饱和苯酚-氯仿抽提法与Chelex-100树脂法提取DNA在研究犬STR基因座多态性中的应用比较

在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果。尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检测效果较饱和苯酚-氯仿抽提法差,但Chelex-100树脂提取法更为简单快捷,适合在建立警犬STR基因座等位基因数据库中和犬亲缘关系鉴定中广泛使用。

酚/氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA

[目的]对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚/氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。[结果]提取的DNA浓度为(159.90±0.70)ng/μl,A260/A280比值为1.80±0.01,分子完整,结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板,对绵羊BM203微卫星位点进行了PCR扩增,扩增效果良好。[结论]该方法简单、实用,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得推广借鉴。

酚/氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA(摘要)(英文)

[目的]对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚/氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。用NanoDrop ND-1000微型分光光度计检测DNA浓度和纯度。用0.8%琼脂糖凝胶电泳检验基因组DNA的完整性。以绵羊微卫星位点BM203为扩增位点,分别以F:5′-GGGTGTGACATTTTGTTCCC-3′,R:5′-CTGCTCGCCACTAGTCCTTC-3′为上下游引物,进行PCR扩增试验。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。[结果]提取的DNA浓度为(159.90±0.70)ng/μl,A260/A280比值为1.80±0.01,分子完整,结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板,对绵羊BM203微卫星位点进行了PCR扩增,扩增产物条带整齐、明亮、特导性强,扩增效果好。[结论]该方法简单、实用,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得推广借鉴。

利用白细胞沉淀-酚-氯仿抽提法提取绵羊血液DNA

以湖羊冷冻全血为材料,利用白细胞沉淀-酚-氯仿抽提法提取DNA。结果表明,利用该方法提取的DNA纯度高,产量在正常范围内,PCR扩增效果良好,可以用于分子遗传学试验。

苯酚/氯仿抽提法提取牛血与鸡血DNA部分条件的比较研究

为了探讨苯酚/氯仿抽提法中加入血液和红细胞裂解液（PBS）的量对DNA提取效果的影响以及找到针对牛血和鸡血最合适的DNA提取条件,试验以安格斯牛和静原鸡为研究对象,采用苯酚/氯仿抽提法提取血液基因组DNA。结果表明：在试验第1步加入200μL鸡血1次,用1 500μL PBS重复裂解2次,可以得到高质量鸡的基因组DNA。当加入鸡血的量过大时,提取的DNA浓度过高且不纯,蛋白质等外源核酸的污染较严重。在试验第1步加入500μL牛血1次,用1 500μL PBS裂解,重复2次,可以得到高质量牛的基因组DNA。苯酚/氯仿抽提法可以节省时间,还可以避免血液的浪费。

虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)基因组不同提取方法的比较

为探寻最佳EHP基因组提取方法,本研究采用传统酚/氯仿抽提法、改良酚/氯仿抽提法、几丁质酶法、商品化海洋动物DNA提取试剂盒及商品化植物DNA提取试剂盒共5种方法分别对等量的EHP进行基因组提取。提取的基因组浓度由高到低依次为:商品化海洋动物DNA提取试剂盒(18.825 ng/µL) > 几丁质酶法(17.17 ng/µL) > 改良酚/氯仿抽提法(15.06 ng/µL) > 传统酚/氯仿抽提法(10.8 ng/µL) > 商品化植物DNA提取试剂盒(2.175 ng/µL);提取的基因组完整性由高到低依次为:商品化海洋动物DNA提取试剂盒 > 改良酚/氯仿抽提法 > 商品化植物DNA提取试剂盒 > 传统酚/氯仿抽提法 > 几丁质酶法。由上述结论可知,采用商品化海洋动物DNA提取试剂盒提取的EHP基因组浓度最高,且完整性最好,是5种方法中最佳的提取方法。

四种全血基因组DNA提取方法的比较

为比较酚 氯仿抽提法、经典Miller盐析法、改进的Miller盐析法及胍盐酸法提取人全血基因组DNA的方法 ,分别测定所获DNA的效率和纯度。结果发现四种方法提取的DNA纯度分别为 1.6 2± 0 .2 6、1.5 8± 0 .2 8、1.6 1± 0 .2 8、1.5 6± 0 .2 7,各组间差异无显著性 ;5mL全血所提DNA总量分别为 6 4 .0± 33.0 μg、30 .3± 2 6 .9μg、11.1± 9.2μg和 6 5 .2± 2 4 .0 μg。酚 氯仿法和胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其他两种方法。四种方法提取DNA的纯度相似 ,酚 氯仿法和胍盐酸法的提取效率高 ,胍盐酸法和盐析法的操作较简单、安全。胍盐酸法相对简单快速、安全、效率高 。

快速提取肠道微生物基因组DNA的方法

目的:肠道微生物的研究日益成为热点,如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本文通过对酚/氯仿法提取总DNA过程进行考察和优化,建立一种简便酚/氯仿抽提法。方法:考察和优化酚/氯仿法提取总DNA的过程,并根据DNA产量、纯度以及ERIC-PCR及16S rNDA-RFLP所反映的微生物群落结构特性的指标,并与QIAamp?DNA Stool Mini Kit提取的进行比较,评价了所建立的快速提取方法。结果:用简便酚/氯仿法得到基本完整的基因组DNA,ERIC-PCR和16S rDNA-RFLP结果与QIAamp?DNA Stool Mini Kit法基本相同。结论:该方法快速并成本低,适合肠道微生物研究中总DNA提取,尤其适合处理大批量的样品。

藏酋猴毛干DNA的3种提取方法

为寻求一种从藏酋猴毛干中提取总DNA的有效方法,从一藏酋猴个体背部剪取数量不等的毛干样品(不含毛囊),经蛋白酶K消化后,分别采用高盐沉淀抽提法、酚氯仿抽提法、纳米磁珠抽提法分离获得用于PCR扩增的模板DNA,通过紫外分光光度计测定OD值并计算出质量浓度,同时进行琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测,分析3种方法提取藏酋猴毛干DNA的质量差异。每处理设置10个重复。结果表明,纳米磁珠法提取藏酋猴毛干中DNA是一种快捷、简便、经济、高效、安全的有效方法;进行毛发取样时以5～10根较为合适。

利用不同方法从深加工牦牛肉产品中提取基因组DNA效果的比较

为了从深加工牦牛肉产品中获得片段较大、数量较多的基因组DNA,以用于分子追溯的检测,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法的提取效果。通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段,对利用3种方法提取的基因组DNA的数量和质量进行了比较。结果显示,利用酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA质量不佳,异硫氰酸胍法和试剂盒提取法的提取效果相当,PCR可以扩增出730 bp左右的核外基因细胞色素b,而核内基因只能扩增出300bp左右的核基因DNA片段(内乳铁蛋白基因,271 bp;BoLA-DRB3基因,302 bp)。综合考虑提取时间、费用、数量和质量等各方面的因素,认为异硫氰酸胍法操作简便、快速、廉价、有效,是较好的从动物深加工肉产品中提取基因组DNA的方法。

FGA等15个短串联重复序列在融水县苗族群体中的遗传学分析

目的了解广西融水县苗族群体中15个短串联重复序列（STR）：TPOX、TH01、CSF1PO、D19S433、vWA、D18S51、D5S818、FGA、D8S1179、D21S11、D7S820、D3S1358、D13S317、D16S539、D2S1338遗传多态的分布情况。方法用枸橼酸钠抗凝法采集融水县苗族的血样，酚-氯仿抽提法提取DNA，用AmpFlSTRIdentifilerTM PCR Amplification kit荧光标记复合扩增技术和ABI 3100型遗传分析仪对DNA进行扩增检测。结果15个STR分别检测出5-20种等位基因，11-62种基因型，基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律，等位基因频率和基因型频率分布在0.002 4-0.4663和0.004 8-0.274 0之间；平均杂合度0.781 1，累积个人识别力1.000 000 000 00，累积非父排除率0.999 999 998，多态信息总量0.999 999 999 4。结论广西融水苗族群体的15个短串联重复序列基因座具有高度多态性和遗传稳定性，实用价值高，可作为广西苗族群体的民族遗传学研究和法医学鉴定的基础数据。

微粒型及可溶性β葡聚糖的制备及活性鉴定

目的 从酿酒酵母中制备具有生物学活性的微粒型及可溶性 β葡聚糖。 方法 分别采用氯仿抽提法和Wil liams酸碱法 ,比较微粒型β葡聚糖产率及纯度。采用单核细胞吞噬抑制实验 ,观察所得 β葡聚糖的生物学活性。 结果 氯仿抽提法的 β葡聚糖产率为 4 .8%～ 5 .1% ,纯度为 81.5 %～ 85 .6 % ,蛋白质含量为 0 .2 7%～ 0 .31%。所得微粒型及可溶性 β葡聚糖对人单核细胞吞噬酵母颗粒的抑制率达 5 0 %。结论 氯仿抽提法的产率优于Williams酸碱法 ,所得

甜菜DNA提取新方法初探

本文报道了一个全新的甜菜DNA提取方法，该方法较以往的甜菜DNA提取方法有所不同。它是利用鲜嫩的花蕾为试材，以略有改进的苯酚／氯仿抽提法提取DNA 。利用冷冻研磨或者用玻璃棒直接捣碎试材，来提取DNA。该方法简单，易操作，DNA纯度较高，可以直接用于RAPD分析，实验效果较好。

禽类全血DNA不同提取方法的比较

以4个不同禽类品种(金定鸭、长乐灰鹅、象洞鸡和闽南火鸡)为试验材料,采用4种不同方法从其全血中提取DNA,比较不同方法的DNA提取效率。结果表明:由于品种之间DNA存在差异,DNA的质量和产率也有显著差异,金定鸭全血DNA用树脂法效果最佳;长乐灰鹅和闽南火鸡全血DNA用酚-氯仿法效果最佳;而盐析法是提取象洞鸡全血DNA的最佳方法。

两种动物组织DNA提取方法的比较

本试验以猪耳组织为试验样本,采用酚-氯仿抽提方法[1]和DNA提取试剂盒方法进行DNA提取的对比试验,并通过核酸蛋白定量仪测量了DNA浓度和纯度,并进行了PCR扩增实验。试验表明,两种提取方法都可以进行PCR扩增试验,但采用试剂盒提取方法提取DNA可以直接进行PCR扩增,而酚-氯仿提取法需放置一段时间后效果好,并且采用试剂盒提取的DNA纯度高、速度快、节省耗材、结果稳定、重复性强,适合大量DNA提取试验。

家禽血液基因组DNA的快速提取

[目的]建立一种应用硅胶膜提取禽血DNA的新方法。[方法]应用硅胶膜法和传统的酚/氯仿法提取抗凝禽血基因组DNA,设计合成了一对2.7 kb的鸡卵清蛋白基因的引物,检测这2种方法提取的基因组DNA模板对聚合酶链式反应(PCR)扩增效率的影响。[结果]用硅胶膜法提取的基因组DNA产量和质量均比传统的酚/氯仿法高,将该法提取的基因组DNA作为模板能够消除抗凝剂对后续PCR反应的影响。[结论]硅胶膜法为快速提取高质量的禽血基因组DNA奠定了基础。

一种检测端粒DNA重复序列相对长度的新方法—PCR法

目的 :为了观察补肾益精方药对端粒DNA重复序列长度的影响 ,创建一种新的简便的测定端粒DNA重复序列相对长度的方法。方法 :其原理是端粒DNA重复序列越长 ,其扩增产物越多 ,反之就少。根据端粒DNA重复序列 ,设计合成特殊的引物 ,引物 1为 5′CCCTAA3′ ,引物 2为 5′ ,TTAGGG3′ ,同时使用Taq和PfuDNA聚合酶 ,对端粒DNA重复序列进行PCR扩增。结果 :琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,端粒DNA重复序列得到扩增 ,λDNA对照没有扩增。结论 :端粒DNA重复序列确实得到了扩增 ,创建的此方法获得了成功。

高效提取肠道菌群总DNA方法的建立

[目的]建立一种高效快速的提取肠道菌群总DNA的方法,即改进的氯仿抽提法,为进一步对肠道菌群的定性和定量提供基础。[方法]通过对多种肠道菌群总DNA提取方法的考察总结,对氯仿抽提法进行改进,采用细菌添加试验的荧光实时PCR检测抽提结果,同时与QIAamp DNA Stool Mini kit法进行比较,以验证所建立的改进的氯仿抽提法的高效性。[结果]改进的氯仿抽提法提取的肠道菌群总DNA量约是QIAamp DNA Stool Mini kit的100倍;同时细菌添加试验的实时荧光定量PCR结果显示,改进的氯仿抽提法提取添加细菌的DNA效率较高。[结论]改进的氯仿抽提法经济、高效、快速,适合大批量的粪便样品的DNA提取。

2种提取猪肝基因组DNA方法的比较

[目的]对2种猪肝基因组DNA提取方法,进行比较研究。[方法]分别采用试剂盒法和常规的氯仿/异戊醇抽提法,提取新鲜猪肝基因组DNA,并对其进行综合分析。[结果]试剂盒方法得到的DNA浓度较低,其OD260nm/OD280nm比值达到2.05,虽然蛋白质除的较干净,但是含RNA较高;而氯仿/异戊醇抽提法得到的DNA浓度高,其OD260nm/OD280nm比值1.88,纯度较高,且成本低。[结论]氯仿/异戊醇法对猪肝基因组DNA提取效果优于试剂盒法。

八眉猪基因组DNA提取方法比较

动物遗传育种的研究以及基因工程等分子水平的操作均需从生物体中提取基因组DNA。提取的DNA质量会影响后续实验结果的可靠性,提取方法是影响DNA质量的一个重要因素。本实验采用酚-氯仿抽提法与DNA提取试剂盒法在相同温度条件下(4℃)提取猪耳组织DNA,以探讨不同提取方法对DNA质量的影响。结果表明:用酚-氯仿抽提法所提取的DNA经凝胶数字成像系统分析显示其条带更宽更亮,说明含量较高,浓度更大,但点样孔有少许污染,蛋白质未除干净;而用新兴的试剂盒所提取的DNA虽然浓度不是很高,但无污染,可直接用于PCR以及酶切等后续实验。