利用紫外线和氯化锂诱变筛选高产Monacolin K的红曲突变株(英文)

In the 1970's, a Japanese scientist discoveredthat some strains of Monascus spp. when theygrew on rice might produce a certain secondary me-tabolite, known collectively as Monacolin K,which could effectively inhibit HMG-CoA reduc-tase and had many bio-activities such as

紫外-氯化锂复合诱变选育高产α-淀粉酶菌株

以枯草芽孢杆菌BL01为出发菌株,采用紫外-氯化锂复合诱变选育高产α-淀粉酶菌株,确定最佳紫外照射时间为150s、最佳氯化锂浓度为0.3%。采用透明圈法进行初筛,比较HC值(透明圈直径与菌落直径之比);对HC值较大的菌株进行复筛,测发酵上清液α-淀粉酶的酶活,得到高产α-淀粉酶菌株BL01-13,其产α-淀粉酶活性是出发菌株的2.02倍;且该菌株能稳定性遗传,传代5代后,α-淀粉酶酶活稳定在(357.73±4.06)U·mL-1范围内。

微波-氯化锂复合诱变筛选耐受高浓度丁醇菌株

菌株耐受丁醇能力不高是制约提高传统丁醇发酵产量的重要因素之一,选择并构建新的丁醇生产异源重组菌株并提高其耐受高浓度丁醇的能力是提高丁醇能力的有效途径。试验以丁醇耐受性为2.5%的发酵乳杆菌为出发菌株,对其进行微波-氯化锂复合诱变处理,然后经过初筛和复筛,得到丁醇耐受性提高的菌株。结果表明:当微波功率为800 W,频率为2 450 MHz,微波处理时间为55 s,氯化锂浓度为1.2%时,致死率达85.96%,突变菌株丁醇耐受性提高到3%,并且遗传稳定性实验证明其丁醇耐受性遗传稳定。

紫外-氯化锂复合诱变选育泰妙菌素高产菌株

对泰妙菌素生产菌TMⅡ09-003经紫外线(UV)照射180 s后,将菌悬液均匀地涂布于加有0.8%的氯化锂平板上,在避光条件下于温度26℃～27℃、相对湿度60%～65%的环境下培养13～14 d后,挑取单菌落,进行初筛、复筛,用HPLC法测定含量。结果表明,UV照射180 s后,氯化锂加量为0.8%剂量对菌株的致死率为88.6%。对该剂量处理获得的诱变菌株进行了筛选,最终获得4支高产菌株,分别为TMⅡ09-236、TMⅡ09-253、TMⅡ09-441和TMⅡ09-447。

4-羟基环孢素高产菌株诱变筛选及培养基优化

以4-羟基环孢素转化菌Nonomuraea dietziae为出发菌,采用紫外-氯化锂复合诱变的方法,筛选得到一株产量达208 mg/L的稳定遗传菌J263,较出发菌164 mg/L的产量提高26.8%。在此基础上,采取单因素法和响应面法针对诱变菌的发酵培养基碳氮源进行系统优化,并对金属离子的添加进行考察。最终获得最佳的培养基配方(甘油26.5 g/L,糊精11.6 g/L,蛋白胨9.7 g/L,酵母浸粉3.5 g/L,大豆饼粉15.0 g/L,大豆油2.0 g/L,硫酸镁0.40 g/L,硫酸锰0.010 g/L,钼酸铵0.010 g/L)。在最优化条件下,4-羟基环孢素产量可达324 mg/L,较出发菌提高97.6%。

复合诱变选育5-ALA高产菌株及发酵条件优化

以类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)为出发菌株,通过紫外-氯化锂复合诱变,筛选出高产5-ALA的菌株,并通过单因素试验对其发酵产5-ALA条件进行优化。结果表明,在紫外照射80 s、氯化锂浓度0.6%的最适诱变条件下,突变菌落形态大小与产5-ALA能力呈正相关,单菌落直径越大,产5-ALA能力越强,筛选出1株高产5-ALA菌株H80110,其5-ALA产量达24.56 mg/L,较初发菌株提高97.14%。其最佳发酵条件为初始pH 6.6、接种量20%、装液量100 mL/250 mL,且发酵周期缩短为3 d,该菌株具有良好的遗传稳定性。

紫外-氯化锂复合诱变选育高产维生素K_(2)(MK-7)菌株

作为一种新兴的功能性保健食品,维生素K_(2)受到人们越来越多的关注。传统的诱变育种技术是国内外提高菌种产量和性能的重要手段。以本实验室一株产维生素K_(2)(MK-7)的纳豆芽孢杆菌KVK-09为出发菌株,通过对紫外和氯化锂诱变致死率和正突变率的考察,确定紫外-氯化锂复合诱变的最佳诱变条件为紫外照射30s,氯化锂浓度为0.4%。紫外-氯化锂复合诱变后经过摇瓶初筛和复筛,采用高效液相色谱(HPLC)进行检测并筛选突变株。筛选得到一株维生素K_(2)(MK-7)高产菌株KVK-2694,摇瓶发酵水平达到78μg/mL,是出发菌株(43μg/mL)的1.81倍。采用紫外-氯化锂复合诱变,提高了诱变菌株的正突变率,可以有效提高维生素K_(2)(MK-7)的产量,突变菌株KVK-2694遗传稳定性良好,为工业化生产和应用奠定了良好基础。

快速发酵面包酵母菌株的选育

对出发菌株进行紫外-氯化锂复合诱变,通过初筛、复筛选育出高麦芽糖发酵力、低葡萄糖阻遏的面包酵母菌株BM-72,该菌株在不加糖、低糖面团中均表现出较好的发酵力,分别高于出发菌株19.4%和7.3%。

恩拉霉素高产菌株的快速选育

为筛选恩拉霉素高产菌株,降低生产成本,以生产用Streptomyces-483为出发菌株,进行紫外-氯化锂复合诱变。以金黄色葡萄球菌为指示菌,用琼脂块法测定抑菌圈大小,筛选出84株突变株,经摇瓶初筛、复筛、5L发酵罐验证,最终获得4株高产突变株。筛选得到的4株高产突变株经稳定性考察完全适用于生产。

紫杉木霉菌株ZJUF0986原生质体的制备及诱变抗性菌株的选育

通过原生质体诱变,以目标代谢产物木霉菌素为抗性筛选标记选育木霉菌素高产菌株。紫杉木霉野生型菌株ZJUF0986在N15培养基中生长20h的菌丝体,用15mg/mL崩溃酶、30mg/mL蜗牛酶和30mg/mL溶壁酶组合成的混合酶为酶裂解液,以菌丝量∶酶裂解液=1∶2.5(w/v)的比例,在30℃、100r/min条件下酶解90min,原生质体释放量最佳,达到9.42×108个/mL。所制备的原生质体进行氯化锂-紫外复合诱变,紫外照射剂量为60s时的突变率和正突变率最高,筛选到高产突变体菌株UL60-11,其发酵效价比野生型菌株提高67.3%。