饲料中添加沸石对慢性肾衰犬结肠尿素转运蛋白B及氨转运体蛋白Rh表达的影响

本研究旨在探究沸石对慢性肾衰犬结肠尿素转运蛋白B及氨转运体蛋白Rh表达的影响。选取15条2岁左右的中华田园犬,采用肾动脉结扎制作慢性肾衰(CRF)模型,另取5只犬仅腹壁切开作为假手术对照组(SOG)。造模成功后,随机等分成3组:模型组(MD)、低剂量沸石组(LCD)和高剂量沸石组(HCD),SOG组与MD组饲喂基础饲料,LCD组为1%沸石饲料,HCD为5%沸石饲料,试验连续4周。用自动化血液生化仪检测血清尿素氮(BUN)和粪尿素氮(FUN),用谷氨酸脱氢酶法测定门静脉血氨,用尿素检测试剂盒测定尿尿素量(uUrea),qRT-PCR检测结肠黏膜尿素转运蛋白B(UT-B)、氨转运体蛋白b(Rhbg)与氨转运体蛋白c(Rhcg)mRNA表达,Western blot法检测UT-B、Rhbg与Rhcg的蛋白表达。结果显示,MD组的BUN、FUN及门静脉血氨均高于SOG组,uUrea降低(P<0.01),与MD组比较,HCD组的BUN、FUN、门静脉血氨均显著降低(P<0.05);MD组Rhbg、Rhcg的mRNA表达显著高于SOG组(P<0.05),与MD组比较,HCD组Rhbg、Rhcg及LCD组Rhcg的mRNA表达显著下调(P<0.05),各组间UT-B的mRNA表达无显著变化(P>0.05);MD组Rhbg、Rhcg的蛋白表达显著高于SOG组(P<0.05),与MD组比较,HCD组Rhbg、Rhcg的表达降低,MCD组Rhcg表达降低,差异显著(P<0.05),各组间UT-B表达无差异;Pearson相关性分析发现,慢性肾衰犬BUN水平与Rhcg呈强的正相关(r=0.855,P<0.05),与Rhbg呈中等正相关(r=0.769,P<0.05)。以上结果表明,沸石具有促进CRF犬BUN经肠排泄的作用,与结肠黏膜Rhbg、Rhcg的表达下调有关,以添加5%剂量最佳。

谷氨酸神经细胞毒作用的新途径——谷氨酸/胱氨酸转运体介导机制

谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质 ,与许多神经系统疾病有密切关系。谷氨酸除通过激活谷氨酸受体产生兴奋性神经毒性外 ,还可通过抑制细胞膜上谷氨酸 /胱氨酸转运体的功能产生细胞毒性作用 ,该作用以细胞内谷胱甘肽耗竭和活性氧成分升高为主要特征 ,被称为谷氨酸的氧化毒性 ,对许多神经系统疾病的治疗具有重要意义。

谷氨酸转运体、谷氨酸/胱氨酸转运体与谷氨酸神经细胞毒作用

谷氨酸转运体与谷氨酸 胱氨酸转运体在脑缺血疾病中起重要作用 ,谷氨酸转运体的结构或功能改变可使细胞间隙的谷氨酸浓度急剧升高 ,激活NMDA受体产生一系列的表现 ,同时抑制谷氨酸 胱氨酸转运体对胱氨酸的摄取 ,介导谷胱苷肽耗竭、氧自由基升高、胞内钙升高、线粒体损伤、细胞色素c释放等神经细胞毒环节 ,激活半胱天冬酶诱导凋亡。可进一步加重谷氨酸的神经细胞毒作用。

局部应用腺苷A2a受体拮抗剂对慢性高眼压大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶(GS)和L-谷氨酸-L-天冬氨酸转运体(GLAST)表达的影响

目的观察腺苷A2a受体拮抗剂对慢性高眼压大鼠视网膜中谷氨酰胺合成酶(glutamamin synthetase,GS)和L-谷氨酸-L-天冬氨酸转运体(L-glutamate-L-aspartate transporter,GLAST)表达的影响,探讨其在高眼压下的视神经保护机制。方法 Sprague Dawley雄性大鼠共66只,均通过巩膜上静脉结扎法制作大鼠慢性高眼压模型,选取右眼作为造模眼,左眼作为对照眼,其中12只于造模后1周、2周和3周测量眼压,观察比较双眼眼压变化情况。余54只随机分为3组,眼局部分别应用SCH442416滴眼液、ZM241385滴眼液和载体滴眼液滴术眼,分别为SCH442416滴眼液组、ZM241385滴眼液和载体滴眼液组,连续滴用3周后采用Real-time PCR和Western blot方法检测视网膜GS和GLAST mRNA和蛋白的表达变化。结果造模后1周、2周和3周造模眼眼压均明显高于对照眼,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。滴用SCH442416滴眼液或ZM241385滴眼液3周后,慢性高眼压大鼠视网膜中GS和GLAST mRNA表达与载体滴眼液组相比均明显升高,差异均具有统计学意义(均为P<0.05);而SCH442416滴眼液组和ZM241385滴眼液组大鼠视网膜中GS和GLAST mRNA的表达,两组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。同时,SCH442416滴眼液组或ZM241385滴眼液组大鼠视网膜中GS和GLAST蛋白表达与载体滴眼液组比较均明显升高,差异均具有统计学意义(均为P<0.05);而SCH442416滴眼液组和ZM241385滴眼液组大鼠视网膜中GS和GLAST蛋白的表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论巩膜上静脉结扎能建立大鼠高眼压模型,方法稳定可靠。腺苷A2a受体拮抗剂SCH442416和ZM241385对慢性高眼压大鼠视网膜中GS和GLAST的表达具有调控作用,两种不同的拮抗剂作用似乎无明显差异。

谷氨酸-天冬氨酸转运体在豚鼠耳蜗的分布

目的 研究谷氨酸 -天冬氨酸转运体 (glutamate -aspartatetransporters,GLAST)在正常豚鼠耳蜗内的分布 ,为探讨GLAST在防止耳蜗谷氨酸 (Glu)神经毒性中的作用提供形态学基础。方法 选取健康红目豚鼠 6只 ,采用免疫组织化学方法 ,以山羊抗GLAST抗体为标记物 ,观察正常豚鼠耳蜗中GLAST的表达及分布。结果 在正常豚鼠耳蜗的内、外毛细胞 ,内、外毛细胞周围的支持细胞 ,螺旋神经节细胞 ,血管纹边缘细胞和螺旋缘上皮 ,均有GLAST阳性表达。结论 GLAST在正常豚鼠耳蜗内主要分布于内、外毛细胞 ,内、外毛细胞周围的支持细胞 ,螺旋神经节细胞、血管纹边缘细胞和螺旋缘上皮 ,其功能尚需进一步的研究。

鞘氨醇-1-磷酸转运体在胃癌组织的表达及其对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的鞘氨醇-1-磷酸转运体(Spns2)与肿瘤相关研究报道较少。文中旨在比较Spns2在胃癌和癌旁组织中的表达,并探讨Spns2对人胃癌细胞SGC-7901增殖、克隆形成和迁移能力的影响。方法收集2016年2月至8月江苏省肿瘤医院消化内科胃癌术后病理标本20对(癌组织和癌旁组织)。通过免疫组化法比较Spns2蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达差异。构建过表达Spns2的p EX-1真核载体和小干扰RNA(siRNA),转染人胃癌SGC-7901细胞,根据转染的质粒载体不同分2组:p EX-1-Spns2组(转染p EX-1-Spns2真核表达载体)、p EX-1组(转染空载体p EX-1)。进行siRNA制备与转染,根据转染的siRNA不同分2组:siRNA-Spns2组(加入针对Spns2的脂质体介导的siRNA)、siRNA-NC组(加入不与人任何基因序列同源的siRNA)。采用RT-PCR和Western blot分别检测转染后各组Spns2 mRNA和蛋白的表达水平;采用CCK-8、克隆形成实验、Transwell小室和划痕实验检测Spns2过表达和下调对SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移能力的影响。结果胃癌组织Spns2蛋白表达(0.39±0.04)明显低于癌旁组织(0.45±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。p EX-1-Spns2组Spns2 mRNA(21.96±2.08)、蛋白表达(10.71±2.78)较p EX-1组[(0.88±0.12)、(0.83±0.16)]明显升高(P<0.05)。siRNA-Spns2组Spns2mRNA (0.35±0.07)、蛋白表达(0.53±0.07)较siRNA-NC组[(0.91±0.09)、(0.92±0.08)]明显降低(P<0.05)。转染后第48、72、96小时,p EX-1-Spns2组SGC-7901细胞增殖能力较p EX-1组明显降低(P<0.05)。siRNA-Spns2组SGC-7901细胞增殖能力较siRNA-NC组明显增强(P<0.05)。p EX-1-Spns2组克隆形成率较p EX-1组明显降低[(33.30±3.81)%vs (48.00±4.60)%],差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-Spns2组克隆形成率较siRNA-NC组明显升高[(48.38±4.22)%vs (26.25±4.88)%],差异有统计学意义(P<0.05)。p EX-1-Spns2组穿膜细胞数明显低于p EX-1组; siRNA-Spns2组穿膜细胞数则明显高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。p EX-1-Spns2组细胞迁移率较p EX-1组降低[(1.60±0.19)%vs (3.25±0.37)%],siRNASpns2组较siRNA-NC组升高[(3.16±0.40)%vs (1.41±0.15)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Spns2在胃癌组织中低表达,过表达Spns2可降低胃癌SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移能力;下调Spns2则可促进胃癌SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移,提示Spns2可能起着抑制胃癌发生发展的作用。

关节炎慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角谷氨酸天冬氨酸转运体1型的表达

目的:在佐剂性关节炎大鼠模型基础上建立关节炎大鼠慢性吗啡耐受模型,观察兴奋性氨基酸转运体1型(GLAST)在关节炎慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角表达变化,探讨GLAST在吗啡耐受形成机制中的作用。方法:将36只健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=6),行鞘内置管。其中4组制成佐剂性关节炎模型,分别经鞘内给予生理盐水(A组)、吗啡10μg.kg-1(B组)、吗啡20μg.kg-1(C组)、吗啡10μg.kg-1+纳洛酮10μg.kg-1(D组),另外两组非致炎大鼠分别经鞘内给予生理盐水(E组)、吗啡20μg.kg-1(F组)。各组给药均为1日2次,连续7 d。动态检测大鼠50%缩爪阈值,以免疫组化方法检测脊髓背角GLAST表达。结果:B、C两组关节炎大鼠在鞘内给予吗啡第7天形成较稳定的吗啡耐受,其脊髓背角GLAST表达下调。结论:脊髓GLAST可能参与炎性痛大鼠慢性吗啡耐受的形成机制。

谷氨酸/天冬氨酸转运体抗体对豚鼠听性脑干反应及毛细胞形态的影响

目的研究谷氨酸/天冬氨酸转运体(glutamate-aspartate transporter,GLAST)抗体对豚鼠耳蜗听性脑干反应(ABR)和耳蜗毛细胞形态的影响。方法健康豚鼠20只随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组耳蜗鼓阶内灌注GLAST抗体,对照组灌注人工外淋巴液,观察两组术后3、6、9天ABR反应阈、耳蜗基底膜铺片和透射电镜的形态学改变。结果实验组术后第3天ABR波形消失,术后第9天无恢复;对照组术后第3天8只动物ABR波形消失,术后第6天和第9天全部动物引出ABR波形,平均阈值分别为62.50±5.25、47.50±6.18dBSPL,差异有统计学意义(P<0.05)。随着GLAST抗体灌注后时间延长,实验组内、外毛细胞及纤毛出现不同程度缺失,透射电镜显示内、外毛细胞及神经末梢胞浆、线粒体空化,细胞核染色质边集等凋亡早期征象。对照组的损伤较轻,与ABR阈值改变相一致。结论耳蜗内GLAST抗体灌注后出现耳蜗毛细胞、神经末梢的损伤及ABR波形消失,提示GLAST抗体阻断耳蜗Corti器中的GLAST,导致谷氨酸的神经毒性表达。

甘氨酸转运体-1对芬太尼诱导的切口痛觉敏化作用

目的：探讨甘氨酸转运体-1在芬太尼诱导的切口痛觉敏化中的作用和机制。方法：鞘内成功埋管2周后的雄性SD大鼠40只，体重为190。230g，以Brennan法制作动物切VI痛模型，并随机分为4组，NS＋NS（皮下生理盐水＋鞘内生理盐水）组、NS＋Sar（皮下生理盐水＋鞘内肌氨酸）组、Fen＋NS（皮下芬太尼＋鞘内生理盐水）组和Fen＋Sar（皮下芬太尼＋鞘内肌氨酸）组。每组各10只大鼠．通过热辐射刺激和yonFrey机械刺激进行痛行为测定，记录手术前（基础值），术后第1、2、3、4、5、6、7天大鼠的热痛和机械痛阈值，分别作统计学分析。结果：与术前基础值比较，术后第1天4组大鼠痛阈均明显降低，术后每天逐步升高。热痛和机械痛阈值以Fen＋NS组下降最为明显（P〈0．05），NS＋Sar组热痛和机械痛阈值最高，Fen＋Sar组与NS＋NS组（P〉0．05）差别不大。结论：芬太尼加重切口痛大鼠的痛觉敏化，该作用可被甘氨酸转运体-1抑制剂——肌氨酸减轻．提示甘氨酸转运体-1功能变化可能参与了芬太尼痛觉敏化作用机制。

鞘内注射人参皂苷Rg_1对关节炎慢性吗啡耐受大鼠谷氨酸转运体水平的影响

目的探讨鞘内注射不同剂量人参皂苷Rg1对关节炎慢性吗啡耐受大鼠行为学和脊髓背角兴奋性氨基酸转运体1(excitatory amino-acid transporter1,EAAT1)即谷氨酸/天冬氨酸转运体(glutamate-aspar-tate transporter,GLAST)表达的影响,进以探讨人参皂苷Rg1对吗啡耐受影响的机制。方法鞘内置管成功并制成佐剂性关节炎模型的健康雄性SD大鼠36只,随机分为6组(n=6),分别经鞘内给予生理盐水10μL(NS组),吗啡10μg(M组),吗啡10μg加人参皂苷Rg150μg(MG50组)、100μg(MG100组)、200μg(MG200组)和单独人参皂苷Rg1100μg(G100组),鞘内注射生理盐水和吗啡每日2次,不同剂量人参皂苷Rg1每日1次,连续7天。动态检测各组大鼠50%机械缩爪阈值(paw withdrawal threshold,PWT),给药后第7天处死大鼠,取脊髓L3～L5节段,以免疫荧光方法检测大鼠脊髓背角GLAST表达水平。结果 M组在给药后第1、3天PWT显著高于NS组(P<0.05),随着用药天数增加,M组PWT逐渐缩短,到第7天与NS组差异无统计学意义(P>0.05),标志吗啡耐受的形成。MG100组PWT也呈下降趋势,但明显缓于M组(P<0.05)。G100组PWT高于NS组(P<0.05)。与NS组相比,M组脊髓背角GLAST表达下调(P<0.01),与M组比较,MG100组和G100组脊髓背角GLAST表达上调(P<0.05)。结论关节炎大鼠单独应用人参皂苷Rg1有轻微的镇痛作用,鞘内给予人参皂苷Rg1100μg有延缓吗啡耐受形成的作用,其机制可能与上调GLAST表达水平有关。

喹唑酮类甘氨酸转运体1抑制剂的设计、合成及药理活性研究

甘氨酸转运体1(GlyT1)是研究抗精神分裂症药物的靶点。以化合物2,4-二氯-N-{[4-(环丙甲基)-1-(乙磺酰基)哌啶-4-基]甲基}苯甲酰胺(1a,IC50=92.2 nmol/L)为参考,设计并合成了未见文献报道的13个喹唑啉酮类化合物。初步药理活性实验结果表明,所合成的化合物除化合物7e外都具有一定程度的GlyT1抑制活性,其中化合物7j的活性最强,接近阳性对照药1a。

胱氨酸/谷氨酸转运体在幽门螺杆菌感染中的作用

目的通过细胞培养、在体动物与临床病人,确证谷氨酸胱氨酸/谷氨酸转运体（xCT）活性在幽门螺杆菌（Hp）所致的胃黏膜损伤中的作用.方法建立Hp感染C57BL/6小鼠模型,检测胃黏膜损伤和xCT的表达;HpSS1与人胃黏膜上皮细胞GES-1共培养,检测细胞增殖、凋亡、xCT的表达及谷氨酸浓度;检测Hp感染患者胃黏膜xCT的表达及胃液中谷氨酸水平.外源性谷氨酸处理Hp感染的细胞和小鼠后,检测胃黏膜细胞损伤程度.结果Hp可致GES-1细胞凋亡,xCTmRNA和蛋白水表达下调,谷氨酸的释放减少;Hp感染的小鼠胃组织xCT表达显著下调.免疫组化结果也发现Hp阳性患者xCT表达较低.外源性谷氨酸可减弱Hp诱导的胃黏膜损伤.结论Hp通过抑制内源性谷氨酸的释放,诱发胃溃疡;外源性L谷氨酸对阿司匹林诱导的胃黏膜损伤和细胞凋亡有保护作用.

甘氨酸转运体1抑制剂M22对小鼠癫痫认知损害作用的研究

目的观察甘氨酸转运体1抑制剂(M22)对癫痫小鼠认知损害的作用。方法选取40只C57BL/6小鼠腹腔注射戊四氮建立慢性点燃癫痫模型,将其随机分为模型组(20只)和M22组(20只),另选取10只为对照组,腹腔注射生理盐水2周;随后M22组灌胃40 mg/(kg·d)的M22,模型组和对照组灌胃生理盐水,均2周。Morris水迷宫实验评估小鼠学习及记忆功能:逃避潜伏期、目标象限内停留时间占总时间百分比、目标象限内游泳距离占总距离百分比。处死后取脑组织,对海马区进行组织病理学观察,并检测大脑皮层神经元细胞凋亡情况及大脑皮质凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)表达情况。结果M22组和模型组小鼠逃避潜伏期均显著长于对照组(P <0. 05),M22组显著短于模型组(P <0. 05); 3组逃避潜伏期均随时间的延长显著缩短(P <0. 05); M22组和模型组小鼠目标象限内停留时间占总时间百分比、目标象限内停留距离占总距离百分比、大脑皮质Bcl-2蛋白相对表达量均显著低于对照组(P <0. 05),M22组显著高于模型组(P<0. 05);海马组织病理学发现,模型组细胞排列紊乱,结构及轮廓模糊,且出现明显神经细胞空泡样改变; M22组细胞轮廓清晰,少量细胞空泡变性,无明显坏死; M22组和模型组大脑皮质神经元细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白相对表达量显著高于对照组(P <0. 05),M22组显著低于模型组(P <0. 05)。结论 M22可显著改善癫痫小鼠的认知功能损害,其机制可能是通过增强Bcl-2蛋白表达、抑制Bax、Caspase-3蛋白表达,而抑制大脑皮质神经元细胞凋亡。

银杏叶提取物对AD模型小鼠海马谷氨酸转运体GLAST表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对AD模型小鼠海马谷氨酸转运体GLAST表达的影响。方法采用双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)法测定正常对照组、AD模型组、AD+银杏叶提取物低剂量组(30 mg·kg^(-1)·day^(-1))、中剂量组(60 mg·kg^(-1)·d^(-1))、高剂量组(120 mg·kg^(-1)·d^(-1))动物海马中GLAST的变化。结果经银杏叶提取物处理后,模型组动物存活率增加;小鼠海马组织中Aβ_(1-42)阳性沉积明显减少,且高剂量组减少最为明显;AD模型组GLAST阳性表达明显减少(P<0.05);银杏叶提取物处理组小鼠海马区GLAST阳性表达出现增加,银杏叶提取物中剂量组GLAST阳性表达增加最为显著(P<0.05)。结论银杏叶提取物具有缓解Aβ诱导神经毒性的作用,对AD模型小鼠海马中谷氨酸转运体GLAST具有调节和保护作用。

活血通络利水方含药血清在高浓度谷氨酸环境下对Müller细胞谷氨酸-天冬氨酸转运体、谷氨酰胺合成酶蛋白表达及活性的影响

目的研究活血通络利水方含药血清在高浓度谷氨酸(GLU)环境下对Müller细胞谷氨酸-天冬氨酸转运体(GLAST)、谷氨酰胺合成酶(GS)蛋白表达及活性的影响。方法将40只健康SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、银杏叶组、活血通络利水方低剂量组和活血通络利水方高剂量组,每组10只。银杏叶组予银杏叶片水溶剂5.2 mg/kg灌胃,活血通络利水方低剂量组予活血通络利水方合剂20 g/kg灌胃,活血通络利水方高剂量组予活血通络利水方合剂40 g/kg灌胃,正常组予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,每日1次,连续灌胃7 d后,腹主动脉取血后离心收集血清备用。培养Müller细胞,分别用不同浓度的GLU(0、0.1、0.5、1、10、20、25、30 mmol/L)干预24 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测Müller细胞存活率。Müller细胞分为正常组、模型组、银杏叶组、活血通络利水方低剂量组和活血通络利水方高剂量组,正常组和模型组每孔加入正常血清0.5 mL、培养基2 mL,银杏叶组每孔加入银杏叶含药血清0.5 mL、培养基2 mL,活血通络利水方低、高剂量组每孔分别加入活血通络利水方20、40 g/kg含药血清0.5 mL、培养基2 mL。除正常组外,其余4组均加入GLU 25 mmol/L。相同条件下培养24 h后提取总蛋白,采用免疫印迹法(Western Blot)检测各组Müller细胞中GLAST、GS蛋白表达水平;用高效液相色谱法(HPLC)检测各组细胞培养液中GLU含量。结果MTT实验结果显示,GLU干预24 h后,与0 mmol/L浓度GLU比较,10 mmol/L及以下低浓度GLU细胞存活率升高(P<0.05);20、25、30 mmol/L浓度GLU细胞存活率逐渐降低(P<0.05),其中25 mmol/L浓度GLU细胞存活率下降至约0.67。Western Blot检测结果显示,与正常组比较,模型组GLAST、GS蛋白表达水平均降低(P<0.05);与模型组比较,银杏叶组和活血通络利水方低、高剂量组GLAST、GS蛋白表达水平均升高(P<0.05),且活血通络利水方高剂量组的上调高于银杏叶组(P<0.05),与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。高效液相色谱(HPLC)检测结果显示,与模型组比较,银杏叶组和活血通络利水方低、高剂量组的胞外GLU含量均降低(P<0.05);与银杏叶组比较,活血通络利水方低、高剂量组Müller细胞胞外GLU含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在25 mmol/L GLU浓度环境下,活血通络利水方能够上调Müller细胞GLAST、GS蛋白表达和活性,促进细胞摄取胞外GLU,以维持GLU代谢平衡。

NH_4Cl对人肝细胞系LO2氨转运相关蛋白RHCG和AQP8表达的影响

目的检验氯化铵是否能够特异性地刺激肝细胞,使其内部与氨离子转运有关的RHCG和AQP8基因表达发生变化。方法培养人正常肝脏细胞(LO2)、甲状腺癌细胞(TPC-1)、卵巢癌细胞(SKOVR-3)和食管癌细胞(9706),NH4Cl(2.5、5、10、20、40和50 mmol/L)对4种细胞作用24 h后,MTT法检测细胞的增殖;荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测LO2细胞经5、10和20 mmol/L的NH4Cl处理不同时间(6、12和24 h)后,AQP8和RHCG基因及蛋白的表达;10 mmol/L的NH4Cl处理TPC-1、SKOVR-3和9706细胞不同时间(6、12和24 h)后,AQP8和RHCG基因及蛋白的表达。结果随着NH4Cl浓度的增加,氨对肝细胞LO2的增殖抑制率逐渐增加且明显大于其他细胞系;10 mmol/L NH4Cl作用于LO2细胞6 h时,RHCG基因表达量明显下调(P<0.05),而AQP8基因的表达量在作用12 h后较对照组明显增加(P<0.05);10 mmol/L NH4Cl作用于LO2细胞24 h时,AQP8蛋白表达量较对照组显著增加(P<0.0.5),而RHCG无变化;相同浓度NH4Cl作用其他细胞系相同时间时,AQP8和RHCG的基因和蛋白水平均未见显著性变化。结论在氨升高的环境中,人肝细胞通过调节氨转运相关蛋白AQP8和RHCG的量来维持对氨摄取的平衡,减少氨对肝细胞的特异性损伤,在其他细胞系中无此现象。

静注利多卡因抑制甘氨酸转运的研究进展

近年来国内外研究发现静注利多卡因及其代谢产物可抑制甘氨酸的转运,增加脊髓外或血液中的甘氨酸浓度,恢复脊髓突触的抑制作用,从而产生镇痛作用,实现脑保护功能以及改善肥胖和糖尿病患者的糖稳态。本文就静注利多卡因抑制甘氨酸转运的研究进展作一综述。

脑缺血时谷氨酸释放机制

谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质,在脑缺血造成的神经元损伤过程中发挥重要作用。脑缺血时多种机制参与了谷氨酸释放的的调节,如Ca2+依赖性的出胞式释放、谷氨酸转运体调节的释放、水肿诱发的释放和受体调节的释放等。本文根据现有的文献资料,综述了脑缺血时谷氨酸释放机制。

基于生物信息学分析SPNS2对乳腺癌预后、诊断或免疫浸润的影响

目的应用生物信息学方法探讨鞘氨醇-1-磷酸转运体2(sphingosine-1-phosphate transporter 2,SPNS2)在乳腺癌中的表达情况,并分析SPNS2对乳腺癌预后、诊断或免疫浸润的影响。方法癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库检索乳腺癌组织和非乳腺癌样本中的SPNS2 mRNA差异表达数据,并分析SPNS2与乳腺癌之间的关系。用Cox单因素及多因素模型分析SPNS2 mRNA表达对乳腺癌预后的影响。使用Kaplan-Meier曲线评估SPNS2基因的表达与存活率之间的相关性,分析SPNS2对乳腺癌患者生存预后的影响。使用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析SPNS2对乳腺癌的诊断效能。使用肿瘤免疫估算资源(Tumor Immune Estimation Resource,TIMER)数据库分析SPNS2表达与乳腺癌免疫微环境中不同类型免疫细胞的相关性。搜索相互作用基因检索的工具(Search Tool for the Retrieval of Interacting Genes,STRING)数据库分析乳腺癌中SPNS2与相关蛋白质之间的相互作用。分析京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库中得到的差异基因富集的信号通路。提取正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞系RNA,通过RT-qPCR实验比较SPNS2的表达水平。结果在TCGA乳腺癌数据库中,SPNS2在乳腺癌组织中表达水平显著低于癌旁组织(P<0.001),SPNS2 mRNA的表达与T、M分期、病理分期、PAM50分型、年龄和组织学类型等因素相关(P<0.05);Cox分析表明年龄>60岁、T4期、M1期等因素是乳腺癌发生预后不良的风险因素(P<0.01);Kaplan-Meier分析显示低表达SPNS2乳腺癌患者具有更长的疾病特异生存期(disease-specific survival,DSS)和无进展间隔期(progression-free interval,PFI)(P<0.05);ROC曲线提示SPNS2诊断具有较好的敏感性和特异性。TIMER数据库分析显示在Luminal型乳腺癌中,SPNS2与CD4+T细胞,巨噬细胞、中性粒细胞等免疫细胞呈正相关(P<0.05)。STRING和KEGG数据库分析表明SPNS2相关蛋白富集于细胞周期和PPAR信号传导等途径(P<0.05)。RT-qPCR实验结果显示与正常乳腺上皮细胞相比,SPNS2在乳腺癌细胞系中低表达(P<0.001)。结论SPNS2是一种潜在的诊断乳腺癌和评价预后的生物学标志物。