饲料中添加沸石对慢性肾衰犬结肠尿素转运蛋白B及氨转运体蛋白Rh表达的影响

本研究旨在探究沸石对慢性肾衰犬结肠尿素转运蛋白B及氨转运体蛋白Rh表达的影响。选取15条2岁左右的中华田园犬,采用肾动脉结扎制作慢性肾衰(CRF)模型,另取5只犬仅腹壁切开作为假手术对照组(SOG)。造模成功后,随机等分成3组:模型组(MD)、低剂量沸石组(LCD)和高剂量沸石组(HCD),SOG组与MD组饲喂基础饲料,LCD组为1%沸石饲料,HCD为5%沸石饲料,试验连续4周。用自动化血液生化仪检测血清尿素氮(BUN)和粪尿素氮(FUN),用谷氨酸脱氢酶法测定门静脉血氨,用尿素检测试剂盒测定尿尿素量(uUrea),qRT-PCR检测结肠黏膜尿素转运蛋白B(UT-B)、氨转运体蛋白b(Rhbg)与氨转运体蛋白c(Rhcg)mRNA表达,Western blot法检测UT-B、Rhbg与Rhcg的蛋白表达。结果显示,MD组的BUN、FUN及门静脉血氨均高于SOG组,uUrea降低(P<0.01),与MD组比较,HCD组的BUN、FUN、门静脉血氨均显著降低(P<0.05);MD组Rhbg、Rhcg的mRNA表达显著高于SOG组(P<0.05),与MD组比较,HCD组Rhbg、Rhcg及LCD组Rhcg的mRNA表达显著下调(P<0.05),各组间UT-B的mRNA表达无显著变化(P>0.05);MD组Rhbg、Rhcg的蛋白表达显著高于SOG组(P<0.05),与MD组比较,HCD组Rhbg、Rhcg的表达降低,MCD组Rhcg表达降低,差异显著(P<0.05),各组间UT-B表达无差异;Pearson相关性分析发现,慢性肾衰犬BUN水平与Rhcg呈强的正相关(r=0.855,P<0.05),与Rhbg呈中等正相关(r=0.769,P<0.05)。以上结果表明,沸石具有促进CRF犬BUN经肠排泄的作用,与结肠黏膜Rhbg、Rhcg的表达下调有关,以添加5%剂量最佳。

乙型肝炎肝硬化肝气郁结证与5-HTTLPR重复序列、TPH A218C、GNB3 C825T基因多态性相关性分析

目的:通过分子生物学检测,分析乙型肝炎肝硬化肝气郁结证与候选基因多态性的关联。方法:将96例乙型肝炎肝硬化患者辨证分为肝气郁结证组20例、兼肝气郁结证组24例和非肝气郁结证组52例,筛选与人体情绪调节相关的基因位点五羟色胺转运体启动子区(5-HTTLPR)重复序列、色氨酸羟化酶(TPH)A218C、G蛋白β3亚单位(GNB3)C825T位点,观察其基因多态性与肝气郁结证的相关性,为肝气郁结证的基因特征研究提供依据。结果:5-HTTLPR的S等位基因或L等位基因在各组间分布差异均无显著性意义(P>0.05),TPH A218C中肝气郁结证组患者CC基因型占45.00%(9/20)、C等位基因频率占67.50%(27/40),明显高于非肝气郁结证组的14.0%(7/50)和43.00%(43/100),差异有显著性意义(P<0.05或<0.01),而GNB3 C825T中的CC基因型和C等位基因在肝气郁结证组患者中的出现频率分别为15.00%(3/20)、42.50%(17/40),明显低于非肝气郁结证组的44.00%(22/50)和66.00%(66/100),差异有显著性意义(P<0.05)。结论:TPHA218C的CC基因型、C等位基因及GNB3 C825T T等位基因可能是乙型肝炎肝硬化肝气郁结证的易感基因,TPH A218C的A等位基因及GNB3C825T的CC基因型、C等位基因可能是其保护基因;5-HTTLPR基因多态性与该证的发生可能无相关性。

参苓白术散调节AMPK、ABCG2改善高尿酸血症模型小鼠尿酸的实验研究

目的明确参苓白术散调节AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/ATP结合盒转运体G2(ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2)通路降低高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)模型小鼠尿酸(uric acid,UA)的作用机制。方法将36只雄性昆明小鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组4组。空白组除外,其余各组腹腔注射氧嗪酸钾悬液(0.6 g/kg)连续7 d,建立HUA小鼠模型,参苓白术散干预14 d;采用生化法检测血清UA、谷草转氨酶(aspartate aminotransaminase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量,ELISA法检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,CysC)含量,HE染色法观察肝、肾、回肠组织病理变化,Western blot检测回肠组织ABCG2、磷酸化的AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)表达,RT-qPCR检测ABCG2 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组UA、CysC含量均显著升高(P<0.01),p-AMPK、ABCG2蛋白及ABCG2 mRNA含量均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,西药组和中药组UA含量均显著降低(P<0.01),p-AMPK、ABCG2蛋白及ABCG2 mRNA含量均明显升高(P<0.01);中药组CysC含量显著降低(P<0.01)。空白组肾小球大小均匀,结构清晰;模型组肾间质有炎性细胞浸润,上皮细胞轻微脱落;中药组及西药组上皮细胞脱落症状有所改善。空白组回肠组织黏膜皱襞规则,肠绒毛完整、整齐、密集;模型组肠绒毛短小,隐窝深度变浅,肠黏膜上皮细胞损伤;西药组和中药组肠黏膜上皮细胞损伤有所改善。参苓白术散对肝功能及肝组织形态均无明显损伤。结论参苓白术散通过调节HUA小鼠肠组织AMPK磷酸化,升高ABCG2表达,降低血清UA含量以治疗HUA,且无肝功能损伤。