系。结果本研究纳入的135例RA初诊患者中,抗CCP抗体阳性者106例(78.5%),抗CarP抗体阳性者67例(49.6%)。联合检测抗CCP抗体和抗CarP抗体可提高诊断的特异性,高达97.6%。抗CarP抗体水平与患者肿胀关节数、压痛关节数、DAS28评分呈显著正相关(r=0.61,P=0.001;r=0.67,P=0.001;r=0.62,P=0.001),与CRP、 ESR呈弱正相关(r=0.28,P=0.015;r=0.35,P=0.018),与病程(r=0.09,P=0.43)无相关性。135例RA患者中98例(72.6%)存在放射学改变,37例(27.4%)未出现放射学改变,依照X线片改变显示的不同关节损伤程度分期,血清中2种抗体水平的差异有统计学意义(P <0.05)。结论联合检测抗CarP抗体和抗CCP抗体可提高诊断的特异性。抗CarP抗体可能与RA患者的病情活动度和骨质破坏相关,有望成为RA患者新的诊断、判断患者病情活动和预后的重要指标。

促红素及其氨甲酰化衍生物对孕鼠血液流变学的影响

目的经孕鼠腹腔给予大剂量促红细胞生成素(EPO)及氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO),观察EPO及CEPO对孕鼠血液流变学的影响。方法将15只孕17天SD大鼠随机分为3组:生理盐水对照组(NS组)、EPO处理组(EPO组)及CEPO处理组(CEPO组),每组5只,分别经腹腔注射0.9%NS(1mL/次)、EPO(5 000U/Kg)及CEPO(50μg/Kg),连续3天。第4天经下腔静脉采血,检测孕鼠的红系相关指标(RET#、RET%、HFR、IRF、RBC及HGB)及血液流变学指标(低切变率1全血粘度、低切变率5全血粘度、中切变率50全血粘滞度、高切变率200全血粘度、EAI及HCT)。结果 EPO组红系相关指标(RET#、RET%、HFR、IRF、RBC、HGB)均高于NS组和CEPO组,差异有统计学意义(P<0.05);EPO组血液流变学相关指标中低切变率1全血粘度、低切变率5全血粘度及HCT均高于NS组和CEPO组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期大剂量给予EPO能导致孕鼠骨髓造血功能增加及血液粘滞度增加,而CEPO无该作用,说明CEPO较EPO更适合于产科应用。

(3S,4S)-3-苄氧羰基氨基-4-羟甲基-2-氧代氮杂环丁烷-1-磺酸四丁基铵氨甲酰化的新方法

目的研究氨甲酰化(3S,4S)-3-苄氧羰基氨基-4-羟甲基-2-氧代氮杂环丁烷-1-磺酸四丁基铵(1)的新方法。方法以化合物1为原料,二氯甲烷为溶剂,经氯磺酰异氰酸酯酰化、亚硫酸钠水溶液脱氯磺酰基,再经阳离子交换树脂得目标化合物(3)。结果所得化合物经1HNMR、IR、旋光和元素分析确证。结论所选方法用于化合物1氨甲酰化较理想。