氮蓝四唑光化还原法测定超氧化物歧化酶活性的适宜条件

氮蓝四唑(NBT)光化还原法是测定超氧化物歧化酶(SOD)活性的常见方法。尽管已有不少人对影响NBT光化还原法测定SOD活性的因素进行了研究,如温度、NBT浓度的影响,过氧化物酶的干扰等,但最突出的问题是照光反应时间的差异。本文通过对照光反应时间、粗酶液体积与抑制百分率之间关系的研究,进一步明确NBT光化还原法测定SOD活性的最适条件。

氮蓝四唑光照法评价丹参水溶性成分清除超氧阴离子(O_2^-·)活性

以丹酚酸B为样品,通过对氮蓝四唑光照法评价体系中测定波长,缓冲液pH值、浓度,光照强度及时间等关键因素进行优化筛选,确定丹酚酸类化合物清除O2-.的最佳评价体系,并对丹参中5种水溶性成分进行活性评价。结果表明,最佳测定条件为:测定波长625 nm,磷酸盐缓冲液pH值7.8,缓冲液浓度5 mmol.L-1,光照强度6 000 lx,光照时间30 min,其可靠性好,清除率测定结果的灵敏度较改进前提高20%;丹参5种水溶性成分清除O2-.的能力均随其浓度增加而逐渐增强,线性关系范围内,清除O2-.能力大小依次为:迷迭香酸>丹酚酸A>丹酚酸B>原儿茶醛>紫草酸≈芦丁。

两种检测SOD酶活性方法的比较

目的比较邻苯三酚自氧化法和氮蓝四唑(NBT)光还原法分别测定超氧化物歧化酶(SOD)酶活力的差异。方法采用两种方法分别测定SOD标准品、苜蓿和番茄两种植物提取物的不同来源SOD酶活性,比较其精确性和灵敏度。结果在标准品SOD酶活的测定中,邻苯三酚自氧化法和NBT光还原法测酶活性的变异系数分别为0.84、2.03,而进样量后者是前者的2.6倍,稀释倍数是前者的6倍,邻苯三酚自氧化法的精确度高于NBT光还原法,但灵敏度远不及后者。在测定两种植物SOD时,邻苯三酚自氧化法测得酶活性变异系数是NBT光还原反应测得酶活性变异系数的1.30~1.47倍,NBT光还原法具有稳定性、重现性好的特点,优于邻苯三酚自氧化法。结论 NBT光还原法是测定植物SOD及SOD标准品酶活的理想检测方法。

高糖及高胰岛素对肺泡巨噬细胞吞噬功能和超微结构的影响

目的和方法：选用正常大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ），在高糖及高糖＋高胰岛素环境下培养，用卡介苗（ＢＣＧ）、干扰素ａ－２ｂ（ＩＦＮα－２ｂ）或两者联合活化，检测其贴壁率、四唑氮兰（ＮＢＴ）还原功能、ＮＯ和ＴＮＦ－α释放量并观察其超微结构改变。结果：高糖及高糖＋高胰岛素环境下活化ＡＭ贴壁延迟（Ｐ＜０．０１），ＮＢＴ还原功能明显被抑制（Ｐ＜０．０１）；ＢＣＧ和ＩＦＮα－２ｂ＋ＢＣＧ活化ＡＭ时，其ＮＯ和ＴＮＦα释放量均明显低于对照组（Ｐ＜０．０１）；ＩＦＮα－２ｂ活化ＡＭ时，其ＮＯ和ＴＮＦ－α释放量与对照组无明显差别（Ｐ＞０．０５）；细胞表面伪足减少、变短，胞质内高尔基氏体、粗面内质网减少。结论：在短期内高糖及高糖＋高胰岛素环境均抑制ＡＭ吞噬功能及改变超微结构，从而使糖尿病个体易发生肺部感染。

几种虫草无性型及其相关真菌SOD比较研究

采用氮蓝四唑光照法比较了几种虫草无性型及其相关真菌的SOD酶比活力及粗酶含量，同时应用聚丙烯酰胺凝肢电泳法进行了活性显示。结果表明，不同菌种，SOD酶谱差别较大，而分离自冬虫夏草的HS系列菌株和虫草簇孢SIN-1菌株图谱较接近；蝉拟青霉（PC-1）干重的SOD酶比活力最高，达874．3U·g^-1，其次是细脚拟青霉（PT-1）干重的为537．6U·g^-1，HS-1菌株干重的SOD酶比活力为466．9U·g^-1。供试菌株的粗酶含量占干重的百分比在0．73％～2．50％之间。综合酶比活力和含量考虑，蝉拟青霉和HS-1菌株在抗氧化方面具有较好的开发应用前景。

纳米复合树脂(Filtek Z350)对人牙髓细胞的毒性

目的比较纳米复合树脂(Filtek Z350)与临床常用修复材料(Dyract-AP复合体、TPH复合树脂)的细胞毒性。方法原代培养人牙髓细胞(HPC),MTT比色法测定3种材料对HPC增殖的影响,扫描电镜观察HPC在材料表面生长情况。结果25%FiltekZ350细胞毒性为0级,小于Dyract-AP和TPH(P<0.05)。扫描电镜观察HPC在3种材料表面均可贴附生长。结论3种牙体修复材料对HPC的生长、增殖、贴附无不良影响,均具良好的生物相容性。FiltekZ350的细胞毒性小于Dyract-AP及TPH。

p21基因转染人胃癌细胞对化疗药物敏感性的影响

目的:探讨p21基因转染人胃癌细胞系(BGC)对化疗药物的敏感性。方法:应用MTT摄入方法测定5-氟尿嘧啶、阿霉素、长春新碱、环磷酰胺、平阳霉素和替尼泊甙对p21基因转染人胃癌细胞增殖抑制作用,并进行72 h观察。结果:p21基因转染人胃癌细胞对5-氟尿嘧啶最敏感,72 h抑制率为77.9%;其次为阿霉素、长春新碱、环磷酰胺、平阳霉素和替尼泊甙,其抑制率分别为62.7%、61.1%、59.3%、58.2%及45.9%。其敏感性与对照组相比差异有显著性(P<0.05),随时间延长而逐渐增加。结论:用MTT法检测p21基因转染人胃癌细胞对化疗药物敏感性的实验,即可以针对性指导临床对肿瘤敏感性化疗药物的选用,又可避免盲目用药而产生对机体免疫细胞的毒性作用。p21基因可提高对5-氟尿嘧啶的敏感性。

胶原蛋白多肽-铬(Ⅲ)螯合物对小鼠肝脏SOD表达的影响

用不同浓度的丙酮对小鼠肝脏蛋白进行分级提取沉淀,用SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳实验寻找正常组和胶铬组的差异表达蛋白质,进而通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测差异蛋白的肽质量指纹,对差异蛋白进行鉴定。通过无SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳试验检测正常组和胶铬组肝脏的超氧化物歧化酶(SOD)活力,研究胶原蛋白多肽-铬(Ⅲ)螯合物对小鼠肝脏蛋白质表达的影响,探讨其抗氧化的机理,证明胶原蛋白多肽-铬(Ⅲ)螯合物可以显著提高小鼠肝脏内SOD的表达。

高压芒刺静电场对体外培养小鼠Lewis肺癌细胞的生物效应

目的 :探讨高压芒刺静电场对小鼠 L ewis肺癌细胞的作用情况及肿瘤细胞的药物敏感性变化。方法 :采用 MTT法检测体外培养的小鼠 L ewis肺癌细胞单纯电场辐照组、单纯卡铂作用组、电场和卡铂联合作用组及对照组的 A值 ,根据细胞相对死亡率判断细胞活性。结果 :单纯电场作用组与对照组相比 ,电压≤ 1.5 k V时 ,刺激细胞生长 ,当电压 1.5 k V时 ,细胞活性提高至 132 .7% (P<0 .0 5 ) ;而电压 >1.5 k V时 ,抑制细胞生长 ;2 .5 k V时抑制效果最佳 ,细胞活性仅为对照组的 71.7% (P<0 .0 5 )。电场和卡铂联合作用组与对照组和单纯卡铂作用组相比 ,能更有效地抑制小鼠 L ewis肺癌细胞生长 ,细胞活性是对照组的 5 7.8% (P<0 .0 1)。结论 :高压芒刺静电场对肿瘤细胞有直接的抑制作用 ,同时不同程度地提高肿瘤细胞对某些化疗药物的敏感性。

GPR30在子宫平滑肌瘤细胞增殖中的作用研究

目的探讨跨膜G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor30,GPR30)在子宫平滑肌瘤细胞中的表达及其对肌瘤中平滑肌细胞的增殖作用。方法培养子宫平滑肌瘤原代细胞,应用免疫组织化学、免疫荧光及蛋白质印迹法检测GPR30的表达。应用蛋白印迹检测GPR30干扰后,其下游信号通路的变化。应用MTT检测在雌激素刺激下,正常子宫平滑肌细胞及平滑肌瘤细胞的生长活性。结果子宫平滑肌瘤细胞中有GPR30蛋白的高表达,其主要位于细胞质中,在细胞核上无明显表达。在未处理组平滑肌细胞中,雌激素刺激雌激素信号通路中的ERK1/2表达增强。在GPR30干扰后的平滑肌细胞中,雌激素刺激后ERK1/2表达无显著改变。MTT结果表明在雌激素作用下,未处理组细胞存活和生长率显著增加;干扰组细胞的存活和生长率显著下降。结论 GPR30在子宫肌瘤平滑肌细胞的细胞质中高表达,可能参与子宫平滑肌细胞的增殖。

MTT法检测干扰素-γ对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制效应

目的 :探讨重组人IFN γ对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法 :用组织块培养法和混合消化液培养法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞。采用MTT法检测不同浓度的重组人IFN γ对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用。结果 :用上述两种方法成功培养出正常人眼Tenon囊成纤维细胞。重组人IFN γ对人眼Tenon囊成纤维细胞具有抑制作用 ,1× 10～ 1× 10 6IU/mlIFN γ浓度范围的抑制率为 2 0 2 %～43 5 % ,1× 10 6UI/mlIFN γ作用 48h后 ,与对照组相比 ,细胞数量明显减少 ,细胞皱缩 ,但未见细胞死亡或漂浮。结论 :IFN γ对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用。

甘氨酸-钼锗酸盐的体外抑瘤效应

目的 :观察甘氨酸 -钼锗酸盐体外抑瘤效应及毒性作用。方法 :采用氮蓝四唑 ( MTT)掺入法检测甘氨酸 -钼锗酸盐 ( 6.2 5～ 2 0 0 mg· L-1 )对 H740 2、B1 6、BGC- 82 3和 MGC- 80 3肿瘤细胞株增殖的影响 ,对 FL、L92 9正常细胞株生长的影响及对小鼠脾细胞增殖的影响。结果 :一定浓度的甘氨酸 -钼锗酸盐对 H740 2、B1 6、BGC- 82 3和 MGC- 80 3肿瘤细胞株有显著的抑瘤效应 ( P<0 .0 5 ) ;对FL及 L92 9细胞株无毒性作用 ;对小鼠脾细胞有显著的促增殖作用 ( P<0 .0 5 )。结论 :甘氨酸

不同氧环境对滋养细胞增殖活力的影响

目的：建立不同氧环境的滋养细胞模型，探索氧含量变化对滋养细胞增殖活性的影响。方法：随机选择妊娠8～10周人工流产的健康妇女20例，通过滋养细胞的原代培养后分为正常组、缺氧组及缺氧后复氧组进行处理。以氮蓝四唑盐（MTT）自动化比色法测定以上各组滋养细胞的增殖能力水平。结果：①本研究发现缺氧组滋养细胞1、4h至48h时段与正常组、缺氧后复氧组相比差异均有统计学意义（P〈0．01）。72h缺氧组滋养细胞数值虽稍高于正常组，但相比差异无统计学意义（P〉0．05）；②缺氧后复氧组和单纯缺氧组两两相比差异有统计学意义（P〈0．05）。另外，缺氧后复氧组滋养细胞的增殖力于初期（1～4h）与正常组相比差异无统计学意义（P2〉0．05），但在12～72h均低于正常组滋养细胞的增殖活力（P〈0．05）。结论：①缺氧初期可导致滋养细胞增殖活力增强，后期缺氧细胞的增殖活力与正常氧下滋养细胞相比无区别；②缺氧后复氧环境下滋养细胞增殖能力低于缺氧滋养细胞。其增殖活力在12h后低于常压氧下滋养细胞。

用MTT法进行白血病体外药物敏感性检测的临床意义

目的探讨使用MTT比色法进行白血病体外药物敏感性检测的可行性,为MTT法作为肿瘤药敏检测技术应用于临床提供理论依据。方法采用MTT比色法测定47例血液病患者外周血和骨髓白血病细胞对14种临床常用化疗药物的敏感性,并与化疗药物的实际疗效作对照。结果47例患者中,体外敏感/体内敏感(S/S)30例、体外敏感/体内耐药(S/R)7例、体外耐药/体内耐药(R/R)9例、体外耐药/体内敏感(R/S)例;体外药敏与体内疗效的总符合率为82.98%,阳性符合率为81.09%,阴性符合率90%。敏感度96.77%,特异度56.25%。结论采用MTT法预测化疗药物的敏感性,临床相关性好。

鲜枣果实中超氧化物歧化酶的测定及含量的分析

用氮蓝四唑(NBT)法测定了陕西省延川县5个村镇25个品种27个样品鲜枣果实中超氧化物歧化酶(SOD)的催化活性,并以此表示酶含量。结果表明:所测的27个样品鲜枣中,冯家塬圪垯枣的SOD酶活性值最高,达2.656 4 U/g,庄头麻子枣的SOD酶活性值最低,仅0.221 2 U/g。不同品种的枣果实中SOD酶活性明显不同,不同枣品种间SOD酶的差异显著性也不尽相同,这与其遗传特性及所生存的环境等因素有关。

甲胺磷金属配合物对水稻幼苗SOD酶活力影响的研究

研究了甲胺磷金属Cu(Ⅱ )、Zn(Ⅱ )、Ni(Ⅱ )配合物对水稻幼苗SOD酶活性的变化。当配合物浓度大于 1 0×10 -6mol·L-1时 ,对水稻幼苗SOD酶活力具有抑制作用 ;当配合物浓度小于 1 0× 10 -7mol·L-1时 。

活性污泥中超氧化物歧化酶(SOD)活性测定影响因素

研究以污水生物处理中的活性污泥为对象,采用氮蓝四唑光还原法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,从样品制备和保存方面探讨了是否添加溶菌酶液、细胞破碎时间、酶液保存时间与保存温度等因素对SOD活性测定的影响。研究表明,溶菌酶液的加入提高了细胞破碎效果;细胞破碎的条件为99次(工作3 s,停3 s),时间为40 min时破碎效果最好;酶液保存时间在4 h内最佳;-20℃保存比4℃保存对酶活性影响小。最佳检测条件为:取样量为1 mL时,反应温度为30℃,反应时间为20 min时,SOD酶活性最大。

siRNA-ID-1对人肝癌细胞HepG2中ERK信号通路的影响

目的观察si RNA-ID-1转染人肝癌细胞HepG2细胞后对肝癌细胞系HepG2细胞增殖的影响及其对ERK1/2通路的作用。方法实验分为4组,即空白对照组、转染试剂组、转染对照组及转染si RNA-ID-1组。阳离子脂质体法介导si-ID-1转染肝癌细胞后,唑蓝比色法(MTT)观察HepG2细胞增殖情况。分别用反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测转染后p-ERK1/2、ERK1/2 mRNA与蛋白表达的情况。结果转染si RNA-ID-1的HepG2细胞增殖速度明显减慢(P<0.01)。转染后ERK1/2及p-ERK1/2 mRNA表达降低(P<0.01);p-ERK1/2蛋白的表达较空白对照组明显降低(P<0.05),ERK1/2蛋白表达空白变化不明显。结论si RNA-ID-1转染HepG2细胞后可明显抑制细胞的增殖,使得ERK1/2基因表达活性下降,提示ID-1有可能通过ERK1/2信号转导通路介导,促进肝细胞癌HepG2细胞的增殖。

NBT还原法测定动物组织和红细胞中SOD活力的方法学研究

对 NBT 还原法测定动物组织样品和红细胞中 SOD 活力的方法进行了研究.总结了用乙醇-氯仿混合液制备肝、脑、心肌及红细胞 SOD 提取液和测定其活力的适当条件,简化了制备红细胞 SOD 提取液的手续,减少了可能出现的误差.该方法具有简便、快速和稳定等优点.

4种蔬菜中SOD活性测定研究

利用氮蓝四唑(NBT)光化还原法来测定4种蔬菜中SOD活性的大小。蔬菜中SOD通过抑制超氧阴离子的形成,以防止体内自由基的损伤,从而保护生物体自身。试验结果表明,SOD起着歧化O2-为H2O2和O2的作用,CAT分解H2O2生成H2O和O2,从而减少了过氧化物的生成,以苔菜的SOD总活性最大,而菠菜、生菜、茼蒿3种蔬菜的SOD总活性值相关不大。