利用白细胞沉淀-酚-氯仿抽提法提取绵羊血液DNA

以湖羊冷冻全血为材料,利用白细胞沉淀-酚-氯仿抽提法提取DNA。结果表明,利用该方法提取的DNA纯度高,产量在正常范围内,PCR扩增效果良好,可以用于分子遗传学试验。

一种检测端粒DNA重复序列相对长度的新方法—PCR法

目的 :为了观察补肾益精方药对端粒DNA重复序列长度的影响 ,创建一种新的简便的测定端粒DNA重复序列相对长度的方法。方法 :其原理是端粒DNA重复序列越长 ,其扩增产物越多 ,反之就少。根据端粒DNA重复序列 ,设计合成特殊的引物 ,引物 1为 5′CCCTAA3′ ,引物 2为 5′ ,TTAGGG3′ ,同时使用Taq和PfuDNA聚合酶 ,对端粒DNA重复序列进行PCR扩增。结果 :琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,端粒DNA重复序列得到扩增 ,λDNA对照没有扩增。结论 :端粒DNA重复序列确实得到了扩增 ,创建的此方法获得了成功。

四种全血基因组DNA提取方法的比较

为比较酚 氯仿抽提法、经典Miller盐析法、改进的Miller盐析法及胍盐酸法提取人全血基因组DNA的方法 ,分别测定所获DNA的效率和纯度。结果发现四种方法提取的DNA纯度分别为 1.6 2± 0 .2 6、1.5 8± 0 .2 8、1.6 1± 0 .2 8、1.5 6± 0 .2 7,各组间差异无显著性 ;5mL全血所提DNA总量分别为 6 4 .0± 33.0 μg、30 .3± 2 6 .9μg、11.1± 9.2μg和 6 5 .2± 2 4 .0 μg。酚 氯仿法和胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其他两种方法。四种方法提取DNA的纯度相似 ,酚 氯仿法和胍盐酸法的提取效率高 ,胍盐酸法和盐析法的操作较简单、安全。胍盐酸法相对简单快速、安全、效率高 。

FGA等15个短串联重复序列在融水县苗族群体中的遗传学分析

目的了解广西融水县苗族群体中15个短串联重复序列（STR）：TPOX、TH01、CSF1PO、D19S433、vWA、D18S51、D5S818、FGA、D8S1179、D21S11、D7S820、D3S1358、D13S317、D16S539、D2S1338遗传多态的分布情况。方法用枸橼酸钠抗凝法采集融水县苗族的血样，酚-氯仿抽提法提取DNA，用AmpFlSTRIdentifilerTM PCR Amplification kit荧光标记复合扩增技术和ABI 3100型遗传分析仪对DNA进行扩增检测。结果15个STR分别检测出5-20种等位基因，11-62种基因型，基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律，等位基因频率和基因型频率分布在0.002 4-0.4663和0.004 8-0.274 0之间；平均杂合度0.781 1，累积个人识别力1.000 000 000 00，累积非父排除率0.999 999 998，多态信息总量0.999 999 999 4。结论广西融水苗族群体的15个短串联重复序列基因座具有高度多态性和遗传稳定性，实用价值高，可作为广西苗族群体的民族遗传学研究和法医学鉴定的基础数据。

利用不同方法从深加工牦牛肉产品中提取基因组DNA效果的比较

为了从深加工牦牛肉产品中获得片段较大、数量较多的基因组DNA,以用于分子追溯的检测,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法的提取效果。通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段,对利用3种方法提取的基因组DNA的数量和质量进行了比较。结果显示,利用酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA质量不佳,异硫氰酸胍法和试剂盒提取法的提取效果相当,PCR可以扩增出730 bp左右的核外基因细胞色素b,而核内基因只能扩增出300bp左右的核基因DNA片段(内乳铁蛋白基因,271 bp;BoLA-DRB3基因,302 bp)。综合考虑提取时间、费用、数量和质量等各方面的因素,认为异硫氰酸胍法操作简便、快速、廉价、有效,是较好的从动物深加工肉产品中提取基因组DNA的方法。

Genomic DNA Isolation by Phenol/Chloroform Extracting Method from Sheep Blood Clot

[ Objective] The aim was to establish the method of extracting genomic DNA from sheep blood clot on the basis of the improvement of method for extracting genomic DNA from tissues. [Method]The genomic DNA with complete primary structure and high purity was obtained from the sheep blood clot after the steps of cutting the sheep blood clot with ophthalmic scissors, cell lysis with tissue DNA extracts and digested by proteinase K, extracting with phenol/chloroform and precipitating with ethanol were performed. [ Result] The concentration of the extracted DNA was 159.90 ±0.70 ng/μl and the ratio of the A260/A280 was 1.80 ＋0.01. The sheep microsatellite locus of BM203 was amplified by using the extracted DNA from the sheep blood clot as template of PCR, and the PCR result was perfect. [Conclusion]This method is simple and feasible, the quantity and quality of the extracted DNA can satisfy the demands for the subsequent researches. It is worth to extending and using for reference.

禽类全血DNA不同提取方法的比较

以4个不同禽类品种(金定鸭、长乐灰鹅、象洞鸡和闽南火鸡)为试验材料,采用4种不同方法从其全血中提取DNA,比较不同方法的DNA提取效率。结果表明:由于品种之间DNA存在差异,DNA的质量和产率也有显著差异,金定鸭全血DNA用树脂法效果最佳;长乐灰鹅和闽南火鸡全血DNA用酚-氯仿法效果最佳;而盐析法是提取象洞鸡全血DNA的最佳方法。

两种动物组织DNA提取方法的比较

本试验以猪耳组织为试验样本,采用酚-氯仿抽提方法[1]和DNA提取试剂盒方法进行DNA提取的对比试验,并通过核酸蛋白定量仪测量了DNA浓度和纯度,并进行了PCR扩增实验。试验表明,两种提取方法都可以进行PCR扩增试验,但采用试剂盒提取方法提取DNA可以直接进行PCR扩增,而酚-氯仿提取法需放置一段时间后效果好,并且采用试剂盒提取的DNA纯度高、速度快、节省耗材、结果稳定、重复性强,适合大量DNA提取试验。

八眉猪基因组DNA提取方法比较

动物遗传育种的研究以及基因工程等分子水平的操作均需从生物体中提取基因组DNA。提取的DNA质量会影响后续实验结果的可靠性,提取方法是影响DNA质量的一个重要因素。本实验采用酚-氯仿抽提法与DNA提取试剂盒法在相同温度条件下(4℃)提取猪耳组织DNA,以探讨不同提取方法对DNA质量的影响。结果表明:用酚-氯仿抽提法所提取的DNA经凝胶数字成像系统分析显示其条带更宽更亮,说明含量较高,浓度更大,但点样孔有少许污染,蛋白质未除干净;而用新兴的试剂盒所提取的DNA虽然浓度不是很高,但无污染,可直接用于PCR以及酶切等后续实验。

三种人全血基因组DNA提取方法的比较

目的:比较改良酚-氯仿抽提法、盐析法、试剂盒法从人全血中提取基因组DNA的效果,以期建立一种快速、经济的提取高质量基因组DNA的方法。方法:分别用上述三种方法从人全血中提取基因组DNA,通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、聚合酶链式反应(PCR)、限制性内切酶酶切检测提取的基因组DNA的产量、纯度和质量。结果:改良酚-氯仿抽提法与试剂盒法提取的基因组DNA相比,DNA的产量有统计学差异,DNA的纯度无统计学差异,但试剂盒法提取的基因组DNA有较明显的降解现象;盐析法与改良酚-氯仿抽提法、试剂盒法相比,基因组DNA的产量和纯度都存在统计学差异,并且基因组DNA聚合酶链式反应(PCR)扩增的稳定性也明显劣于另外两种方法;三种方法提取基因组DNA均能进行限制性内切核酸消化。结论:改良酚-氯仿抽提取法是一种经济、快速、高效、稳定提取人全血基因组DNA的方法,适用于批量临床标本处理。