固定化青霉素G酰化酶水解头孢菌素G制备7—ADCA的研究

用聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶水解头孢菌素G制备7-ADCA,固定化酶对头孢菌素G的最适pH为9.0,最适温度50℃。在37℃、pH8.0固定化酶对头孢菌素G的表观米氏常数为1.67×10^(-2)mol/L。最大反应速度为3.01mmol·g^(-1)·min^(-1)。头孢菌素G溶液浓度在2％以上时,对固定化酶有明显的抑制作用。固定化酶水解头孢菌素G的最佳投料浓度为5％～6％,水解时用酶量以每克头孢菌素G投300U以上为好。按上述条件水解头孢菌素G,操作25批后固定化酶保留活力77.8％,7-ADCA平均收率92.68％。

小鼠抗青霉素和头孢菌素酰化酶抗体制备及交叉反应研究

为探讨用不同方法制备的抗原对抗体效价的影响以及抗体之间的交叉反应 ,采用 3种不同方法制备的抗原分别免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备出抗青霉素酰化酶 α亚基、β亚基和抗头孢菌素酰化酶α亚基、β亚基 4种抗体 ,测定了它们的效价 ;同时还比较了用同一种方法制备的抗原免疫小鼠后制作这两类抗体的效价以及上述 4种抗体之间对应抗原的交叉反应。结果表明 ,用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得抗体效价较高 ;同样用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得的两类抗体效价无显著差异 ;在交叉反应测试中 ,抗头孢菌素酰化酶抗体也能识别青霉素酰化酶 ,但抗青霉素酰化酶抗体却几乎不能识别头孢菌素酰化酶 ,即抗头孢菌素酰化酶抗体更为活跃 ,而抗青霉素酰化酶抗体则更为专一。同类抗体对应抗原 2个亚基之间的交叉反应说明其互相结合部位结构的类似 。

固定化青霉素酰化酶在DMSO-水介质中催化合成头孢氨苄

与传统的化学方法相比较 ,酶法合成头孢菌素工艺具有明显优点 ,通过酶的固定化与非水相酶催化技术相结合为提高产率找到了简捷的途径。实验以 7 氨基 3 脱乙酰氧基头孢烷酸 (7 amino 3 deactoxycephalosporanic,7 ADCA)为母核 ,苯甘氨酸甲酯盐酸盐 (D phenylglycinemethylesterchlorohydrate ,PGME)为酰基供体 ,在二甲亚砜 (DMSO) 水共溶剂体系中 ,采用聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶 (penicillinacylaseEC3 .5 .1.11,PA)催化合成头孢氨苄 (Cephalexin)。发现DMSO浓度、反应温度、pH、底物浓度等对转化率均有影响。在 2 5℃ ,pH6 .5 ,40 %DMSO 水体系中 ,7 ADCA、PGME浓度分别为 85mmol/L ,12 8mmol/L时 ,7 ADCA转化率达 90 %。在 15次反复合成Cephalexin期间 ,转化率保持 90

固定化巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶酶促合成头孢氨苄的研究

β—内酰胺系列抗菌素抗菌谱广、疗效高、毒副作用小,国际上研究与应用日渐广泛深入。头孢氨苄(Cephalexin)是重要的半合成抗菌素之一,由头孢霉素母核7—氨基脱乙酰氧基头孢烷酸(简称7-ADCA)和侧链结构物苯甘氨酸或其甲酯(PGME)经酰化而生成。酰化有化学法和酶法两种。采用青霉素G酰化酶或a—氨基酸酯酶或,a—氨酰转移酶的酶法,具有工艺操作简单、无需基团保护、环境污染轻等优点。继日本人于70年代初试验成功酶法之后,80年代初我们开展了这方面研究。制备方面,胞外酶优于胞内酶;使用方面,固定化酶优于固定化细胞。在用具有青霉素G酰化酶活性的固定化大肠杆菌(Escherichia coli)细胞合成头孢氨苄的基础上,又研究了用固定化巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BP931胞外青霉素G酰化酶酰化合成头孢氨苄的条件。本文报道这一研究结果。

聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶合成头孢氨苄的研究

将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键结合到聚丙烯腈纤维的衍生物上。制成的丝状固定化青霉素酰化酶表现活力达 1 5 3U g(湿重 )。固定化酶合成头孢氨苄的最适pH为 6 5 ,最适温度为 40℃。 7 ADCA的投料浓度以 4%为好 ,7 ADCA与PGME的投料量比率为1∶2 ,最佳用酶量为 1 70U g 7 ADCA。在pH6 5、温度 3 0℃时 ,固定化酶对 7 ADCA的表观米氏常数K7 ADCA为 0 1 6 2mol L ,对PGME的表观米氏常数KPGME为 0 3 6 4mol L ,最大反应速度Vmax为0 0 4 6 2mol·L- 1·min- 1,用固定化酶合成头孢氨苄 ,使用 5 0次保留酶活力 83 9%

固定化青霉素G酰化酶合成头孢氨苄过程中酶活稳定性研究

目的改善固定化青霉素G酰化酶(PGA)的酶活稳定性,从而提高其重复使用次数。方法采用模拟法,研究了酶法合成头孢氨苄过程中影响PGA酶活稳定性的一些主要因素。结果 7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)、苯甘氨酸甲酯(PGM)对固定化PGA表现出了很强的底物抑制作用,而且它们的抑制作用与其浓度几乎无关。固定化PGA加入到7-ADCA、PGM溶液后,其酶活迅速降低,但反应时间超过12h后,PGA酶活几乎保持恒定不变。头孢氨苄对固定化PGA表现出了产物抑制作用,这种抑制作用主要是由其水解产物造成的。随着与头孢氨苄反应时间的延长,固定化PGA的酶活一直持续降低。当控制反应温度≤30℃时,固定化PGA表现出良好的酶活稳定性。当酶反应液p H值为6.5时,固定化PGA酶活稳定性最好。结论合理控制头孢氨苄合成反应条件能够有效改善固定化PGA酶活稳定性。

固定化青霉素酰化酶在双水相体系中催化合成氨苄西林

通过研究氨苄西林、6-氨基青霉烷酸(6-APA)和D-苯甘氨酸甲酯(D-PGME)在聚乙二醇(PEG)和不同盐组成的双水相体系(ATPS)中的分配行为,建立了一个由PEG-4000(w=20%)和硫酸铵(w=15%)组成的双水相体系.在此体系中,氨苄西林的分配系数为5.0,6-APA和D-PGME的分配系数分别为1.7和1.4.以环氧基功能化介孔分子筛SBA-15为载体固定青霉素酰化酶(Penicillin G Acylase,PGA),并在双水相体系中催化合成氨苄西林,产率为80%,经过4批次的连续合成,产率提高到98%,而在水相体系中酶促合成氨苄西林的产率仅为27%.

HPLC法测定固定化青霉素酰化酶合成头孢羟氨苄的活力

目的建立一种HPLC法测定固定化青霉素酰化酶合成头孢羟氨苄活力的方法。方法酶与其底物7-ADCA及D-对羟基苯甘氨酸甲酯,在20℃的溶液中,搅拌转速为250r/min条件下反应10min,通过测定反应液中头孢羟氨苄的含量,从而换算出合成酶活力的数值。采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(用lmol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.0)-甲醇(98:2);流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检测波长:230nm。结果头孢羟氨苄在0.24～0.39mg/mL范围内线性关系良好(r=1.0000),回收率均在99%～101%范围内,RSD为0.40%。结论该测定方法专属性强、准确可靠、重现性好,适用于青霉素酰化酶合成酶活力的检测。

抗氨苄青霉素单克隆抗体的制备及初步鉴定

利用碳化二亚胺(EDC)法将氨苄青 霉素(Ampicillin,AMP)与匙孔嘁血蓝蛋白 (mcKLH)偶联制备免疫原免疫Balb/c小鼠, 应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓 瘤细胞(SP2/0)融合,建立分泌氨苄青霉素单 克隆抗体的杂交瘤细胞株。同上方法将氨苄 青霉素连接到阳离子化的牛血清白蛋白(cB SA)上制备检测抗原,对AMP KLH偶联物 免疫小鼠产生的抗体进行检测。通过对杂交 瘤细胞培养上清的检测、鉴定,筛选出8株高 亲和力的杂交瘤细胞株,用其制备的腹水 ELISA效价达到2×106,纯化后的单克隆抗 体(McAb)可以应用于氨苄青霉素残留的快 速检测。

联用氨苄青霉素与溶菌酶提高实验性腹膜炎的疗效

化脓性感染的治疗仍然是亟待解决的问题。在患者继发性免疫缺陷中发生率很高的情况下,细菌对许多抗生素的耐药性增强,因此探索新疗法以提高抗菌疗法的疗效是十分必要的。目前认为淋巴系统在感染-炎症性病变的发展中起重要作用,所以在研究新抗菌药物和常用抗生素高效疗法时,越来越重视淋巴系统的药代动力学和药效学。联用抗菌药物与免疫诱导剂是提高抗菌疗法疗效的重要途径。溶菌酶用于临床已多年。

高底物浓度下在有机培养基中采用青霉素酰化酶交联聚合和PGA-450生产头孢氨苄Illanes A等

以往在乙二醇中控制合成头孢氨苄的动力学优化结果是中等底物浓度即可获得预期产量的产物。本研究考察了在很高底物浓度、高达750mmol／L酰基供体情况下，用交联聚合的固定化青霉素酰化酶生产头孢氨苄的结果。由于传统方法的转化率已近100％，本研究更关注于产量，假定产量随底物浓度的增加而增加，但转化率不降低。与中等底物浓度下（酰基供体低于100mmol／L）得到的结果相比，采用PGA．450体系，总产量增加29倍，比产率增加4．5倍。

酶法合成头孢菌素类抗生素的研究进展

半合成抗生素的生产在医药工业中占有十分重要的地位。青霉素酰化酶是半合成 β 内酰胺类抗生素的重要用酶。由于酶法合成与化学法合成相比具有一定的优越性 ,随着酶工程技术的发展 ,酶法合成头孢菌素类抗生素已日益受到重视。提高合成产率 ,降低侧链消耗 ,从而降低生产成本是酶法合成头孢菌素类抗生素研究的关键问题。平衡控制和动力学控制是酶法合成过程的两大研究策略 ,通过改变底物、降低水活度、添加高聚物、采用固定化技术及新型反应体系等措施可改善酶促反应的微环境 ,改变酶的动力学特性 ,从而起到强化合成途径的作用。

固定化乙酰化酶催化制备头孢菌素

来源于大肠杆菌的青霉素G乙酰化酶（PGA）在催化头孢尼西的合成过程中，通过145位的精氨酸和底物β-内酰胺中的磺酸根离子之间的相互作用，有效提高了PGA活性位点吸附头孢菌素母核（7-SACA）的效率。将PGA固定化于乙醛酰基活化的琼脂糖上，通过对不同的β-内酰胺类抗生素进行动力学控制N-酰化，显示其良好的催化效率。较环氧氯丙烷法活化的疏水载体大大提高了合成率与分解率之比。

酶法合成头孢菌素类抗生素的研究进展

头孢菌素抗生素是一种抗菌活性强、疗效高的抗生素。生产过程中常用化学法和酶法来制取,但是化学法对环境污染严重,对反应条件比较苛刻,因此,酶法成为生产的必然趋势。酶法合成比化学法合成显示出更先进的科学技术与广泛应用,因此人类社会越来越看重用酶法去制造头孢菌素类抗生素。酶法合成的基本研究方法为平衡与动力学两个方面的操控,依靠新科技和与之相关的多种方法完备生产过程的基本条件,提高酶的动态活力,使生产过程更加完整连贯,趋于现代化和一体化,不断去革新进步,应用科学技术对抗生素进行生产制造。本文从不同的定义和视角去探讨酶法合成头孢菌素类抗生素的生产过程。

酶法合成头孢羟氨苄工艺研究

对酶法合成头孢羟氨苄的工艺条件进行优化,以7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸(7-amino-3-desacetoxy cephalosporanic acid,7-ADCA)为母核,对羟基苯甘氨酸甲酯(D-hydroxy phenylglycine methyl ester,D-HPGM)为酰基供体,利用青霉素G酰化酶(PGA)在水相体系中酶促合成头孢羟氨苄(cefadroxil)。该实验以温度、p H值、侧链与母核的摩尔比、投酶量、母核浓度和酶的种类等6个因素对头孢羟氨苄合成工艺条件进行优化,转化反应过程中按时取样,利用高效液相色谱仪对母核进行定量分析,追踪母核7-ADCA转化率,直至终止反应。实验结果表明,在温度为20℃、p H6.5、摩尔比1.2:1、投酶量20g、母核浓度13%、采用新A4酶的工艺条件下,母核的转化率可达到99.47%。

头孢菌素抗生素的分类及应用特点

头孢菌素类即青霉素类后，又一发现的临床应用广泛的β-内酰胺类抗生素，由于其是以冠头孢菌培养得到的天然头孢菌素C为原料，经半合成(改造其侧链)后得到，具有抗菌谱广、抗菌作用强、耐青霉素酶，临床效果好，毒性低，过敏反应相对青霉素少的一类抗生素，根据药物研制开发时间先后，抗菌谱(对革兰氏阴性杆菌抗菌活性)对β-内酰胺酶稳定性及肾毒性不同，可将头孢菌素分为四代。

酶法合成头孢氨苄的反应-双水相萃取耦合过程

应用聚乙二醇 (PEG) /硫酸镁双水相体系 (ATPS)进行了酶法合成头孢氨苄的反应 双水相萃取的耦合过程研究 .通过考察头孢氨苄、苯甘氨酸甲酯和 7 氨基脱乙酰氧基头孢烷酸 ( 7 ADCA)在ATPS中的分配行为建立了一个含 2 0 % (质量 )PEG 40 0和 12 % (质量 )硫酸镁的ATPS ,在此体系中头孢氨苄的分配系数为 6 7,苯甘氨酸甲酯的分配系数为 1 5 ,7 ADCA的分配系数为 1 2 ,且青霉素酰化酶的分配系数小于 0 0 1.底物、产物以及催化剂的分配特性有利于构建双水相体系应用于酶法合成头孢氨苄的反应 双水相萃取的耦合过程 .对此双水相体系中青霉素酰化酶的稳定性研究表明催化剂亦适合此体系的构建 .进而将此体系应用于头孢氨苄酶法合成 ,产率为 60 %左右 ,相对水相体系 2 0