不同细菌对2,3,5-三苯基氯化四氮唑耐受力的研究

虽然2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）被广泛应用于菌落计数中,但是高浓度的TTC对细菌生长有抑制作用,不同细菌对TTC的耐受力也不同.本文着重讨论菌量在30~300个/ml[1]时,不同细菌在含TTC 的培养基中,不受抑制时的TTC 最高浓度,从而得出最适合菌落计数的TTC浓度,现报道如下.

2,3,5-三苯基氯化四氮唑浓度对细菌菌落总数测定的影响

目的了解2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)浓度对细菌菌落总数测定的影响,以规范该法在食品细菌菌落总数测定中的应用。方法采用细菌定量培养的方法,观察含不同浓度TTC营养琼脂培养基对不同细菌生长形成菌落数的影响。将不同稀释度的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌纯培养物各1mL,分别依次接种到TTC质量浓度分别为0.02、0.05、0.10g/L的平板计数琼脂中,同时设空白对照和盐水试剂对照,观察菌落生长状况。结果大肠埃希菌在不同TTC浓度培养基中均能正常生长,其形成菌落数不受影响。培养基中含TTC质量浓度≥0.05g/L对金黄色葡萄球菌菌落数形成有明显影响,≥0.02g/L对蜡样芽胞杆菌的菌落数形成有明显影响。结论培养基中含TTC浓度≤0.10g/L对大肠埃希菌生长基本无影响,>0.02g/L对金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌生长均会产生影响。

2，3，5-氯化三苯基四氮唑对N80^#钢缓蚀行为的研究

用稳态极化法和交流阻抗法研究了2,3,5-氯化三苯基四氮唑对N80#钢在含H2SO3酸性溶液中发生腐蚀时的缓蚀作用及其缓蚀机理.结果表明:2,3,5-氯化三苯基四氮唑是一种以抑制阳极过程为主的缓蚀剂.其还原产物在N80#钢表面的吸附阻止了腐蚀性的酸性溶液与钢表面的接触,从而起到缓蚀作用.

应用氯化三苯基四氮唑染色快速判定超声引导下微波凝固范围

目的:探讨应用氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色快速判定微波凝固范围的可行性。方法:纯种新西兰长耳大白兔18只,随机分成即时、1 d、3 d、7 d、10 d、21 d 6组。超声引导下,45 W微波辐射肝组织3 min。取凝固标本,肉眼观察,并行TTC染色、HE染色、电镜观察。结果:活体兔肝凝固灶,电镜、HE染色证明凝固坏死区TTC不染色;非凝固坏死区TTC染色成玫瑰红色。活检标本TTC染色后,染色区域行HE染色,仍然可以观察细胞形态和组织结构。结论:TTC大体染色判定微波凝固范围,即时、准确、经济且操作简单。TTC不染色区域为凝固区,染成玫瑰红色区域为非凝固区。

新型氯化三苯基锡(1,4-二氢-2,3-二苯基四氮唑酮)配合物的合成及其性能

以三苯基氯化锡和二苯碳酰二肼为原料,在乙醇-钠中反应合成了一个新型的氯化三苯基锡(1,4-二氢-2,3-二苯基四氮唑酮)配合物(1),其结构经FT-IR,元素分析和X-射线单晶衍射表征。结果表明:1(CCDC:1 445377)属单斜晶系,P21/c空间群,晶胞参数a=1.393 2(6)nm,b=1.097 3(5)nm,c=1.933 7(8)nm,β=110.219(9)!,V=2.77 4(2)nm3,Z=4,Dc=1.498 g·cm-3,F(000)=1 264,R1=0.028 8,wR2=0.064 6。中心Sn为五配位三角双锥构型。研究了1的荧光性质、热稳定性、电化学性质和体外抗癌活性。结果表明:1在100℃下较稳定;1在400 nm(λex=320 nm)处有弱荧光峰;c(1)=5μg·m L-1时,对He La细胞株增殖的抑制率为93.70%。

肉制品检验中未被0.001%2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色菌落的研究

目的鉴定1批肉制品样品中不能被2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride,TTC)染色菌落的菌落。方法依照GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物检验菌落总数测定》和GB 29921-2013《食品安全国家标准食品中致病菌限量》对样品前处理后进行分离纯化,采用VITEK 2以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪进行检测鉴定。结果经VITEK 2和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定,肉制品样品中不能够被0.001%TTC染色的菌落分别为鲁氏不动杆菌和奇异变形杆菌。结论在出现TTC无法染色的情况下,应该采用适当的菌种鉴定方法对样品的颗粒和菌落进行详细区分,进而防止漏检和误检。

TTC-脱氢酶还原法测定铜绿微囊藻活性

利用氯化三苯基四氮唑（TTC）-脱氢酶还原法定量地测定了铜绿微囊藻细胞的活性,并对影响活性测定的因素进行了分析与研究.结果显示,TTC浓度大于0.6%时会抑制酶活性,最适TTC浓度为0.2%;脱氢酶还原反应在Tris-HCl缓冲液中能正常进行,而在磷酸盐缓冲液中受到抑制,最适pH值为7.5-8.0;培养时间和培养温度对TTC脱氢酶还原反应的影响较大,最适培养时间为8-16h,最适培养温度为30-35℃;反应不需加入非离子去垢剂,吐温20和曲拉通X-100对脱氢酶反应会产生较强抑制作用.TTC还原所生成的三苯基甲臢（TPF）可采用50%乙醇提取.研究显示TTC-脱氢酶还原法可以很好地进行藻细胞活性定量化测定.

2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用研究

为了分析细菌培养指示剂2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用,笔者将牛支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、绵羊肺炎支原体、鸡毒支原体、肺炎支原体分别接种于含有TTC的改良Thiaucourt’s液体培养基(TTC-MTB)和改良Thiaucourt’s固体培养基(TTC-MTA)中,同时以常规酚红指示剂培养基作为对照,观察支原体在2种培养基中的生长情况,并筛选TTC在培养基中的最适指示浓度。结果显示,与常规酚红指示剂相比较,TTC有更为灵敏的培养指示效果;在固体培养基中,TTC指示的支原体红色菌落更有利于菌落的计数及形态的观察;TTC的最佳使用浓度为0.2 mg/mL。本研究可为支原体培养和优化疫苗生产工艺提供参考。

TTC-脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的条件优化

为确定氯化三苯基四氮唑（TTC）-脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的最优条件,首先通过单因素实验对影响藻细胞活性测定的TTC质量分数、缓冲液p H、提取剂（乙醇）体积分数、培养时间、培养温度进行分析,选定各因素的变化范围,再利用正交试验设计方法,在藻细胞活性测定的最适培养温度下,对TTC质量分数、缓冲液p H、提取剂体积分数、培养时间进行3水平优化试验。最后确定优化的TTC-脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的条件为TTC质量分数0.1%、缓冲液p H 8.0~8.5、乙醇体积分数60%、培养时间5 h、培养温度35℃。在此条件下所测藻细胞活性最高,为螺旋藻细胞活性的评价提供了一定参考。

利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)测定细胞活力的方法与应用

目的：利用细胞内脱氢酶对2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）的催化作用建立比目前常用的3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四氮唑（噻唑蓝，MTT）法更可靠的测定细胞活力的方法。方法使用不同浓度的TTC溶液测定细胞活力，并确定TTC的有效浓度范围。在计算所测定值与细胞数量函数关系的基础上，通过与传统测定细胞活力的MTT法进行比较，分析该方法的可行性。结果0．5％～1．0％浓度范围内的TTC溶液可用来测定细胞活力，测定值与细胞数量之间存在线性关系，与MTT法得到的结果基本一致，可避免MTT法测定过程中来自于细胞培养体系中其他抗氧化物质的非特异性干扰。结论 TTC可用于测定细胞活力，可替代常规的MTT法，具有操作简便，费用经济，结果可靠等优点。

不同2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色方式对心肌梗死面积检测的对比

目的比较应用不同2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色方式对心肌梗死面积的检测结果。方法实验在中国医科大学完成,采用Langendorff离体心脏灌注装置建立全心缺血模型。将20只健康SD大鼠（雌雄不拘、2周龄,体重250~300 g）按随机数字表法分为两组,每组10只。A组：TTC经主动脉根部直接灌注,B组：心脏切片后染色。两组鼠心均平衡10 min,阻断灌注30 min,复灌30 min。染色后观察心肌切片改变,计算心肌梗死面积。结果 A组和B组均能很好地对梗死心肌进行标记,且两组心肌梗死面积差异无统计学意义（45.80%±6.07%vs.47.40%±6.80%,P〉0.05）;A组心肌组织切片平整,颜色对比更明显,计算面积较准确,形态美观;而B组心肌组织切片凸凹不平,较难进行后续处理,计算面积不准确,形态不美观。结论 TTC染色是一种较为经济、快捷检测心肌梗死范围的染色方法,且经主动脉根部直接灌注染色法较心脏切片后染色法更简单、易操作,节省费用,染色效果好,染色后标本更平整、美观,有利于拍照和计算心肌的梗死面积。

2,3,5-三苯基氯化四氮唑在增菌液中的应用研究

目的确立2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)在增菌液中,对不同的细菌产生抑制和被完全抑制时的浓度。方法用金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、沙门菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌、副溶血性弧菌配制不同的菌液浓度,分别加到含1.0 mg/ml琼脂粉的普通营养肉汤增菌液中(副溶血性弧菌用3%氯化钠碱性蛋白胨水代替普通营养肉汤),再加入不同量的10.0 mg/ml TTC储备液,记录TTC对各菌产生抑制和被完全抑制时的浓度。结果在菌量30～300 cfu/ml时,金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、沙门菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌、副溶血性弧菌开始被抑制和被完全抑制时的TTC浓度分别为0.02、0.1、0.2、0.6、0.6、0.1 mg/ml和0.1、0.7、0.5、>2.0、>2.0、0.2 mg/ml。结论检测样品时,在增菌液中加入1.0 mg/ml的琼脂粉和适量的TTC可提高致病菌的检出率,可直观样品中细菌数量。选择含不同TTC浓度的增菌液,可选择性地进行筛选增菌,进一步提高检出率。

玉米根系活力及吸收面积的空间分布变化

分别用氯化三苯基四氮唑 ( TTC)还原法和甲基蓝吸附法测定玉米根系活力和吸收面积 ,研究其 0～1 5 cm土层根系的水平分布和离主茎 0～ 2 0 cm范围土壤根系的垂直分布情况。结果表明 ,TTC还原量在离主茎 0～ 2 0 cm的水平方向和离地面 0～ 45 cm的垂直方向上 ,随着离主茎距离的增加和土层深度的加深而降低。TTC还原强度在水平方向上与 TTC还原量的变化趋势类似 ,只是个别生育期 1 5～ 2 0 cm处回升 ;在垂直方向上与 TTC还原量的变化趋势相反 ,随土层深度的加深而增加。同样范围内根系总吸收面积和活跃吸收面积的变化趋势与 TTC还原量相同 ;而比吸收面积和比活跃吸收面积 ,在水平方向上随着离主茎距离的增加而明显增加 。

用TTC与INT-电子传递体系活性表征重金属对污泥活性的影响

研究了不同浓度的Cu2 + 、Zn2 + 、Cd2 + 、Hg2 + 、Ni2 + 、Pb2 + 和Ag+ 对污泥TTC和INT 电子传递体系活性产生的影响 ,比较了这 2个参数在表征污泥活性受重金属抑制时的灵敏性 .结果表明 ,各种重金属抑制污泥TTC 电子传递体系活性的IC50 小于抑制INT 电子传递体系活性的IC50 ,TTC 电子传递体系活性反映重金属毒性作用的灵敏性大于INT 电子传递体系活性 .实验的重金属离子呈现出不同的毒性作用 ,以TTC 电子传递体系活性为评价参数 ,毒性顺序为 :Hg2 + >Cd2 + >Cu2 + >Ag+ >Zn2 + >Ni2 + >Pb2 + ,以INT 电子传递体系活性为评价参数 ,毒性顺序为 :Hg2 + >Ag+ >Cu2 + >Cd2 + >Zn2 + >Ni2 + >Pb2 + .

大鼠缺血性卒中模型MRI与TTC染色法测量脑梗死体积的对比研究

目的对比活体下MRI与大体标本2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评估缺血性卒中大鼠脑梗死体积的差异。方法对19只大鼠利用线栓法建立急性缺血性卒中模型,并于造模24h后行头颅MRI扫描,扫描完毕后进行TTC染色,利用配对t检验评价T2WI及TTC染色测量脑梗死体积的统计学差异。结果除2只大鼠死亡外,共有17只纳入本研究中。T2WI序列与TTC染色法测量的脑梗死体积无明显统计学差异(t=0.50,P=0.62)。结论对于有MRI条件的动物实验研究,T2WI序列可以取代TTC染色法快速、准确的测量缺血性卒中动物模型的脑梗死体积,简化实验流程。

镇江地区市售纯牛奶和生鲜牛奶中抗生素残留情况的调查

对镇江地区市售纯牛奶和奶源户生鲜牛奶中抗生素残留情况进行调查,为加强乳制品质量控制提供依据。采用TTC法(GB4789.27-2003)对鲜乳中抗生素残留进行检验,以农业部2001年9月发布的《无公害食品生鲜牛奶》行业标准中不得检出抗生素为判定标准。结果显示奶源户生鲜牛奶抗生素残留阳性率为5.86%,市售包装纯牛奶阳性率4.67%,袋装纯牛奶阳性率为4.41%,盒装纯牛奶阳性率为4.79%。镇江市售生鲜牛奶还存在一定程度的抗生素残留,建议有关卫生管理部门需加大对乳制品质量的监测力度,加强生产鲜牛奶的抗生素残留检测工作。

脱氢酶活性检测方法及应用

介绍了分别用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)以及碘硝基四唑紫(INT)等作为人工受氢体进行脱氢酶活性(DHA)检测的几种常见方法,以及它们自身在反映微生物活性等方面的优缺点。论述了TTC在DHA检测中的发展,重点讨论了TTC作为受氢体进行DHA测定过程中其标准曲线制作方法的改进,并对测定中诸多影响因素如温度、pH及萃取剂等进行了比较分析,确定了最佳实验条件。简要概括了目前DHA测定方法在废水生化处理、评价化学毒物和金属毒物的毒性、土壤污染等方面的应用。

呼吸缺陷型啤酒酵母菌株的重离子束辐照诱变筛选及其线粒体的限制性酶切分析

利用单核能为5.19MeV/u的22Ne5+辐照啤酒酵母菌株,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl-2H-Tetrazoliumchloride,TTC)筛选培养基快速筛选呼吸缺陷型酵母菌株。通过一种新型而简便的限制性酶切分析手段,发现辐照后的呼吸缺陷型酵母菌株线粒体DNA发生明显变化,主要表现在与对照相比线粒体DNA出现大片段缺失,同时出现了少量新的条带,并在此基础上初步探讨离子束辐照诱变产生呼吸缺陷型酵母菌株的诱变机理。

川贝母悬浮培养细胞活力测定条件的优化

为了利用四氮唑脱氢酶还原法测定川贝母悬浮培养细胞的活力,并对影响其活力测定的各种因素进行了研究.选取四氮唑脱氢酶还原法测定了经三次继代培养的川贝母悬浮培养细胞的活力,并研究了不同四氮唑溶液浓度、缓冲液种类和pH值以及脱氢酶还原反应时间对川贝母悬浮培养细胞活力测定的影响.通过实验得出用四氮唑脱氢酶还原法测定川贝母悬浮细胞活力的最佳条件为：四氮唑溶液最适浓度0.6％,脱氢酶还原反应在Tris-HCl缓冲液中的效果优于磷酸缓冲液和磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液,最适pH为7.0 ～7.5;脱氢酶最适还原反应的时间为18 h.

建立24h快速病原菌检测系统的研究

目的建立24h快速病原菌鉴定及快速药敏常规检测系统，为临床及时诊疗与控制医院感染提供病原菌学依据。方法采用旋转恒温箱替代普通恒温箱；在增菌培养瓶和药敏平板中加入氯化-2，3，5-三苯基四氮唑（TTC）、琥珀酸盐；加大病原菌生化鉴定管反应底物浓度的同时，增加病原菌接种量。结果阳性培养显示时间比在普通恒温箱及常规培养液中显著缩短（x^2=74．92，P〈0．01）；加大菌液浓度，4～5h可获得明显菌落，12h内获得病原菌鉴定结果，2～5h得出可靠药敏结果。结论通过方法学的改进，经过4年的实验室证实，大部分标本均能获得可靠的培养结果，说明在24h之内，快速病原菌鉴定及药敏检测系统可以为临床诊疗和控制医院感染及时提供科学的实验室依据。