对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株耐药机制的初步探讨

目的 研究对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株的耐药机制.方法 自1例侵袭性曲霉病患者体内分离得到1株烟曲霉,分别利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、泊沙康唑和卡泊芬净对该烟曲霉的最低抑菌浓度（MIC）/最低有效浓度（MEC）;并对该菌株中唑类药物靶酶基因cyp51A进行克隆和序列测定分析.结果 微量液基稀释法显示,该菌株伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B的MIC分别为≥16、8、1mg/L,卡泊芬净的MEC为0.5 mg/L.E-test法显示,伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B和泊沙康唑的MIC分别为≥32、≥32、12和≥32 mg/L,卡泊芬净的MIC为0.047 mg/L.对cyp51A基因进行测序并分析后发现,该菌株的cyp51A序列中存在启动子区-288到-322位间34 bp的串联序列的插入,以及该基因编码区364位碱基的点突变（T364A）,导致了编码区98位亮氨酸的置换（L98H）;该菌株的cyp51A基因编码区还存在137位碱基（A137T）、585位碱基（G585A）、814位碱基（C814A）、836位碱基（G836C）、991位碱基（T991C）、1350位碱基（A1350G）的突变,并分别导致编码区相应氨基酸的置换.结论 分离到对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床株,该菌株的cyp51A基因存在启动子区34 bp的串联序列插入和编码区364位的突变（T364A）,这种变化参与了其对伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑交叉耐药;该菌株cyp51A基因编码区还存在一些其他的点突变,并可导致相应部位的氨基酸置换.