HPLC法同时测定人尿液中三苯双脒代谢物氨脒和乙酰氨脒的浓度

目的：建立同时测定人尿液中三苯双脒代谢物氨脒和乙酰氨脒浓度的方法,并进行其排泄动力学研究。方法：8名健康男性受试者空腹口服三苯双脒肠溶片400 mg,收集服药前及服药后0~2、2~4、4~6、6~8、8~12、12~24、24~36、36~48 h的尿液。尿样经沉淀蛋白并稀释后,以比卡鲁胺为内标,采用高效液相色谱法进样测定,色谱柱为Agilent Zorbax Extend C18（250 mm×4.6 mm,5μm）流动相为乙腈-水-三乙胺（60∶40∶0.2,V/V/V）,紫外检测波长为265 nm,流速为0.7 ml/min,进样量为10μl。结果：氨脒和乙酰氨脒尿药浓度分别在0.5~500μg/ml（r=0.996 2）和0.1~200μg/ml（r=0.995 8）范围内线性关系良好,最低定量限分别为0.5、0.1μg/ml,绝对回收率分别为94.78%~95.23%和91.26%~96.99%,相对回收率为98.37%~101.44%和99.26%~102.06%,日内、日间RSD〈7%;-20℃冷冻24 h及7 d和反复冻融均稳定,RSD〈7%。受试者口服400 mg三苯双脒肠溶片后,氨脒和乙酰氨脒48 h尿累积排泄率分别为（55.84±13.60）%和（14.98±7.65）%,采用DAS 2.0程序计算氨脒和乙酰氨脒半衰期分别为（3.46±0.73）h和（4.21±0.43）h,尿药排泄速率常数分别为（0.21±0.07）h^-1和（0.17±0.02）h^-1。结论：该方法简单、快速、灵敏、重复性好,可用于健康受试者口服三苯双脒肠溶片后氨脒和乙酰氨脒尿药浓度的测定。

氨氯吡脒抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的角膜新生血管

目的探讨氨氯吡脒是否能抑制碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）诱导的角膜新生血管形成（ＣＮＶ）。方法每只兔眼角膜基质层内植入ｂＦＧＦ１０００ｎｇ缓释小丸，诱发ＣＮＶ。实验组兔每天腹膜下注射氨氯吡脒３０ｍｇ，共５天；对照组不用该药。定量分析ＣＮＶ的面积。结果实验组ＣＮＶ较对照组减少６９．３２％（Ｐ＜０．００１）。结论尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活物的抑制剂氨氯吡脒可显著抑制ｂＦＧＦ诱导的ＣＮＶ。

3．2％甲氨阿维·啶虫脒微乳剂防治蚜虫、小菜蛾和菜青虫田间药效试验

田间药效试验结果表明:3．2％甲氨阿维·啶虫脒微乳剂对莱蚜具有优良的防治效 果,并具有较好的速效性与持效性,50g／667m2对菜蚜的防效在90％以上。该剂同时对鳞翅 目蔬菜害虫——莱青虫和小菜蛾也具有良好的防治效果。

非肽类纤维蛋白原受体拮抗剂（Ⅱ）：N—取代—O—对甲脒苯氧乙基—L—酪氨酸甲酯的合成与抗血小板聚集活性研究

本文通过对存在于纤维蛋白原和其他内源性整合素内精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸（RGD）序列结构的分析，在前文N－取代－O－对甲脒苯胺基羰甲基－L－酪氨酸甲酯的基础上，为了探讨空间臂极性的变化对化合物活性的影响，以氧乙基代替胺基羰甲基设计并合成了一系列含有酪氨酸骨架的非肽类模拟物，本文还测定了化合物抗ADP诱导的兔血小板聚集的抑制率，结果表明，12个化合物中有9个在10^-6mol.L^-1时显示有一定的抑制作用，其中Ii抑制作用最强。

制备3-脒基苯丙氨酸衍生物的方法

本发明涉及由3-氰基苯丙氯酸衍生物制备对映体纯的3-脒基苯丙氨酸衍生物的方法，其作为药物活性尿激酶抑制剂。本发明的制备方法得到了新的中间体，即3-羟基脒基-和3-氨基腙-苯丙氨酸衍生物。

高铼酸盐—氨氯吡咪盐酸盐萃取光度法测定铼

含铼(0-20μg)的高铼酸盐与氨氯吡脒盐酸盐(amiloride by-drochloride)缔合,在pH4用4-甲基-2——戊酮萃取,在波长362nm处测定铼.10μgReO_4^-重复测定7次的相对标准偏差为1.5%,pH和杂质离子影响测定,但仅ClO_4^-、I^-、IO_4^-严重干扰分析.本方法适用于测定氧化铝、碳催化剂中的铼.

ACE2内源性激动剂DIZE对糖尿病肾病大鼠的保护作用

目的:观察血管紧张素转换酶2(ACE2)内源性激动剂乙酰甘氨酸重氮氨苯脒(DIZE)对糖尿病肾病(DN)大鼠的保护作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组和DIZE处理组(DIZE组)。DN组与DIZE组一次性腹腔注射链脲佐菌素(65 mg/kg)建立糖尿病模型,12周后糖尿病肾病大鼠模型建立后给予DIZE 15 mg·kg^(-1)·d^(-1)或等量生理盐水皮下注射4周处理。16周末称量体重和肾重,计算肾质量体质量比(KW/BW),收集血、尿标本,检测血糖(GLU)、24 h尿蛋白(24UP)及血清肌酐(SCr)等指标。通过PAS染色观察各组肾脏病理变化;ELISA法检测大鼠AngⅡ、Ang-(1-7)、TGF-β1及VCAM-1水平的变化;通过免疫组化观察collagenⅠ和FN蛋白表达的变化;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测大鼠肾组织collagenⅠ和FN mRNA含量的变化;Western blot观察各组大鼠ACE2蛋白表达的变化。结果:DIZE显著提高了糖尿病大鼠ACE2的表达(P<0.05),降低了糖尿病大鼠血浆AngⅡ含量(P<0.05),提高了Ang-(1-7)的水平(P<0.05)。与NC组大鼠相比,DN组与DIZE组大鼠的24UP、SCr和KW/BW明显升高(P<0.05),collagenⅠ和FN mRNA水平及蛋白表达量增加,肾脏组织TGF-β1及VCAM-1明显上升(P<0.05)。DIZE组与DN组大鼠相比,24UP和SCr水平降低(P<0.05),GLU和KW/BW无明显差异,collagenⅠ和FN mRNA含量及蛋白表达量减少,肾脏组织TGF-β1及VCAM-1水平降低(P<0.05)。结论:ACE2内源性激动剂DIZE显著提高了ACE2的活性,增加了Ang-(1-7)的含量,从而降低了肾脏纤维化及炎症水平,并对糖尿病肾病大鼠起到保护性作用。

常规方法(冲击量+维持量)补充肌酸对运动训练大鼠内源性肌酸合成影响的动态观察

目的:动态观察常规方法(冲击量+维持量)补充肌酸对运动训练大鼠自身肌酸生物合成和代谢的影响。方法:将60只大鼠按体重随机分为6组:3组为补充肌酸组,分别以冲击量(1.5g/kg/d)1周、冲击量(1.5g/kg/d)1周+维持量(0.15g/kg/d)4周和冲击量1周+维持量(0.15g/kg/d)8周补充肌酸;其余3组为相应对照组。各组大鼠每天进行游泳训练4小时。分别于实验1周、5周、9周后测定大鼠肾脏精氨酸-甘氨酸脒基转移酶(AGAT)活性,肾脏、肝脏和血清胍乙酸(GA)含量,肾脏、骨骼肌和血清肌酸含量,血清和骨骼肌肌酸激酶(CK)活性及血清肌酐水平。结果:冲击量补充肌酸可导致运动训练大鼠肾脏AGAT活性以及肾脏、肝脏和血清胍乙酸含量降低,随着维持期延长,上述指标逐步恢复至对照组水平。补充肌酸引起肾脏肌酸含量明显增加,肾脏和血清肌酸含量与AGAT酶活性呈明显负相关。结论:冲击量补充肌酸可抑制运动训练大鼠内源性肌酸的合成,而在维持量阶段抑制状态逐渐缓解。建议运动员补充肌酸时不使用冲击剂量而只使用维持剂量。

大剂量、长时间补充肌酸对大鼠自身肌酸生物合成的影响

目的 :探讨大剂量、长时间补充肌酸对大鼠自身肌酸生物合成过程和肌酸代谢的影响。方法 :测定不同剂量补充肌酸 4周后大鼠肾脏的精氨酸 -甘氨酸脒基转移酶 (AGAT)活性和酶促反应产物胍乙酸含量、骨骼肌肌酸含量、血清肌酸激酶活性和肌酐水平。结果 :补充 4周不同剂量的肌酸后 ,大鼠体重有增加的趋势 ,同时腓肠肌湿重显著增加 (P <0 0 5 ) ,但 6 0g/kg组大鼠的体重和腓肠肌湿重低于其它剂量组。肾脏AGAT活性和胍乙酸含量有不同程度的降低 (P <0 0 1) ,补充剂量越大 ,降低程度越明显。结论 :大剂量、长时间补充肌酸可显著影响内源性肌酸的合成。超大剂量补充肌酸还会造成腹泻和骨骼肌量丢失。研究结果提示 ,补充肌酸应适量适时 ,不可长时间大剂量或超大剂量使用。

长期(8个月)补充肌酸对大鼠内源性肌酸合成的影响

目的:探讨长期(8个月)补充肌酸对大鼠内源性肌酸合成的影响。方法:21天龄雄性SD大鼠连续补充0.35g/kg/d肌酸(肌酸组)或对照液(对照组)8个月,观察其内源性肌酸生物合成途径中L-精氨酸-甘氨酸脒基转移酶(AGAT)活性和主要代谢物质含量的变化。结果:8个月后,与对照组相比,肌酸组大鼠肾脏L-精氨酸-甘氨酸脒基转移酶活性显著降低,肾脏、肝脏和血清胍乙酸含量较低;肾脏、肝脏、血清和腓肠肌肌酸含量变化不明显,比目鱼肌和跖肌肌酸含量显著升高;肾脏结构、血清肌酐含量和骨骼肌肌酸激酶活性等均无显著性差异。肾脏AGAT活性与肾脏肌酸含量和血清肌酸含量均无显著相关关系(P>0.05)。结论:长期补充0.35g/kg/d肌酸可抑制大鼠内源性肌酸合成,提高骨骼肌肌酸含量,但不会对肾脏结构产生影响。

补充大剂量肌酸抑制运动训练大鼠内源性肌酸的合成

目的:探讨补充大剂量肌酸对运动大鼠自身肌酸生物合成和体内肌酸代谢的影响。方法:给游泳训练大鼠补充肌酸,测定大鼠肾脏精氨酸-甘氨酸脒基转移酶(AGAT)活性、酶促反应产物胍乙酸含量、骨骼肌肌酸含量、血清肌酸和肌酐含量、血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、大鼠游泳力竭时间。结果:补充超大剂量(6 .0g/kg/d)肌酸可引起大鼠腹泻,造成腓肠肌和比目鱼肌湿重显著下降(P <0 .0 5 ) ;补充相当于人体冲击剂量(1 5g/kg/d)和超大剂量肌酸,均可引起运动大鼠肾脏AGAT活性和肝脏胍乙酸含量明显下降(P <0 . 0 1) ;超大剂量补充肌酸引起游泳大鼠血清肌酐含量增加。此外,运动训练能提高肾脏AGAT活性和肝脏胍乙酸含量,促进内源性肌酸的合成。结论:超大剂量补充肌酸可抑制运动机体内源性肌酸的合成。建议实践中不宜超量超时补充肌酸,有必要对人体补充肌酸的冲击剂量(0 . 3g/kd/d或2 0g/d)的健康安全性进行深入研究。

补充肌酸对生长发育期雌、雄大鼠内源性肌酸合成的影响

目的:探讨补充肌酸对生长发育期雌、雄大鼠内源性肌酸合成的影响,为不同群体合理使用肌酸提供实验依据。方法:21天龄雌性和雄性SD大鼠随机分为5组,每组雌、雄大鼠各6或7只,分别连续补充0(对照液)、0.15、0.35、0.75或1.5g/kg/d肌酸液8周。观察内源性肌酸合成代谢途径中L-精氨酸-甘氨酸脒基转移酶(AGAT)活性和其它主要指标的变化。结果:与相同性别对照组相比,雌性或雄性大鼠补充肌酸8周后,肾脏AGAT活性和肝脏胍乙酸含量均降低,且补充肌酸剂量越大,降低越明显;腓肠肌、跖肌和比目鱼肌肌酸含量、血清肌酐含量升高;肾脏结构无明显差异。补充相同剂量肌酸的雄性大鼠肾脏AGAT活性和肝脏胍乙酸含量均高于雌性大鼠。结论:补充肌酸对生长发育期雌性或雄性大鼠的内源性肌酸合成均有抑制作用。雌性大鼠内源性肌酸合成能力弱于雄性。补充肌酸有助于提高骨骼肌肌酸含量。大剂量(1.5g/kg/d)补充肌酸不会对肾脏结构产生明显影响。

常规方法(冲击量+维持量)补充肌酸对内源性肌酸合成代谢的影响

目的:探讨常规方法(冲击量+维持量)补充肌酸对大鼠自身肌酸生物合成代谢的影响。方法:冲击剂量(1.5g/kg/d)补充肌酸1周和维持剂量(0.15g/kg/d)补充肌酸1月、2月后,分别测定大鼠肾脏精氨酸-甘氨酸脒基转移酶(AGAT)活性,肾脏和肝脏胍乙酸含量,肾脏、骨骼肌和血清肌酸含量,血清和骨骼肌肌酸激酶(CK)活性及血清肌酐水平。结果:冲击量及维持量补充肌酸均可导致大鼠肾脏AGAT活性以及肾脏和肝脏胍乙酸含量降低,引起肾脏肌酸含量明显增加,肾脏和血清肌酸含量与AGAT酶活性呈明显负相关。冲击期血清肌酐水平显著升高,但在维持期恢复正常。结论:常规方法(冲击量+维持量)补充肌酸可显著抑制内源性肌酸的合成。

重氮氨苯脒抗血清的制备

重氮氨苯脒作为一种动物抗寄生虫药物，应用广泛，多个国际组织和国家将其列入需要检测残留的兽药。我国虽然也严格规定了其残留限量，但还未制定相关检测标准，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测该药物在我国更是空白。本研究通过改造免疫原免疫实验兔，获得了抗血清，该血清效价大于1：50000，线性范围在500～3．9ng／mL之间，线性系数R=0．99（R2=0．9856）以上，特异性良好，为建立ELISA方法检测重氮氨苯脒提供了物质基础。

补充肌酸及间歇性运动对大鼠内源性肌酸合成的影响

目的:探讨补充大剂量肌酸对运动大鼠自身肌酸合成的影响.方法:补充肌酸的大鼠进行短时间大强度的间歇性跑台运动,观察对肾脏精氨酸-甘氨酸脒基转移酶(AGAT)活性、胍乙酸含量、骨骼肌肌酸含量和血清肌酸含量的影响.结果:补充相当于人体冲击剂量(1.5 g/kg/d)的肌酸对短时间大强度运动的大鼠肾脏AGAT活性和肝脏胍乙酸含量并不产生明显的影响;而补充超大剂量肌酸,均可引起运动大鼠肾脏AGAT活性和肝脏胍乙酸含量明显下降(P<0.01);超大剂量补充肌酸引起运动大鼠血清肌酐含量增加(P<0.01).

DIZE对糖尿病心肌病大鼠心功能的保护作用

目的:观察研究血管紧张素转换酶2(ACE2)激动剂重氮氨苯脒乙酰甘氨酸盐(DIZE)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心功能的保护作用。方法:30只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、DCM组和DIZE处理组(DIZE组),每组10只。DCM组与DIZE组一次性腹腔注射链脲佐菌素65 mg/kg,建立糖尿病模型,12周后经超声检查选出符合糖尿病心肌病的大鼠模型,分别给予DIZE 15 mg·kg^(-1)·d^(-1)或等体积生理盐水,皮下泵入给药4周处理。第16周末行超声检测心功能后麻醉处死大鼠。通过HE染色和Masson染色观察大鼠心肌组织形态学变化,Wsetern blot、ELISA和免疫组化等方法观察ACE2、血管紧张素(Ang)Ⅱ、Ang-(1-7)、白细胞介素(IL)-1、IL-6和结缔组织生长因子(CTGF)等指标的变化。结果:DIZE显著提高了糖尿病大鼠心肌中ACE2的表达,DIZE组较DCM组心肌组织中胶原含量明显降低,IL-1和IL-6蛋白表达水平明显下降,心功能得到明显改善(P<0.05)。结论:ACE2内源性激动剂DIZE显著提高了ACE2的水平,降低了炎症水平,从而对DCM大鼠心功能起到保护作用。

1400W对内毒素损伤豚鼠血迷路屏障的保护作用及机制初探

目的观察一氧化氮合酶抑制剂1400W(N-(3-(氨甲基)-苄基)乙脒)对内毒素(endotoxin,ETX)所致的豚鼠血迷路屏障损伤的保护作用,并初步探讨其可能机制。方法将豚鼠分3组,每组分别于听泡内各注入无菌生理盐水、ETX和ETX加1400W,光镜观察耳蜗形态变化;以伊文思蓝(Evans Blue,EB)为示踪剂,测量EB通过耳蜗血迷路屏障的渗出量;用硝酸还原酶法检测各组耳蜗组织一氧化氮(NO)含量的变化。结果ETX组EB渗出量增加,同时有NO含量增加;ETX加1400W组和ETX组比较,EB渗出量减少(P<0.05),NO生成亦减少(P<0.05)。无菌生理盐水组无EB通过,亦无NO含量增加。结论ETX可能通过诱导NO生成而引起血迷路屏障通透性增加,此作用可以被1400W抑制,后者可能减轻中耳炎引起的内耳损害。

ACE2激动剂对大鼠放射性心脏损伤的保护作用研究

目的探讨乙酰甘氨酸重氮氨苯脒(DIZE)对大鼠放射性心脏损伤的作用及其机制。方法将60只大鼠随机分为对照组、照射组及DIZE组,每组20只。对照组不照射,照射组及DIZE组大鼠心脏接受20 Gy照射;DIZE组大鼠心脏照射前1周至照射后1个月给予皮下注射DIZE[15 mg/(kg·d)]。照射后3个月及6个月,每组随机选择10只大鼠处死,进行血清酶联免疫吸附法测定、组织病理及反转录-聚合酶链反应检测。结果与照射组比较,DIZE组血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)降低,血管紧张素1-7(Ang1-7)增加,心肌细胞损伤减轻,胶原容积分数降低,微血管密度改变,血管紧张素转换酶2(ACE2)表达上调(P<0.05)。结论DIZE可改善心肌损伤,保护内皮细胞,降低间质纤维化,可能作为治疗放射性心脏损伤的有效药物。

构建整合型重组枯草芽孢杆菌高效合成胍基乙酸

胍基乙酸作为一种能源性物质,在食品、医药和饲料等行业有着广泛的应用前景,但目前尚未实现利用生物法工业化生产胍基乙酸。本研究在食品级安全菌株枯草芽孢杆菌中设计胍基乙酸的合成路线,利用调控关键酶表达、解除反馈抑制、增加膜通透性等技术,实现全细胞催化高效合成胍基乙酸。首先基于进化树挖掘筛选最佳L-精氨酸:甘氨酸脒基转移酶,利用强启动子与基因组整合相结合的策略提高关键酶表达水平;其次,引入谷氨酸棒杆菌中用于L-精氨酸合成的鸟氨酸循环途径,缓解副产物L-鸟氨酸对酶的反馈抑制,并敲除L-精氨酸降解途径,强化底物再生;再次,增强N-乙酰胞壁-L-丙氨酸酰胺酶(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase,LytC)基因表达,改善细胞膜通透性;最后,使用菌株Bs-13在最佳转化条件下,经24 h获得13.1 g/L胍基乙酸,转化速率为0.54 g/(L·h),底物甘氨酸的转化率为92.7%。以上策略一定程度上提高了胍基乙酸的生产效率,为生物法合成胍基乙酸提供了参考。

Amiloride对实验性再灌注心肌的保护作用

在改良的Langendorff主动脉逆灌装置上制成离体鼠心再灌注损伤模型,评价H^+—Na^+交换阻滞剂Amiloride对抗心肌缺血再灌注损伤的作用。结果表明再灌注期间:(1)Amiloride各剂量组心肌收缩力及其收缩和舒张速率的恢复为60％以上,对照组为252<以下(P<0.01);(2)Amiloride各剂量组冠脉流量的恢复在再灌注头15min均达802<以上,在后15min为60%～80%,对照组为40%以下(P<0.05和0.01);(3)对照组的再灌注心律失常发生率为100%,而不同剂量的Amiloride各组:0.2,20,100μM/L分别为100％、25％和0。提示Amiloride对再灌注损伤心肌具有保护作用,且呈剂量依赖性。