二氯化钴(CoCl_2)诱发缺氧对胰腺癌PC-3细胞系核因子-κB表达的影响

目的 观察二氯化钴 (CoCl2 )诱发缺氧对胰腺癌PC 3细胞系核因子 κB(NF κB)表达的影响。方法 采用免疫组织化学方法检测NF κB在PC 3细胞系中的表达 ,并通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)观测CoCl2 与NF κB表达间的量 效和时 效关系。结果 胰腺癌PC 3细胞系中存在NF κB的表达 ,CoCl2 可上调细胞中NF κB的表达 ,并且其和NF κB表达间体现出一定剂量和时间范围内的依赖性关系。结论 胰腺癌PC 3细胞系中存在着NF κB的表达 ,通过CoCl2 诱导缺氧可以上调NF

氯化钴(COCl_2)防止大豆花荚脱落效应的研究初报

大豆花、荚脱落是影响大豆产量的主要因素之一。东北地区大豆花、荚脱落率一般为40～70％,江南秋大豆竟达70～90％。防止或减少大豆花、荚脱落,已有多方面的研究。其中利用植物激素和微量元素的研究比较多,而对施用乙烯生物合成抑制剂氯化钴来防止或减少大豆花、荚脱落的研究,目前报道甚少。我们从1984年开始进行了施用COCl2防止或减少大豆花、荚脱落的研究。本文报导了1984和1985年的研究结果。

氯化钴诱导PC12细胞凋亡的分子机制

目的确定氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的分子机制。方法500μmolLCoCl2诱导PC12细胞24h后,检测活性氧(ROS)生成量的变化以及抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫代苏糖醇(DTT)对细胞存活率和ROS生成量的影响;琼脂糖凝胶电泳检测NAC、DTT对CoCl2诱导PC12细胞DNA片段化的影响;利用RTPCR法检测凋亡相关基因bclxl和bax在PC12细胞调亡过程中的表达及NAC、DTT对基因表达的影响;化学发光法检测NAC、DTT对Caspase3表达的作用。结果在CoCl2诱导PC12细胞凋亡中,ROS生成量明显上升,为正常时的2.92倍;NAC、DTT可提高细胞存活率,由53.1%上升为94.8%和92.3%(P<0.01),并有效抑制ROS的生成,为正常时的24.2%和82.1%(P<0.01);同时抑制DNA片段化的发生。bclxl在细胞凋亡过程中表达明显下降,bax表达无明显变化;NAC和DTT可使bclxl的表达明显上升。Caspase3在细胞凋亡中被激活,NAC、DTT可抑制Caspase3的表达(P<0.01)。结论ROS介导了CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,这一过程与抑制bclxl表达,激活Caspase3有关。

氯化钴对PC12细胞的凋亡作用

目的 确定氯化钴(CoCl2 )对PC12细胞的影响。方法 构建CoCl2 诱导的PC12细胞模型,检测CoCl2 对PC12细胞的毒性作用;将Caspases的抑制基因p3 5转染PC12细胞得到可稳定表达p3 5基因的细胞株PC12 p3 5 ,检测p3 5对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用;检测Caspases特异性多肽抑制剂Z VAD FMK对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用。结果 分别以10 0、3 0 0、5 0 0、70 0和10 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h或以5 0 0 μmol LCoCl2 分别诱导PC12细胞12、2 4、3 6、48和60h后,PC12细胞存活率均明显下降(P <0 0 1) ,并与CoCl2 诱导的时间和浓度呈正相关;细胞亚显微结构检测,流式细胞分析和DNA片段化结果也表明5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h可使PC12细胞出现明显凋亡特征。构建可稳定表达Caspase蛋白酶抑制基因p3 5的PC12细胞株,或分别加入5 0和10 0 μmol LCaspases多肽抑制剂Z VAD FMK预处理PC12细胞1h后,以5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h ,形态学观察结果,细胞存活率检测和流式细胞分析均表明p3 5基因和Z VAD FMK均可有效地抑制CoCl2 诱导的PC12细胞凋亡(P <0 0 1)。结论 CoCl2 可诱导PC12细胞凋亡。

糖尿病大鼠肾小管间质缺氧诱导因子2α表达变化及氯化钴对其影响

目的:观察缺氧诱导因子2α(HIF-2α)在2型糖尿病(T2DM)大鼠肾小管间质的表达及其降解抑制剂氯化钴(CoCl_2)的干预作用。方法:24只健康Wistar大鼠,留取8只作为对照(CON组),余16只采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射构建T2DM模型,成模后平分为T2DM组(DM组)和CoCl_2干预组(DM+CoCl_2组)。24周后取大鼠肾脏,常规方法制作石蜡切片。采用免疫组化法检测大鼠肾组织HIF-2α表达水平;PAS染色法检测大鼠肾组织结构病理变化及半定量分析肾小球硬化指数(GSI)和小管间质纤维化指数(IF);TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡率;免疫印迹法检测肾组织促红细胞生成素(EPO)表达水平。结果:DM组和DM+CoCl_2组大鼠肾组织HIF-2α表达高于CON组(P<0.01),DM+CoCl_2组HIF-2α表达水平较DM组更高(P<0.01);DM大鼠肾小球系膜基质及细胞轻度增生,肾小管间质区域增宽、细胞外基质聚集,其GSI和IF均显著高于CON组(P<0.01),与DM组比较,DM+CoCl_2组上述病理改变减轻,GSI和IF降低(P<0.01)。DM组肾小管上皮细胞凋亡率高于CON组(P<0.01),而DM+CoCl_2组细胞凋亡率较DM组降低(P<0.01)。DM组肾组织EPO表达水平低于CON组(P<0.05),而DM+CoCl_2组EPO水平高于DM组(P<0.05)。结论:上调肾组织HIF-2α表达可减轻T2DM大鼠肾间质损害。

氯化钴诱导的N2a细胞缺氧损伤模型的机制研究

目的研究氯化钴(CoCl 2)诱导的N2a细胞缺氧损伤模型的作用机理,为永久性缺血性脑卒中提供治疗思路。方法用0~1200μmol/L的CoCl 2处理24 h建立N2a细胞缺氧损伤模型。根据细胞活力与细胞凋亡率确定缺氧模型的最适宜浓度,免疫荧光法测定细胞线粒体膜电位及胞内活性氧(ROS)的表达,蛋白印迹法测相关蛋白含量。结果300μmol/L的CoCl 2是建立缺氧损伤的最适宜浓度。细胞经过处理后,线粒体膜电位降低,ROS含量明显升高,IKK蛋白被激活,磷酸化水平增加,促进了NF-κB的入核,同时Bcl-2蛋白含量降低、Bax、C-Caspase-3含量上升(P<0.05)。结论CoCl 2对N2a细胞的缺氧损伤主要通过其促凋亡作用产生,胞内线粒体膜电位的下调,ROS含量的增加以及NF-κB的入核和促凋亡蛋白含量的增加共同作用诱导CoCl 2对N2a细胞的损伤。

化学低氧诱导剂二氯化钴对PC12细胞自噬的影响

文章研究化学性低氧诱导剂二氯化钴(CoCl2)对PC12细胞自噬的影响。体外培养PC12细胞,用不同浓度CoCl2处理PC12细胞24 h。首先通过MTT实验选取后续的CoCl2处理浓度,用荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction, q-PCR)实验检测不同浓度CoCl2处理PC12细胞24 h后细胞内 HIF-1α基因表达水平。用 Western Blot方法检测CoCl2处理后自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平。结果表明,400、800 μmol/L CoCl2处理PC12细胞24 h不仅能显著降低细胞存活率,并且能显著提高 HIF-1α基因表达,即表明用CoCl 2造模确实可以模拟细胞体外缺氧。此外,800 μmol/L CoCl2处理组的Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达量出现显著降低,表明CoCl 2处理抑制了细胞自噬,并且该种抑制是呈时间依赖的。研究结果表明,CoCl2引起的化学性缺氧会损伤PC12细胞,并且会抑制细胞正常的自噬,该异常的自噬可能参与了CoCl2致PC12细胞的损伤。

氯化钴诱导低氧对裸鼹鼠肝星形细胞增殖及凋亡的影响

目的 比较研究氯化钴（CoCl2）对裸鼹鼠及C57BL/6J小鼠肝星形细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用活细胞计数试剂盒（CCK8）法和流式细胞术分别检测不同浓度CoCl2对裸鼹鼠和小鼠肝星形细胞增殖活力以及和凋亡水平的影响.采用蛋白印迹测定CoCl2处理后裸鼹鼠肝星形细胞低氧诱导因子1α（HIF-1α）和凋亡相关蛋白（BCL2、BAX）的表达水平.结果 低浓度（50 μtmol/L）CoCl2对C57BL/6j、鼠肝星形细胞增殖活性具有明显的抑制作用,并能显著提高其凋亡率,然而同样剂量的CoCl2能够显著提高裸鼹鼠肝星形细胞的增值活性,对细胞凋亡率亦无明显影响.高剂量CoCl2（＞200 μtmol/L）虽能导致裸鼹鼠肝星形细胞增殖活力的降低,及凋亡率的升高,但裸鼹鼠肝星形细胞的变化幅度明显小于小鼠.同时CoCl2处理后,裸鼹鼠肝星形细胞HIF-1α的表达或累积显著升高（P＜0.05）,BCL2/BAX比率显著上调（P＜0.05）.结论 与C57BL/6J小鼠相比,裸鼹鼠肝星形细胞具有更强的抵抗CoCl2引起的化学性低氧损伤的能力.同时HIF-1α可能参与调控裸鼹鼠抵抗化学性低氧环境造成的损伤.

核酸酶P1活性中心金属离子与氯化钴(Ⅱ)相互作用

核酸酶P1是一种重要的DNA与RNA水解酶。本文利用ICP、VIS、NMR、酶活性测定等分析方法,首次拓展研究了核酸酶P1与CoCl2的直接相互作用。结果发现:核酸酶P1活性中心Zn?离子可被外加CoCl2中的Co?部分取代,而Co?进入酶的活性中心,生成相应的酶衍生物“Co?-P1”,并影响了酶的催化活性。与此同时还获得了Co?进入核酸酶P1活性中心Zn2位上的酶衍生物1HNMR谱。

CoCl2对NaCl胁迫下大麦生长及幼苗生理指标的影响

为了明确钴对NaCl胁迫的缓解作用,本研究就CoCl2对不同浓度NaCl胁迫下大麦种子的萌发、幼苗生长及内源激素与相关生理指标的影响进行了探讨。结果表明,随着NaCl胁迫程度的加重,大麦种子发芽势、发芽率显著降低,芽与根的生长受到显著抑制。幼苗脱落酸(ABA)与丙二醛(MDA)大量积累,抗氧化酶活性提高。加入0.1mmol/L CoCl2显著提高了NaCl胁迫下大麦种子的发芽势与发芽率,促进了芽与根的生长,抑制了幼苗ABA的积累,同时提高了抗氧化酶活性,降低了MDA的含量,且在较严重NaCl胁迫下作用更明显。CoCl2提高了NaCl胁迫下幼苗(IAA+GA3)/ABA的值,减缓了活性氧(ROS)的积累与膜脂过氧化进程,对种子萌发及幼苗生长起到了促进作用,在一定程度上提高了大麦幼苗对NaCl胁迫的适应能力。

CoCl_2·6H_2O催化合成3,4-二氢嘧啶-2-酮衍生物

dihydropyrimidinones derivatives were synthesized in high yields by one pot three component Biginelli condensation from aldehyde, β keto ester and urea in ethanol,while cobalt chloride hexahydrate was used as a catalyst.This modified Biginellis reaction not only makes the reaction period short,the operation simple,but also gives high yields.

氯化钴预处理对缺氧预适应小鼠缺氧耐受的影响

目的观察氯化钴对缺氧预适应小鼠缺氧耐受的影响。方法用氯化钴(CoCl2)处理小鼠,观察小鼠在重复缺氧中缺氧耐受时间的变化及其离体海马脑片缺氧时群峰电位(PS)消失时间的变化。结果CoCl2预处理小鼠的缺氧耐受时间不随缺氧次数的增加而增加,缺氧耐受性显著增高,CoCl2预处理小鼠离体海马脑片缺氧时群峰电位消失的时间比对照组明显延长,但明显低于预适应组。结论小鼠CoCl2预处理激活缺氧诱导因子-1(HIF-1),可对脑产生保护作用,但其机制可能不同于由急性重复缺氧获得的缺氧耐受机制。

氯化钴预处理减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡

目的 研究氯化钴 (CoCl2 )预处理对大鼠海马神经元缺氧 复氧后凋亡的影响及其机制。 方法 用CoCl2 处理原代培养大鼠海马神经元 ,并使其暴露于无氧环境。用TUNEL染色法和激光共聚焦显微镜分别检测缺氧后细胞凋亡率以及细胞线粒体膜电位和胞内游离钙。 结果 CoCl2 预处理明显减少海马神经元在缺氧 复氧后的凋亡数 ,并对急性缺氧期间海马神经元的细胞内Ca2 +浓度和线粒体膜电位具有稳定作用。 结论 CoCl2 预处理对急性缺氧引起的海马神经元凋亡可能具有保护作用 ,其机制可能与其稳定缺氧时细胞内Ca2 +浓度和线粒体膜电位有关。

CoCl_2对酸胁迫下多花黑麦草种子萌发及幼苗抗性的影响

本研究以多花黑麦草(Lolium multiflorum)为试验材料,采用不同浓度CoCl2溶液浸种的处理方法,就CoCl2对酸胁迫下多花黑麦草种子萌发、幼苗生长及抗逆性的影响进行了探讨。酸胁迫过程中多花黑麦草种子的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数、叶绿素含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性随着处理液酸度的增强显著下降,根长抑制指数、丙二醛(MDA)含量、O2-.产生速率和H2O2含量明显增大,过氧化物酶(POD)活性先增加后下降,细胞膜稳定指数(MSI)下降。0.1mmol·L-1 CoCl2明显促进酸胁迫下多花黑麦草种子萌发,提高幼苗叶绿素含量、芽长、地上部干质量和SOD活性,降低MDA含量和POD活性。从整体上看,0.1mmol·L-1 CoCl2对多花黑麦草种子萌发及幼苗生长有促进作用,并提高了多花黑麦草的抗酸胁迫能力。

二氯化钴对NaCl胁迫下甘草幼苗叶片活性氧水平及抗氧化酶活性的影响

[目的]研究二氯化钴（CoCl2）对NaCl胁迫下甘草幼苗叶片活性氧水平、抗氧化酶活性及脂质过氧化程度的影响.[方法]抗氧化相关酶的活性测定.[结果]在80 mmol/L NaCl胁迫下,随胁迫时间延长甘草幼苗叶片抗氧化酶活性、活性氧水平发生显著变化且脂质过氧化程度逐步加重.在NaCl胁迫前期,幼苗叶片细胞内除过氧化物酶外,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及抗坏血酸过氧化物酶活性显著升高,而活性氧水平和脂质过氧化程度无显著变化.随着胁迫时间的延长,即当80 mmol/L NaCl胁迫延长至30- 35 d时,活性氧水平与脂质过氧化程度的显著提高;在80 mmol/L NaCl溶液中加入40 μmol/L CoCl2,在胁迫的整个过程中相对提高抗氧化酶的活性,在胁迫延长至30- 35 d时显著抑制脂质过氧化水平的上升.[结论]40 μmol/L CoCl2可以相对提高80 mmol/L NaCl胁迫后期（30-35 d）甘草幼苗叶片抗氧化酶的活性,并显著抑制活性氧的产生和脂质过氧化的程度.

CoCl_2所致化学缺氧促进脂肪组织缺血缺氧耐受相关基因表达的研究

目的探讨脂肪组织中是否存在缺氧预适应现象,构建CoCl2致缺氧的缺氧模型。方法不同浓度的CoCl2大鼠腹股沟区皮下层浸润注射,分别用免疫组织化学法和RT-PCR法检测该区脂肪HIF-1α蛋白和HIF-1αmRNA的表达情况。结果用不同浓度的CoCl2行化学缺氧后在不同时间点观察有不同程度的HIF-1α蛋白和HIF-1αmRNA表达,其中,在浓度为20～40mg/kg,时间为3h时脂肪组织中HIF-1α表达达高峰。结论脂肪组织存在缺氧预适应现象;CoCl2的浓度选择20～40mg/kg,时间选择3h时缺氧预适应效果较佳。

二氯化钴致人结肠癌细胞系CacyBP/SIP核转位

目的观察和探讨低氧可否引起人结肠癌细胞系CacyBP/SIP核转位。方法用人结肠癌细胞系HCT-116的cDNA序列,用分子克隆法构建过表达CacyBP/SIP的绿荧光慢病毒载体,转染至结肠癌SW480细胞,用CoCl2作为刺激因子,激光共聚焦显微镜和Western blot检测CacyBP/SIP的表达及定位。结果构建了过表达CacyBP/SIP的慢病毒载体,转染至结肠癌细胞,CoCl2刺激前CacyBP/SIP定位和表达主要在细胞胞质,刺激后CacyBP/SIP定位和表达在细胞胞质和胞核。结论 CoCl2刺激后可致CacyBP/SIP核转位。

氯化钴诱导神经细胞缺氧损伤的机制及应用

Co Cl2是研究神经退行性疾病建立缺氧模型时常用的造模药物,Co Cl2引起缺氧与Co2+置换细胞内的氧感受器类血红素蛋白及一些催化酶中的Fe2+、HIF表达增多、ROS蓄积等都密切相关。本文就Co Cl2诱导神经细胞缺氧的可能机制及应用作一综述。

黄芩苷对CoCl_2诱导的SHSY-5y细胞损伤的保护作用及其对自由基的影响

目的:探讨黄芩苷对氯化钴(CoCl_2)诱导的SHSY-5y细胞损伤的保护作用及其相关作用机制。方法:采用体外培养细胞的方法,建立SHSY-5y细胞CoCl_2损伤模型。分设正常组、CoCl_2损伤组、黄芩苷组(10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)。采用MTT法检测细胞活力,光镜观察各组细胞的形态,采用ELISA法检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、氧自由基(ROS)的变化。结果:同CoCl_2组比较,黄芩苷能明显减轻CoCl_2引起的SHSY-5y细胞的损伤,降低MDA、ROS的含量,减少LDH的外漏,并升高SOD的活性。结论:黄芩苷对CoCl_2诱导的SHSY-5y细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与黄芩苷抗氧化作用相关,继而减少了细胞的损伤。