降低氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型死亡率的实验研究

[目的]探讨有效控制氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态,提高癫痫大鼠存活率的最佳条件。[方法]选用SD大鼠30只,腹腔注射氯化锂和匹罗卡品后,诱发大鼠癫痫持续状态1 h后,随机分为A组：只给东莨菪碱;B组：东莨菪碱＋安定;C组：东莨菪碱＋水合氯醛。比较3组大鼠间癫痫发作的持续状态、癫痫大鼠的死亡率、死亡发生的时间。[结果]A组大鼠癫痫发作的持续状态为16-20 h,死亡率为87.5%;B组大鼠在用药后15 min内可控制癫痫发作的持续状态,死亡率为62.5%;C组大鼠在用药后3-10 min可完全控制大鼠的癫痫发作持续状态,大鼠全部存活。[结论]水合氯醛可有效控制氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠的癫痫持续状态,提高癫痫大鼠的存活率。

氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠成年后少突胶质细胞转录因子Olig2在脑白质区的表达

目的探讨氯化锂-匹罗卡品(lithium-pilocarpine,LI-PILO)点燃幼鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE),成年后发展为自发反复性癫痫发作(spontaneous recurrent epileptic seizure,SRS)的大鼠脑内转录因子Olig2的表达。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导幼鼠SE模型,应用多道生理信号采集处理系统检测大鼠脑电图(electroencephalogram,EEG)痫样活动波和Nissl染色方法观察神经元鉴定,证实SRS模型大鼠诱导成功;应用免疫组织化学染色技术观察少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)转录因子Olig2变化。结果 SRS模型组脑电图与正常对照组相比,可见频发尖波、棘-慢、尖-慢综合波;海马CA1、CA3和齿状回区Nissl染色显示神经元数目减少,部分细胞变性和坏死。SRS模型组在胼胝体与扣带回区域内Olig2的免疫组织化学染色细胞数量明显减少,与正常对照组相比有显著差异。结论氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠,成年后仍伴有慢性自发反复性癫痫发作的脑内少突胶质细胞转录因子Olig2的表达明显降低。

全蝎醇提物与丙戊酸干预氯化锂-匹罗卡品慢性点燃模型大鼠癫痫发作的疗效比较

目的探讨全蝎醇提物(Ethanol Extracts of Scorpion,EES)与丙戊酸(Valproic Acid,VPA)干预氯化锂-匹罗卡品(Lithium Chloride-Pilocarpine,Licl-Pilo)慢性点燃模型大鼠癫痫发作的疗效。方法 186只成年雄性大鼠除6只设为正常对照组外,其余均建立Licl-Pilo慢性点燃大鼠模型,造模成功后分为模型组、VPA干预组、低EES剂量干预组(EESL干预组)、中EES剂量干预组(EESM干预组)和高EES剂量干预组(EESH干预组)各36只。正常对照组、模型组分别灌胃给予等容积的生理盐水,VPA干预组灌胃给予VPA溶液[浓度为120 mg/(kg.d)],EESL干预组、EESM干预组、EESH干预组灌胃给予EES溶液[浓度分别为290 mg/(kg.d)、580 mg/(kg.d)及1160 mg/(kg.d)],观察30天内致痫大鼠慢性癫痫自发性发作(spontaneous seizures,SRS)、发作级别、发作次数,并进行组间比较。结果 Licl-Pilo慢性点燃模型鼠的造模成功率为85.65%,各实验组SRS发生频率5～15次/周。治疗后,EESM干预组、EESH干预组和VPA干预组癫痫大鼠痫性发作级别及SRS发作次数与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);EESL干预组治疗效果不明显,与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论一定剂量的EES能显著降低癫痫大鼠的自发性发作,且与疗效呈明显的量效关系,即剂量越大疗效越好,该结果为EES的抗癫痫作用提供了行为学依据。

氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠脑内c-jun和c-fos蛋白的表达

目的 探讨幼鼠癫痫持续状态 (SE)后脑内 c- jun和 c- fos蛋白的表达。方法 采用氯化锂 -匹罗卡品腹腔注射制成幼鼠 SE模型。应用免疫组化及常规病理检查方法观察 c- jun和 c- fos蛋白的表达。结果 注射匹罗卡品 1h后在海马结构和大脑皮质的大部分区域出现少量的 c- jun和 c- fos免疫反应阳性细胞 ,3～ 6 h强烈表达 ,并达到高峰 ,2 4 h后明显减弱 ,72 h近乎正常对照水平。地西泮干预组幼鼠脑内有少量的 c- jun和 c- fos免疫反应阳性细胞 ,略多于生理盐水对照组。海马结构区的 c- jun和 c- fos免疫反应阳性细胞明显高于皮质区。SE组幼鼠的 CA1 、CA3和齿状回区可见到许多神经元发生变性和坏死。结论 c- jun和 c- fos蛋白表达及其表达程度与 SE后脑损伤的部位和分布有关 ;地西泮有对抗匹罗卡品致痫作用 ,可能对脑组织有保护作用。

熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤影响的研究

[目的]探讨熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤的影响。[方法]应用氯化锂-匹罗卡品复制难治性癫痫大鼠模型。观察实验大鼠的反复自发性发作(SRS)情况、海马形态学改变和苔藓纤维出芽(MFS)。[结果]1)治疗组癫痫大鼠SRS的发作次数均明显低于模型组(P<0.01)。2)光、电镜结果显示:各治疗组中联合治疗组海马结构损伤最轻。3)Timm染色结果显示:联合治疗组对海马CA3区及齿状回MFS有较强的干预作用,优于单药治疗组。这种干预作用的强弱与熄风胶囊的剂量呈现一定正相关关系。[结论]熄风胶囊单药及与卡马西平(CBZ)联合用药能够有效的控制氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的SRS,降低海马神经元损伤的程度,抑制苔藓纤维异常出芽。

口服补液盐降低氯化锂-匹罗卡品惊厥持续状态大鼠死亡率的研究

目的探讨通过胃管灌胃改良口服补液盐（oral rehydration salts,ORS）降低氯化锂-匹罗卡品诱发惊厥持续状态（status epilepticus,SE）模型的死亡率的方法。方法选用成年组（60 d）SD大鼠30只和幼年组（20 d）SD大鼠45只,随机分为成年SE＋ORS组、成年SE组、幼年SE＋ORS组、幼年SE组、幼年血糖组各15只。经腹腔注射氯化锂和匹罗卡品,诱发大鼠惊厥发作,惊厥60 min后,给予安定止惊。各ORS组于SE后1、12、24 h根据不同年龄予以不同剂量改良ORS灌胃。其余各组不给予处理。记录实验大鼠惊厥发作情况,惊厥前后体重变化及死亡情况;血糖测定组于SE后8 h取血检测血糖,探索降低该模型死亡率的方法。结果 （1）各组惊厥后体重均降低,约占体重的5%~8%。（2）氯化锂-匹罗卡品惊厥持续状态模型死亡率较高,幼年组40.00%,成年组57.14%;死亡发生时间集中在惊厥后24 h内,72 h后死亡数趋于平稳。（3）SE后实验大鼠血糖明显降低,给予ORS液灌胃后,血糖趋于正常水平。（4）以改良ORS灌胃后,幼年组和成年组72 h内死亡率明显降低。结论 SE后改良ORS液灌胃有效改善实验动物死亡率,是有效提高其生存率的方法。

氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠海马结构损伤的形态学及苔藓纤维发芽研究

摘 要：目的 观察幼鼠致病后海马的组织病理学改变。方法 采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制成幼鼠癫痫持续状态模型，应用常规病理及电镜观察海马结构的形态学改变，同时应用Timm组织化学染色方法进行苔藓纤维发芽的研究。结果 海马区神经元可见变性、坏死改变，以CA1区、CA3区为重。Timm染色见齿状回内分子层和CA3区下锥体层苔藓纤维发芽增加。结论（1）氯化鲤-匹罗卡品诱导的幼鼠癫痫持续状态可造成海马区神经元损伤；（2）幼鼠癫痫持续状态后海马CA1、CA3区神经元损伤较重；（3）幼鼠癫痫持续状态后可致苔藓纤维发芽增加。

氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后脑内c-fos蛋白表达的动态观察

目的在氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态模型中观察c-fos蛋白表达的时程变化。方法采用氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态大鼠模型,观察大鼠的行为改变,并用免疫组化方法观察癫痫持续状态后不同时间点脑内c-fos蛋白表达的变化。结果癫痫持续状态后6h,1d时脑内c-fos蛋白表达最高,3d时表达次之,7d时极少数表达并接近对照组表达水平。结论癫痫持续状态后脑内c-fos蛋白表达持续较长时间;在此时期应给予干预措施,以减低脑内神经元损伤可能。

氯化锂-匹罗卡品癫痫模型研究

氯化锂-匹罗卡品(LI-PILO)点燃大鼠癫痫模型具有同人类癫痫持续状态或颞叶癫痫相似的特征,是理想的颞叶癫痫模型。本文重点对模型的制作、病理改变机制及致病机制等进行综述。

氯化锂-匹罗卡品致大鼠的模型研究

目的:探讨氯化锂(LiCl)-匹罗卡品(PILO)致大鼠的行为学特征及海马病理改变。方法:建立改良的LiCl-PILO致大鼠模型,观察大鼠行为,尼氏染色观察不同时间点大鼠海马病理改变,FJB染色观察大鼠海马神经元及其轴突、树突变性。结果:大鼠腹腔注射LiCl-PILO后,癫持续状态(SE)诱发成功率为92.5%,死亡率21.25%;尼氏染色结果显示,实验组大鼠海马神经元于SE后7d和60d缺失最明显,与对照组相比,齿状回颗粒细胞减少(P<0.05),CA1、CA3区锥体细胞和门区神经元均显著减少(P<0.01);FJB染色结果显示,实验组大鼠海马神经元于SE后7d和60d变性最明显,主要集中在CA1、CA3区锥体细胞层和门区,SE后7d海马腔隙-分子层亦可见变性的神经元轴突和树突。结论:改良后的LiCl-PILO致模型SE诱发成功率高,死亡率低,可基本复制人类颞叶癫的发作特点及病理改变;颞叶癫海马神经元的缺失可能是由于神经元的变性死亡。

穴位埋线对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马神经元损伤的保护作用研究

目的观察穴位埋线对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法 80只SD雄鼠随机分为空白组、模型组、西药组及埋线组,每组20只。制造癫痫模型,分别进行相应的干预,28 d后对各组大鼠进行Racine分级评定并记录各组癫痫平均发作时间;处死取材,行HE染色及免疫组化。结果癫痫发作程度及平均发作时间:模型组大鼠可出现典型地癫痫发作征象(P<0.01);与模型组比较,西药组及埋线组发作程度明显减轻,平均癫痫发作时间明显减少(P<0.05)。海马CA1区HE染色结果:模型组大鼠存在大量调亡细胞;埋线组及西药组可见少量凋亡细胞。海马Capase-3阳性细胞数及蛋白的表达:模型组大鼠海马阳性细胞数及蛋白表达明显增多 (P<0.05);与模型组比较,埋线组与西药组均明显减少(P<0.05)。以上结果中,西药组与埋线组结果无统计学差异(P>0.05)。结论癫痫可造成大鼠海马神经元损伤,穴位埋线可以减缓海马神经细胞丢失程度,减缓细胞凋亡进程,减弱癫痫发作程度,起到脑保护作用。

氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠脑内c-fos蛋白的表达

目的：探讨c—los蛋白在癫痫丸鼠幼鼠脑内的表达情况及其意义。方法：采用氯化锂一匹罗卡品致痫模型，应用免疫组化反常规病理检查的方法进行研究。结果：在正常大鼠幼鼠脑内未见c—f0S免疫反应(IR)阳性细胞。氯化锂一匹罗卡品致痫1小时后脑内开始出现C—fos免疫反应阳性细胞，6小时达到高峰，12小时以后开始下降，24小时后明显减少，72小时后消失。C—los主要在海马的CA3区、CA4区、CA1区、齿状回、皮质、杏仁核表达，并随着时间的推移表达依次减少。同时，常规病理检查发现上述区域散在出现受损的异常神经元。结论：癫痫发作可诱导c—fos在大鼠幼鼠脑内广泛表达，C—fos可作为神经元受损的一个早期指标。

cox-2抑制剂塞来昔布对氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后脑内cox-2、Glu表达的影响

目的观察环氧化酶-2(cox-2)抑制剂塞来昔布对氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后脑内cox-2、谷氨酸(Glu)表达的影响,探讨其抗癫痫的作用机制。方法采用免疫组化法对氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫大鼠模型脑内cox-2和Glu的表达进行测定,并研究塞来昔布对癫痫影响及可能的作用机制。结果癫痫模型组大脑皮质及海马区cox-2和大脑皮质Glu免疫反应较空白对照组明显增多(P<0.05),给药组免疫反应较模型组明显减少(P<0.05)。结论癫痫持续状态后脑内cox-2、Glu表达明显增加;塞来昔布能够有效减轻脑内cox-2、Glu的表达,塞来昔布可能具有减轻癫痫发作和保护神经元的作用。

痫宁片对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠大脑神经元损伤及c-fos表达的影响

目的观察痫宁片对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠大脑神经元损伤及c-fos表达的影响,探讨其抗痫的可能机制。方法将52只SD大鼠随机分为空白组、模型组、对照组和中药组,采用氯化锂-匹罗卡品制成慢性癫痫大鼠模型,分别给予蒸馏水、丙戊酸钠、痫宁片灌胃。常规病理切片观察大鼠大脑神经元损伤情况,免疫组化SABC法检测大鼠大脑c-fos的表达。结果对照组与中药组大鼠大脑神经元水肿、固缩等损伤较模型组明显减轻(P<0.05),对照组与中药组大鼠大脑c-fos表达较模型组明显降低(P<0.05),中药组与对照组比较,差异无统计学意义。结论痫宁片可明显减轻氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠大脑神经元水肿、固缩等损伤,降低大脑内c-fos水平,对癫痫大鼠大脑具有保护作用,是理想的抗癫痫中成药,其抗痫机制可能与降低大脑内c-fos的表达有关。

艾芬地尔干预后氯化锂-匹罗卡品致大鼠的慢性期脑电图特征

目的:了解艾芬地尔干预对氯化锂(LiCl)-匹罗卡品(Pilo)致大鼠脑电图随时间变化的特征。方法:通过腹腔注射LiCl-Pilo建立癫动物模型。60只雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组和艾芬地尔干预组,分别在造模后第7、15、30、60天四个时间点观察各组大鼠行为、脑电图改变,每一个时间点5只大鼠。结果:对照组无性发作,经过4-20天的潜伏期后,干预组及模型组的脑电图波幅及频率骤然减低,在慢性期干预组较模型组的波幅逐渐增高,频率逐渐增快,但仍未达发作当时的水平,且两组间比较差异无统计学意义。干预组较模型组更早更快趋于正常化。结论:艾芬地尔在LiCl-Pilo致大鼠模型中具有抗惊厥作用,慢性期脑电图有特征性改变。

氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达circRNA的筛选及功能分析

目的:探究氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达共价闭合、单链环状RNA(circRNA)及功能分析。方法:通过构建氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型,取癫痫大鼠及对照大鼠海马组织通过Illumina高通量测序平台进行转录组测序,并通过EdgeR包对circRNA进行差异分析、通过R语言进行GO及KEGG信号通路富集分析,通过Targetscan与miRanda软件进行circRNA与miRNA互作分析寻找circRNA核心调控靶标。结果:对照组及癫痫组大鼠海马的circRNA进行差异分析获得的262个差异表达circRNA,信号通路富集分析发现与胞蛋白修饰过程、蛋白质变性过程、树突形态调控、神经元分化调节、离子跨膜转运的调节等生物过程相关。并进一步确定了可能与circRNA存在互作的核心调控miRNA,包括miR-322-5p、miR-322-3p、miR-323-5p、miR-323-3p、miR-301a-5p、miR-301a-3p、miR-324-5p、miR-324-3p等。结论:本研究筛选了氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠与正常大鼠脑组织差异circRNA,系统地分析了其可能的作用功能机制,为癫痫诊断或治疗寻找到可靠的生物标志物。

PTEN在氯化锂-匹罗卡品癫痫模型中的表达研究

目的:检测第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在癫痫模型大鼠中的表达情况,初步探讨其在癫痫发病中的作用。方法:成年雄性SD大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品(lithium-pilocarpine)构建癫痫模型,分别在癫痫发作后不同时间点(1 d、3 d、7 d、14 d、30 d)提取海马组织,利用荧光定量PCR和western blot分别测定PTEN mRNA和蛋白质的表达。结果:荧光定量PCR和western blot显示,PTEN mRNA和蛋白质在癫痫发作后1 d的表达显著降低(P<0.05),到30 d时仍维持在较低的水平(P<0.05)。结论:PTEN在氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马组织中表达的降低,提示PTEN可能参与了癫痫的发生发展过程。

钠氢交换体1在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织内的表达

目的 检测钠氢交换体1(NHE1)在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织中的表达。方法 选取雄性SD大鼠90只,其中45只采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品构建癫痫模型作为模型组,45只采用腹腔注射生理盐水组作为对照组;取模型组和对照组大鼠各36只,采用蛋白印迹(Western blot)法检测造模后第1、3、7、14、30及60天时2组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白的定量表达;取模型组和对照组大鼠各3只,采用免疫组织化学分析造模后第14天时2组大鼠海马组织NHE1的蛋白表达;取模型组和对照组大鼠各6只,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测造模后第14天2组大鼠海马组织NHE1 m RNA的的表达特点。结果造模后第1、3、7、14、30及60天时,模型组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白表达较对照组增高(P<0.05),且模型组大鼠海马组织NHE1蛋白表达从第1天开始增高、第14天时达到高峰、第30天和第60天逐渐下降(P<0.05);造模后第14天时,模型组大鼠海马组织不同亚区NHE1阳性表达较对照组相应区域增强,且NHE1m RNA水平也高于对照组(P<0.05)。结论 氯化锂-匹罗卡品点燃模型癫痫大鼠海马组织中NHE1表达随时间呈动态变化,且在第14天表达最高,提示NHE1可能与癫痫的发生发展过程密切相关。

氯化锂-匹罗卡品癫痫模型中海马神经元钾通道Kv1.1的表达变化

目的:研究A型钾通道亚型Kv1.1在癫痫大鼠海马神经元中的蛋白表达和电生理功能变化,初步探讨Kv1.1在癫痫发生中的作用和意义。方法:2019年1-12月选取24只成年雄性SD大鼠,根据随机数字表法分为对照组和模型组,每组12只。模型组通过向腹腔注射氯化锂-匹罗卡品制备癫痫模型,对照组采用0.9%氯化钠溶液代替处理。每组6只进行免疫印记和电生理检测。利用Western blot方法检测并比较两组海马区Kv1.1的蛋白表达。利用全细胞膜片钳技术记录并观察两组海马区锥体神经元细胞膜上总的外向钾离子电流和Kv1.1介导的钾电流变化。结果:模型组海马区Kv1.1的蛋白表达量低于对照组(P<0.05)。全细胞膜片钳结果显示:与对照组相比,癫痫模型组海马区锥体神经元总的外向钾电流峰值曲线右移,钾电流峰值从膜电压-40 mV开始明显下降(P<0.05)。与对照组相比,模型组海马区锥体神经元Kv1.1介导的钾电流峰值曲线右移,峰值从膜电压-30 mV开始明显下降(P<0.05)。结论:癫痫模型中海马区Kv1.1的蛋白表达降低和其介导的钾电流的下降,提示其表达变化可能与癫痫的发生相关。

氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态小鼠海马星形胶质细胞改变

目的观察癫痫小鼠大脑海马星形胶质细胞改变,探讨星形胶质细胞在癫痫持续状态(SE)中的作用机制。方法选取健康C57BL/6小鼠P7和P14各20只,每个年龄组分两组,SE组采用氯化锂-匹罗卡品诱发SE,对照组给予等剂量0.9%氯化钠注射液,连续干预7d。分别收集P14和P21小鼠脑组织进行免疫组化染色,比较两组星形胶质细胞数量。结果在P14和P21小鼠中,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达于海马区和齿状回(DG),P21组小鼠GFAP阳性细胞数明显高于P14,且SE组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论海马区星形胶质细胞数量可能随年龄而变化,SE后海马可能发生了反应性星形胶质细胞增生。