加酸内部沸腾法提取氯化两面针碱及其纯化研究

为降低两面针生物碱提取过程酸对设备的腐蚀及提高纯化过程的回收率,采用了加酸内部沸腾法强化提取氯化两面针碱,提取液直接用阳离子交换树脂吸附及超声波辅助强化洗脱在树脂表面结晶出来的两面针生物碱晶体。实验结果表明:两面针粉末先用4倍物料量的乙醇盐酸解吸剂解吸,解吸剂中盐酸和乙醇的质量浓度分别为0.61%和80%,然后用16倍物料量的20%质量浓度的乙醇在82℃下提取4 min,在此条件下氯化两面针碱提取得率为0.134%;用732阳离子交换树脂直接在40℃下静态吸附133倍树脂用量的内部沸腾法提取液,用盐酸浓度为3 mol·L-1、乙醇质量浓度为70%的酸乙醇洗脱液在超声波的辅助下间歇解吸附,解吸率达到99%以上,分离得到的氯化两面针碱纯度为94.5%,回收率为77.7%。与传统酸醇回流提取对比,加酸内部沸腾法提取快37.5倍、乙醇和盐酸消耗量减少一倍,对设备腐蚀大为减轻,提取液可以用阳离子交换树脂直接富集分离,氯化两面针碱回收率提高24.2%。

HPLC法同时测定两面针中氯化两面针碱与乙氧基白屈菜红碱的含量

目的确立用HPLC同时测定两面针中氯化两面针碱与乙氧基白屈菜红碱含量的方法。方法采用Hypersil BDSC18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-水-三乙胺-磷酸（25∶75∶1∶1）,流速为1 mL·min^-1,检测波长为272 nm。结果氯化两面针碱质量浓度在2-32 mg·L^-1范围内线性关系良好（r=0.999 9）,平均加样回收率为97.91%,RSD为1.20%;乙氧基白屈菜红碱质量浓度在2-32 mg·L^-1范围内线性关系良好（r=0.999 9）,平均加样回收率为96.80%,RSD为1.43%。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于两面针的质量控制。

HPLC-DAD-ELSD法测定伤痛酊中氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、岩白菜素和百两金皂苷A的含量

采用HPLC-DAD-ELSD法测定伤痛酊（STD）中氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、岩白菜素和百两金皂苷A的含量。方法：采用HypersilC，。色谱柱（200mm×4．6mm，5μm）；流速：0．8ml·min^-1；氯化两面针碱和乙氧基白屈菜红碱：流动相A为乙腈，流动相B为0．1％甲酸一三乙胺（pH4．5），检测波长为273nm。岩白菜素和百两金皂苷A：甲醇一水（25：75）为流动相；漂移管温度：95℃，载气（N2）流速：2．5SLPM·min^-1。结果：氯化两面针碱与乙氧基白屈莱红碱进样量分别在0．021—0．426μg（r=0．9995）、0．075—1．494μg（r=0．9998）与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为99．22％、98．61％，RsD分别为0．64％、0．46％（n=9）；岩白菜素和百两金皂苷A分别在0．215～4．304（r=0．9993）、0．286—5。728μg（r=0．9997）进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值良好的线性关系，平均加样回收率分别为99．15％、99．25％，RSD分别为0．77％、0．56％（n=9）。结论：该测定方法结果准确、灵敏度高、重复性好，可用于伤痛酊中氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、岩白菜素和百两金皂苷A的含量测定。

薄层扫描法测定毛两面针三种生物碱的含量

从广西大瑶山产毛两面针中提取到了鹅掌楸碱(Ⅰ)、白屈菜红碱(Ⅱ)、氯化两面针碱(Ⅲ)三种生物碱,用薄层扫描法(TLCS)同时测定其含量,并与玉林、百色两面针中的同种生物碱进行对比。研究表明,毛两面针和两面针均含Ⅱ、Ⅲ,在毛两面针还能检测到Ⅰ的存在,其含量为0.00957%。

两面针中乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱的测定

目的:制订了两面针中乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱的HPLC测定。方法:以1 mmol/L庚烷磺酸钠-乙腈(30∶70)为流动相,检测波长272 nm。结果:加样回收率乙氧基白屈菜红碱RSD=2.6%;氯化两面针碱RSD=2.5%;方法重现性好,RSD为1.4%和1.5%。可用于两面针的质量控制。

不同生长期两面针中氯化两面针碱和新棒状花椒酰胺含量的比较

采用HPLC(高效液相色谱)法测定2年、3年、5年、5年以上等不同生长期两面针药材中两种活性成分──氯化两面针碱和新棒状花椒酰胺的含量。色谱柱为DIKMAC C18柱(4.6×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.3%磷酸加0.2%三乙胺水溶液,进行梯度洗脱,1.0 m L/min的流速,检测波长为270 nm,柱温40℃,进样量20μL。结果,两面针药材中的氯化两面针碱的含量随生长年限增长而升高,而新棒状花椒酰胺的含量却随生长年限的增长而有所降低。该研究结果为两面针药材的采购与应用提供了可靠依据。

两面针四个不同部位氯化两面针碱含量的比较

检测了两面针药材4个不同部位——根、茎、枝、叶中氯化两面针碱的含量。方法是采用HPLC法,色谱柱为DIKMAC C18柱(4.6×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.3%磷酸加0.2%三乙胺水溶液,进行梯度洗脱,1.0 m L·min-1的流速,检测波长为270 nm,柱温40℃,进样量20μL。结果,在两面针药材的4个不同部位中氯化两面针碱含量的差别较大,其中根部含量最高,为2.033 mg·g-1,叶子含量最低只有0.021 mg·g-1。该研究为两面针药材的应用提供了可靠的理论依据。

响应面法优化两面针中三种生物碱的回流提取工艺

以两面针为试材,采用响应面法,研究了回流提取时间、提取溶剂浓度和料液比对氯化两面针碱、白屈菜红碱和血根碱提取得率的影响,以期获得两面针中3种生物碱的最佳回流提取工艺,为深入开发利用两面针中的生物碱提供参考依据。结果表明:3种生物碱的最优回流提取条件为提取时间2.4 h·次^(-1)(重复提取2次)、提取溶剂67%乙醇、料液比1∶20 g·mL^(-1),此时氯化两面针碱、白屈菜红碱和血根碱的得率分别为0.381%、0.560%、0.058%。该结果与响应面法预测值接近,说明该研究拟合的3种生物碱响应面回归模型可靠。优化后氯化两面针碱、白屈菜红碱和血根碱的得率分别提高了14%、95%、23%,优化工艺提取效率高,可用于两面针中3种生物碱的制备。

清上颗粒剂的质量控制方法研究

目的:建立与完善清上颗粒剂的质量控制方法。方法:用薄层色谱法对清上颗粒剂组方中葛根、两面针、板蓝根进行定性鉴别;用高效液相色谱法测定该颗粒剂中氯化两面针碱的含量。高效液相色谱条件为Vp-ODSC18柱(4.6mm×150 mm,5μm),流动相:乙腈-水-三乙胺(20∶80∶0.3),检测波长:328 nm,流速为1.2 ml/min,柱温45℃。结果:氯化两面针碱在此条件下能较好分离,且其浓度在5μg/ml^25μg/ml范围内线性关系良好,r=0.9996。平均加样回收率为98.36%,RSD=0.22%。结论:本法操作简单,重现性好,结果准确,可作为该制剂的质量控制方法。

氯化两面针碱在体外对肝细胞L-O2和肾细胞293增殖的影响

目的:观察氯化两面针碱在体外对人胃癌细胞7901、人鼻咽癌细胞cne1-1、人肾癌细胞ketr-3、人肝癌细胞BEL 7404的增殖抑制作用和对人胚肝细胞L-O2和人胚肾细胞293的增殖影响。方法:采用MTT法检测不同浓度氯化两面针碱对4种肿瘤细胞和人胚肝细胞L-O2及人胚肾细胞293增殖的影响,比较其IC50值;采用紫外分光光度法测定氯化两面针碱作用后肝、肾细胞培养上清液中SOD,MDA,LDH值的变化。结果:氯化两面针碱在体外对肿瘤细胞具有较强的增殖抑制作用,同时对人胚肝细胞L-O2和人胚肾细胞293有一定的增殖抑制作用。结论:氯化两面针碱能抑制多种肿瘤细胞的增殖,对肿瘤细胞有明显细胞毒性作用,同时可抑制人胚肝细胞L-O2和人胚肾细胞293的增殖,对人体肝、肾细胞有一定的毒性。

正交试验法优选外感风痧颗粒制剂的提取工艺

[目的]优选外感风痧颗粒制剂提取工艺。[方法]采用正交试验法,以得膏率、氯化两面针碱含量为评价指标,筛选出最佳提取工艺。[结果]最佳提取工艺为:选用粗粉药材,第1次加水12倍量,浸泡0.5h,提取时间为2h;第2次加水12倍量,提取时间为0.5h。[结论]优选工艺的提取条件稳定、合理、经济,适用于工业生产。

星点设计-响应面法优选龙钻通痹方总生物碱大孔树脂纯化工艺

目的优选龙钻通痹方(LTR)总生物碱的最佳纯化工艺。方法采用5种型号的大孔树脂对LTR总生物碱进行吸附与解吸,以总生物碱的吸附量、吸附率和解吸率为指标,筛选出较佳大孔树脂;然后通过单因素考察和星点设计-效应面法优选LTR总生物碱的最佳纯化工艺参数。结果 HPD100树脂纯化龙钻总生物碱的最佳工艺条件为pH值1.7的生药质量浓度0.17 g/m L,以1 m L/min体积流量上样,9倍柱体积80%乙醇以1 m L/min洗脱。在该条件下,LTR总生物碱提取物中总生物碱的质量分数达到了22.23%,产品得率为173.27 mg/g。结论 HPD100型大孔树脂能较好地用于分离纯化LTR总生物碱,为进一步的药效学研究提供依据。

五松肿痛酊提高质量标准研究

目的:对五松肿痛酊的质量标准进行修订提高。方法:采用TLC法对制剂中的买麻藤、红花、土木香、五味藤、干姜进行定性鉴别,采用HPLC法对制剂中的氯化两面针碱进行含量测定。结果:TLC法可检出买麻藤、红花、土木香、五味藤、干姜,氯化两面针碱在0.098-1.225μg范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,平均回收率为98.67%。(RSD%=1.32%)。结论:本法简便,快速,重复性好,可作为本品的质量控制指标。