显色基质法检测板蓝根氯仿提取物的抗内毒素作用

显色基质法检测板蓝根氯仿提取物的抗内毒素作用武汉同济医科大学附属同济医院，武汉４３００３０刘云海，刘军民，申正义，魏镜龙，宋佩辉关键词板蓝根；氯仿提取物；内毒素；显色基质法中图法分类号Ｒ２８７．６，Ｒ９９６实验证实，板蓝根及其注射液有抗大肠杆菌Ｑ１１...

酚/氯仿法和盐析法提取人类外周血基因组DNA方法的比较

目的比较两种不同方法提取的基因组DNA的纯度、产量和后续实验效果。方法采用酚/氯仿法和盐析法两种方法直接从全血中提取基因组DNA,并采用电泳、PCR和基质支持的激光释放/电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)方法进行检测。结果酚/氯仿法提取的基因组DNA纯度高于盐析法(P<0.001),但两组纯度平均值都高于1.80;没有发现两种方法提取的DNA浓度存在差异(P=0.819)。两组DNA在电泳中都没有出现明显拖尾现象,均很容易扩增出胰岛素诱导基因2片段,并且在MALDI-TOF MS检测中,两组DNA样本结果没有明显差异。结论酚/氯仿法和盐析法提取的基因组DNA质量无明显差异。相比酚/氯仿法,盐析法能简便、快速、无毒地进行DNA提取,适合于大规模的分子生物学实验。

运用酚-氯仿法结合磁珠法提取蝇蛆体内人类DNA

目的建立运用酚-氯仿法结合磁珠法从蝇蛆嗉囊内提取人类DNA的方法,从而提高STR分型检验的灵敏度。方法采用酚-氯仿法对蝇蛆嗉囊内容物中的人类DNA进行提取,提取产物经磁珠法纯化浓缩后用QuantifilerTM人类DNA定量试剂盒在7500型实时荧光定量PCR仪上进行PCR定量,再用AmpF■STR IndentifilerTM试剂盒在3130XL-Avant遗传分析仪上对这些DNA样本进行STR分型。结果本研究建立的方法可增加模板DNA浓度约为单独使用酚-氯仿法的2倍。用此方法提取到的DNA浓度[(0.218±0.041)ng/μL]可获得全部16个STR分型结果。结论酚-氯仿法结合磁珠法可以有效地提高提取到的人类DNA样本STR分型检验的灵敏度,对于从事法医昆虫学方面研究的工作者有较好的实用价值。

饱和苯酚-氯仿抽提法与Chelex-100树脂法提取DNA在研究犬STR基因座多态性中的应用比较

在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果。尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检测效果较饱和苯酚-氯仿抽提法差,但Chelex-100树脂提取法更为简单快捷,适合在建立警犬STR基因座等位基因数据库中和犬亲缘关系鉴定中广泛使用。

Chelex-100法及酚氯仿法提取阴道毛滴虫DNA的比较

目的 -比较Chelex 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA。方法 -分别用Chelex - 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA ,用PCR法检测DNA提取的有效性。结果 -两种方法提取的DNA经PCR扩增均有特定的条带。结论 -两种方法均能提取阴道毛滴虫DNA。Chelex 10 0方法简便、省时 。

用改良的盐洗法与酚-氯仿法提取基因组DNA效果比较

目的 :探索更为安全可靠的基因组DNA提取方法。方法 :采用改良盐洗法提取人外周血白细胞基因组DNA ,与传统的酚 氯仿抽提法在提取效果、DNA纯度等方面加以比较。结果 :通过对 1 5份不同静脉血标本与酚 氯仿抽提法同步对比研究显示 :改良盐洗法提取模板DNA无污染、无害 ,所提DNA质量好、纯度高 ,达到酚 氯仿抽提法所获DNA的水平 ;操作简单、快速 ,方法稳定可靠 ,无一例失败。结论

甲醇-氯仿提取革胡子鲶下脚料中的磷脂酰胆碱

利用实验室现有条件,根据磷脂酰胆碱易溶于甲醇、乙醇等低碳醇、乙醚和氯仿,不溶于丙酮、乙酸乙脂的原理,用有机溶剂提取革胡子鲶下脚料中的磷脂酰胆碱。通过单因素实验得到:甲醇-氯仿为提取的最佳溶剂。通过正交实验,研究了提取温度、提取时间、液料比、甲醇浓度等因素对磷脂酰胆碱提取率的影响,其影响因素主次顺序为:料液比>提取温度>甲醇的浓度>提取时间,最佳工艺为:提取温度40℃,提取时间30 min,料液比1∶3,甲醇浓度为95%。

核酸提取方法对丙型肝炎病毒检验结果的影响分析

目的分析核酸提取方法对丙型肝炎病毒检验结果的影响。方法:以丙型肝炎病毒患者80例为研究对象,研究时间为2019年2月-2020年2月,分为参照组40例与研究组40例,参照组实施氯仿异丙醇核酸提取法,研究组实施固相吸附核酸提取法,均使用荧光定量PCR术检测,对比检验结果。结果研究组检验阳性率明显高于参照组,P<0.05,差异有统计学意义。研究组在50g/L血红蛋白水平中抗干扰能力高于参照组,P<0.05,差异有统计学意义。所有患者均无明显不良反应。结论丙型肝炎病毒使用固相吸附核酸提取法开展荧光定量PCR检验,有效检出疾病,且抗干扰能力强,可广泛应用于临床。

两种核酸提取方法对HCV-RNA检验结果的影响

目的:讨论固相吸附法和氯仿-异丙醇核酸提取方法对丙型肝炎病毒-RNA检验结果的影响。方法:选取106例丙型肝炎患者,随机分为实验组和对照组两组,采集所有患者血液,分离血清。实验组的53例患者,采用固相吸附法提取血清中的核酸。对照组的53例患者,采用氯仿-异丙醇法提取血清中的核酸。提取后的核酸,应用荧光定量PCR技术检测丙型肝炎病毒-RNA的含量,比较两种提取方法对丙型肝炎病毒-RNA检验结果的灵敏度、抗干扰能力和阳性率。结果:经研究比较发现:1对照组血清采用氯仿-异丙醇法提取核酸,稀释1×104倍后,荧光定量PCR可以检测,继续稀释则无法检测。实验组按照固相吸附法提取核酸,稀释1×105倍后,荧光定量PCR可以检测,继续稀释则低于检测限。2对照组核酸荧光定量PCR检测后,阳性35例,阳性率66.04%。实验组检测后阳性44例,阳性率83.02%。两组结果比较P<0.05,有显著性差异。3当血红蛋白浓度为5g/L时,两组抗干扰能力差别不大,P>0.05。当血红蛋白浓度为50g/L时,两组结果比较P<0.05。结论:与氯仿-异丙醇核酸提取方法相比,固相吸附法提取的丙型肝炎病毒-RNA灵敏度、阳性率更高,抗溶血干扰能力更好,具有一定优势。

荧光定量PCR检测HCV核酸提取法临床价值分析

目的使用RQ-PCR比较氯仿-异丙醇法和核酸分离柱法提取HCVRNA的临床价值。方法分别用两种核酸提取法提取相同患者的HCVRNA后,采用RQ-PCR技术检测HCVRNA含量,对两种方法的提取效率和重复性进行对比。结果两种方法均能较好地提取RNA,且提取效率相近(P>0.05),但是核酸分离柱法在重复性上更加优于氯仿-异丙醇法。结论两种方法均可被临床采纳,但是核酸分离柱法重复性更高,且毒性低,值得推广。

核酸提取方法的改进

实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）广泛应用于RNA病毒的核酸检测,而前期的RNA提取效率高低直接影响到检测效率,以往病毒RNA提取主要采用异硫氰酸胍-酚-氯仿及TRIzol法[1-3]等,但操作步骤都较繁琐,且易造成污染而出现假阳性。

DNA提取方法的比较及改良

用于处理 DNA检材以分离和提取 DNA的方法很多.不同的方法有不同的优缺点,其适用的分析技术也不同 [1～ 5].在法医检案的实际应用过程中经常会遇到不少的问题,如微量检材的 DNA提取,既要纯度高,又要回收率高;常用的几种方法单独进行时则很难达到这样的要求.本文就几种常用的方法进行了改良及它们效果比较.

四种全血基因组DNA提取方法的比较

为比较酚 氯仿抽提法、经典Miller盐析法、改进的Miller盐析法及胍盐酸法提取人全血基因组DNA的方法 ,分别测定所获DNA的效率和纯度。结果发现四种方法提取的DNA纯度分别为 1.6 2± 0 .2 6、1.5 8± 0 .2 8、1.6 1± 0 .2 8、1.5 6± 0 .2 7,各组间差异无显著性 ;5mL全血所提DNA总量分别为 6 4 .0± 33.0 μg、30 .3± 2 6 .9μg、11.1± 9.2μg和 6 5 .2± 2 4 .0 μg。酚 氯仿法和胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其他两种方法。四种方法提取DNA的纯度相似 ,酚 氯仿法和胍盐酸法的提取效率高 ,胍盐酸法和盐析法的操作较简单、安全。胍盐酸法相对简单快速、安全、效率高 。

快速提取细菌DNA方法的研究

目的:研究快速、有效可以应用于压电基因传感器对病原微生物的快速检测的DNA的提取方法。方法:采用沸水浴法,酚、氯仿法,chelex1 0 0法和试剂盒法提取金黄色葡萄球菌ATCC2 5 92 3、铜绿假单胞菌ATCC 2 785 3和大肠杆菌ATCC 2 5 92 2的DNA对产物进行纯度和产量测定,并对1 6SrDNA区域利用通用引物进行扩增。初步应用自行研制的压电基因传感器检测金黄色葡萄球菌ATCC2 5 92 3的PCR产物。结果:除沸水浴法,其他3种方法均能抽提出3种细菌的DNA与1 0 0法和酚、氯仿法抽提产物的纯度和产量差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,但chelex1 0 0法操作更为简单、成本低;试剂盒法抽提出的产物纯度和产量明显高于酚、氯仿法、chelex1 0 0法P <0 . 0 5 ) ,但成本高,操作繁琐。结论:chelex1 0 0法操作简便、省时、成本低,适宜用于压电传感器样本的预处理。

两种提取枝角类休眠卵基因组DNA方法的比较

休眠卵是枝角类在环境胁迫条件下通过有性生殖形成的,休眠卵的孵化对种群补充与恢复有着重要作用.沉积于底泥中的休眠卵保存了不同阶段的种群遗传信息,有效地提取枝角类休眠卵基因组DNA是进一步研究水体枝角类遗传多样性的关键环节.采用目前国际上使用的氯仿异戊醇提取法和玻璃乳提取法分别对流溪河水库底泥中表层和底层的盔型溞(Daphnia galeata)休眠卵进行基因组DNA提取的比较分析.结果显示,氯仿异戊醇提取法成功率为27.5%,平均浓度为14.25±1.84 ng/μl;玻璃乳提取法成功率为65.0%,平均浓度为28.37±2.56 ng/μl.无论是提取成功率还是提取浓度玻璃乳提取法都显著高于氯仿异戊醇提取法,且玻璃乳提取法所用试剂少,不涉及有毒试剂,操作步骤简单,整个提取过程所用时间短,玻璃乳提取法提取枝角类休眠卵基因组DNA是一种快捷实用的方法.

不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹DNA提取效果的比较研究

为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃>肌肉>刚毛>血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求。综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用。

不同方法提取鳗鲡病原菌DNA模板的差异分析

利用吸光值、琼脂糖电泳及PCR差异扩增等指标,对酚-氯仿法、水煮法、碱裂解法3种方法制备的鳗鲡病原菌DNA模板进行了差异分析.结果表明:1)不同方法提取的病原菌模板DNA的浓度、纯度及分子质量大小存在差异,但以这3种方法提取的病原菌DNA为模板,均能成功扩增到细菌16S rD-NA和外膜蛋白的保守序列.其中,酚-氯仿提取的模板DNA浓度较低、纯度较高;水煮法和碱裂解法提取的模板DNA浓度较高、纯度较低.2)电泳显示,3种方法获得的模板DNA扩增出的16S rDNA保守序列条带均一,没有显著差异,但在外膜蛋白保守序列的扩增中却因菌种和模板提取方法的不同而存在差异.

一种从鱼类肌肉组织中提取基因组DNA的简易方法

以泰山螭霖鱼、黄河鲤鱼、东平湖鲫鱼为材料,采用改进的酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取基因组DNA,并对其进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明,本方法提取的鱼类基因组DNA浓度为0.9～3.25μg/μL,D260nm/D280nm值为1.79～1.87,电泳条带整齐明亮,适合微卫星PCR扩增。因此,本方法能够从鱼类肌肉组织中获得较为纯净的基因组DNA,适于进一步的分子生物学研究之用。

三种提取苹果绵蚜基因组DNA方法的比较

参考国内外昆虫基因组DNA提取的常用方法,选取KAc法、氯仿-异戊醇法和盐析法3种方法对苹果绵蚜(Eriosomalanigerum)基因组DNA进行提取。通过基因组DNA直接琼脂糖凝胶电泳、SSR引物扩增产物的琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,对3种方法所提基因组DNA的质量进行了比较,并综合分析了提取所需时间及所用试剂的毒性大小等。结果表明,盐析法操作程序较简便快捷,节时省工,可得较好质量的DNA样本,且对试验操作人员无伤害,是一种值得推广应用的基因组DNA提取方法。

几种海水经济贝类DNA提取方法探讨

以缢蛏、美人蛏、文蛤、扇贝和鲍鱼等几种经济贝类为研究对象,分别用苯酚／氯仿／异戊醇法,CTAB法,SDS法等不同方法提取其基因组DNA,寻找适宜于研究对象基因组DNA提取的方法,结果表明,3种方法均可以从目标材料中提取到DNA,但苯酚／氯仿／异戊醇法无论从数量和质量上都不理想,而SDS和CTAB可根据具体情况选择使用。即对纯度要求不高时均可选用SDS 法,但为了分子生物学研究的应用,需要较高纯度,则缢蛏、美人蛏、文蛤和扇贝等瓣腮纲贝类推荐用SDS法,而鲍鱼等腹足纲贝类推荐用CTAB法。