高效液相色谱-串联四级杆质谱法测定保健食品中氯化高铁血红素

本研究旨在建立保健食品中氯化高铁血红素定性、定量测定的高效液相色谱-串联四级杆质谱方法,为加强氯化高铁血红素类保健食品的功效成分监督检查、规范其生产提供技术支持。供试品以2mL二甲亚砜为第一步提取溶剂,以甲醇为稀释溶剂,经Agilent ZORBAX Eclipse plus C_(18)RRHD色谱柱(3.0 mm×50 mm,1.8μm)分离,以0.1%的甲酸溶液-乙腈为流动相,在0.3 mL/min的流速下梯度洗脱。质谱采用ESI源的正模式条件下多反应监测模式,以保留时间和离子比率定性,以定量离子对峰面积进行外标法定量。氯化高铁血红素在线性范围内相关性较好,相关系数为0.9991;平均回收率为90.2%~98.5%,RSD为0.2%~0.3%;检出限为18 ng/g;定量限为54 ng/g。该方法专属性较好、灵敏度较高、检验快速准确,适用于保健食品中氯化高铁血红素的监督检测及质量控制。

K562细胞经氯化高铁血红素诱导后分化相关基因的筛选

目的 研究K5 6 2细胞经氯化高铁血红素 (Hemin)诱导后在cDNA分子水平上的表达差异。 方法用限制性显示 (RD PCR)方法寻找K5 6 2细胞在经Hemin诱导后的cDNA差异表达片段。 结果 筛选到差异表达片段 4条 ,并进行了序列测定与同源性分析。 结论 K5 6 2细胞分化是多基因参与的结果 ,这些分化相关基因的共同作用使K5 6

氯化高铁血红素诱导K562细胞中β-珠蛋白基因表达的研究

以绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报道基因,构建了在β-珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT-PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素（Hm）对K562细胞中β-珠蛋白基因表达及重组载体HG在K562细胞中瞬时表达的影响。结果显示:用30μmol/L Hm诱导K562细胞24、28及72h后,不仅其γ-珠蛋白mRNA水平升高,其β-珠蛋白mRNA水平也明显上升,而且这种诱导作用在诱导24、48h后比较明显;Hm还可增强重组表达载体HG在K562细胞中的瞬时表达。提示Hm诱导红系分化的机理可能与γ-β-珠蛋白基因的转换机制相关。

氯化高铁血红素治疗小儿缺铁性贫血疗效观察

缺铁性贫血是小儿常见多发病。自1990年以来,我们用高铁血红素治疗小儿缺铁性贫血,疗效甚为满意,现报告如下。资料和方法一、病例选择我们按照全国统一诊断标准,于1990年4月对洋中托儿所202名儿童进行缺铁性贫血普查。经询问病史、体检及末梢血检查,确诊为缺铁性贫血49例,并将其随机分为观察组和对照组。观察组24例,其中男15例,女9例;平均年龄4.3岁。对照组25例,其中男15例,女10例;平均年龄4.5岁。按贫血程度,观察组轻度贫血17例。

氯化高铁血红素对血红蛋白合成及红细胞生成素受体的诱导作用

目的研究氯化高铁血红素（Ｈｍ）对红系细胞（Ｋ５６２细胞）血红蛋白合成及红细胞生成素（ＥＰＯ）受体表达的诱导作用。方法采用不同剂量Ｈｍ对体外培养Ｋ５６２细胞进行诱导，用联苯胺染色对诱导细胞血红蛋白进行定性测定，通过放射性标记配基结合实验测定Ｈｍ诱导后Ｋ５６２细胞膜ＥＰＯ受体的变化。结果诱导组血红蛋白阳性细胞比例由对照组的３．５％增加到３４．３％（Ｐ＜０．０５）。Ｋ５６２细胞对ＥＰＯ的诱导作用不敏感，而经Ｈｍ体外诱导４８ｈ后，其对ＥＰＯ的敏感性明显增加。诱导后Ｋ５６２细胞膜ＥＰＯ受体的数量由对照组的３～８个／细胞，诱导组为６～２５个／细胞（Ｐ＜０．０１）。

氯化高铁血红素对人晚期内皮祖细胞数量和血红素加氧酶-1表达的影响

目的观察氯化高铁血红素(简称血红素)在体外对人晚期内皮祖细胞(EPCs)数量和血红素加氧酶-1(HO-1)的影响。方法从健康分娩产妇脐带静脉血中分离提取单个核细胞,体外培养诱导分化为晚期EPCsO在不同体积分数胎牛血清(FBS)条件下用血红素(10μmol/L)干预并设置对照组,干预24h后,锥虫蓝染色计数,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞毒性,Western印迹法检测HO-1的表达。结果在低体积分数(0.2%)FBS条件下,与对照组相比,血红素减少了晚期EPCs的数量,但随着FBS体积分数的逐渐提高,血红素对晚期EPCs增殖的抑制能力减弱,促增殖能力逐渐增强(P<0.05),且诱导HO-1的表达逐渐提高。结论细胞体外培养中,FBS体积分数在血红素对晚期EPCs数量和活性的作用方面有着重要的影响,且在高体积分数(5%)FBS条件下,血红素促进细胞增殖的效应初步推测是通过诱导HO-1高表达来实现的,但其具体机制和其中涉及的信号转导通路有待进一步探讨。

氯化高铁血红素诱导血红蛋白合成的作用机制

氯化高铁血红素(Hemin,Hm)通过对红系特异性转录因子(NF-E2)、铁效应性元件连接蛋白(IRE-BP)、血红素调节性翻译抑制因子以及钙调蛋白依赖性蛋白激酶等反式作用元件活性的调节,增加红系特异性血红素合成所需酶的基因(σ-氨基γ-酮戊酸合成酶及亚铁螯合酶基因)以及γ、β珠蛋白基因的表达。Hm还可通过增加红系细胞EPO受体mRNA的表达,来提高诱导细胞对EPO的敏感性。

高效液相色谱法测定营养强化剂中氯化高铁血红素的含量

目的建立高效液相色谱法(high performance chromatography,HPLC)测定营养强化剂中氯化高铁血红素的含量。方法采用0.1 mol/L氢氧化钠溶液提取样品,以为色谱分析柱,流动相为0.6%乙酸:甲醇=30:70(V:V),流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长399 nm,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器进行检测,以峰面积外标法定量。结果该方法在40～140 mg/L范围内线性关系良好,相关系数r为0.9993,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于1.38%。结论该方法操作简单、快速、准确、灵敏度高,适合测定营养强化剂中氯化高铁血红素的含量。

氯化高铁血红素对ADMA所致内皮细胞损伤的保护作用

目的研究氯化高铁血红素(Hemin)对非对称二甲基精氨酸(ADMA)诱导的血管内皮损伤的保护作用及其与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),MTT法检测Hemin(5～20μmol/L)对ADMA(3～30μmol/L)诱导细胞损伤的影响,Western blot法检测胞内MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR技术评价MMP-9、iNOS及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)mRNA的表达量,ELISA法检测细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平变化。结果 ADMA(3～30μmol/L)能使细胞活性降低,其损伤呈剂量依赖性,10μmol/L的ADMA显著升高了MMP-9、iNOS、MCP-1和TNF-α的表达水平(P<0.01)。而10μmol/L的Hemin预处理能明显干预ADMA对细胞活性的影响,并能下调ADMA诱导的MMP-9、iNOS、MCP-1和TNF-α的表达,与对照组相比差异具有显著性(P<0.01)。结论 Hemin对ADMA所致内皮细胞损伤有保护作用,且与MMP-9和iNOS水平降低有密切关系。

氯化高铁血红素诱导K562细胞红系分化对其细胞周期的影响

细胞周期的测量是细胞增殖动力学的研究基础。通过添加30μmol·L-1氯化高铁血红素(Hemin)诱导人慢性髓系白血病K562细胞红系分化,利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)与7-AAD双染的方法检测Hemin诱导的K562红系分化细胞对细胞周期各期比例的影响,未诱导的K562细胞周期各期比例作为对照,检测发现Hemin诱导的K562红系分化细胞对其细胞周期相对值无明显影响。应用BrdU间隔染色结合流式细胞术的方法,通过分析BrdU间隔染色后BrdU阳性细胞群的动态变化规律,从而推算出K562红系分化细胞的倍增时间及细胞周期各期时长。根据测量结果发现,未诱导的K562细胞总倍增时间约为20 h,与通过生长曲线公式法计算倍增时间的结果相符,Hemin诱导的K562细胞的细胞周期倍增时长约为23 h。Hemin诱导的K562红系分化细胞较未诱导的K562细胞倍增时间与各期时长无明显差异。因此,Hemin诱导K562细胞红系分化对其细胞周期绝对值及相对值均无明显影响。

氯化高铁血红素对血管性痴呆大鼠认知功能及脑红蛋白表达的影响

目的观察氯化高铁血红素(Hemin)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠认知功能和脑红蛋白(Neuroglobin,Ngb)表达的影响,探讨Ngb在VD发生发展中的作用及可能机制。方法采用大鼠双侧颈总动脉结扎法(2-VO)建立VD动物模型,54只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、VD组和Hemin组,每组又随机分为1周、4周、8周三个亚组(n=6),应用Morris水迷宫实验测定动物的学习记忆能力,HE染色观察脑组织病理学改变,Western blot方法检测Ngb和Tau蛋白的表达及Tau蛋白磷酸化水平。结果与假手术组比较,血流阻断后VD组及Hemin组大鼠逃避潜伏期延长(均P<0.05),穿越平台次数减少(均P<0.05)。Hemin组大鼠学习记忆成绩优于相应时间点VD组,其中穿越平台次数增加[1周:Hemin组(7.00±0.89)次,VD组(5.50±1.22)次,t=2.42,P<0.05;4周:Hemin组(5.33±0.52)次,VD组(3.50±1.04)次,t=3.84,P<0.01;8周:Hemin组(6.50±0.55)次,VD组(4.50±1.05)次,t=4.14,P<0.01]。VD组和Hemin组Ngb和磷酸化Tau(p-Tau)表达均增加(P<0.01),与VD组比较,Hemin组Ngb表达升高[1周:Hemin组(3.45±0.23),VD组(2.56±0.08),t=5.67,P<0.01;4周:Hemin组(3.08±0.13),VD组(2.28±0.08),t=7.96,P<0.01;8周:Hemin组(2.82±0.12),VD组(2.05±0.10),t=7.28,P<0.01],同时p-Tau蛋白表达下降[1周:Hemin组(1.57±0.12),VD组(2.40±0.15),t=7.62,P<0.01;4周:Hemin组(2.14±0.21),VD组(3.18±0.14),t=8.23,P<0.01;8周:Hemin组(1.83±0.13),VD组(2.79±0.19),t=4.91,P<0.01];VD组和Hemin组大鼠的学习记忆能力与Ngb的表达呈负相关(r=-0.892,P<0.01),与Tau蛋白磷酸化程度呈高度正相关(r=0.932,P<0.01)。结论Hemin可诱导Ngb在VD大鼠高表达并抑制Tau蛋白磷酸化,Ngb可能通过调控Tau蛋白磷酸化在VD中发挥了神经保护作用。

大鼠5/6肾切除肾脏中血红素氧合酶-1免疫组织化学及病理学研究

目的 探讨血红素氧合酶 1(HO 1)在慢性肾功能不全 (CRF)大鼠肾脏中的表达、活性变化以及对肾脏病理学的影响。方法 将 5 / 6肾切除大鼠分为假手术组、CRF组和Hemin组。第 2次术后 8周观察肾组织病理学改变 ,免疫组化方法检测HO 1在大鼠肾脏中的表达、分布 ,检测血清及肾组织中HO 1活性。结果 HO 1主要分布于肾皮质的近端、远端小管以及肾髓质的集合管、髓袢的上皮细胞内 ;HO 1在CRF大鼠肾脏中表达及活性降低。病理学检查显示 ,Hemin组大鼠肾小球系膜增生程度明显低于CRF组大鼠 ,同时肾间质炎性细胞浸润及纤维化程度也较CRF组轻。结论 HO 1在CRF大鼠肾脏中表达及活性降低 ,HO 1可明显减轻CRF大鼠肾脏病理学损伤 ,延缓肾脏病变。

血红素加氧酶-1诱导对鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在鼠肝缺血再灌注损伤肝组织中的表达及其作用。方法建立小鼠部分肝脏热缺血再灌注损伤模型,36只清洁级Balb/C小鼠随机分为3组: 假手术组(S组)、缺血/再灌注损伤组(I/R组)、HO-1诱导剂氯化高铁血红素(hemin)预处理组(HM组)。免疫组化半定量分析肝组织HO-1蛋白的表达,检测血清AST和ALT,肝组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,并观察肝组织的病理变化。结果与S组比较,I/R组HO-1蛋白表达显著增强,hemin预处理后,HO-1蛋白表达较I/R组增高(P<0．01)。I/R组AST,ALT活性和MDA的含量显著高于S组,而HM组均显著低于I/R组(P<0．01);I/R组SOD活性下降,而HM组显著高于I/R组(P<0．01)。HM组病理损伤程度明显轻于I/R组。结论 HO-1在鼠肝缺血再灌注损伤肝组织中表达上调,对肝脏具有保护效应。

血红素加氧酶-1在5/6肾切除大鼠肾脏中的表达及活性

目的:探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在慢性肾衰竭大鼠肾脏中的表达、活性及其诱导剂对肾脏病变的保护作用。方法:将大鼠随机分为三组:A组假手术组,B组慢性肾衰竭组,C组给予氯化高铁血红素(Hemin)灌饲慢性肾衰竭组,8周后检测大鼠血压,肾功能,血、尿蛋白,观察肾组织病理改变,免疫组织化学观察HO-1的表达。结果:C组较B组蛋白尿水平明显降低(P<0.05),肾功能明显降低(P<0.05),但较A组明显升高(P<0.05),肾小球硬化及肾小球基底膜增生程度以及肾间质纤维化程度虽较B组减轻,但差异无显著性意义。免疫组织化学显示,B组HO-1的表达较A组、C组均明显降低(平均光度、面密度)(P<0.05),但肾组织中B组、C组之间HO的活性无统计学意义,B、C组较A组均明显降低(P<0.05),血清中HO的活性B组较C组明显降低(P<0.05)。结论:HO-1在慢性肾衰竭大鼠肾脏中的表达及活性是降低的,但其诱导剂对慢性肾衰竭大鼠肾脏病变具有部分保护作用。其机制尚可待进一步研究。

血红素氧合酶-1在慢性肾功能不全大鼠肾中的表达及其作用机制

目的 :探讨血红素氧合酶 1(HO 1)在慢性肾功能不全 (CRF)大鼠肾脏中的表达、活性变化以及对肾脏的作用 ,并探讨其作用机制。方法 :2 1只SD大鼠等分为 3组 :假手术组、CRF组和Hemin组。后 2组大鼠在相隔 1周的二次手术中接受肾 5 / 6切除术。第二次术后 8周检测各组血压、尿蛋白及其与尿肌肝比值、血清尿素氮、肌酐 ;观察肾组织病理改变。检测血清及肾组织中HO 1活性及促红细胞生成素 (EPO)含量 ;免疫组化方法检测HO 1在肾脏中的表达、分布。结果 :Hemin组血压、尿蛋白、血肌酐及尿素氮水平明显低于CRF组 (P <0 .0 5 ) ;肾小球系膜增生、间质炎性细胞浸润及纤维化程度明显减轻 (P <0 .0 5 ) ;免疫组化及HO 1活性检测显示 ,HO 1主要分布于肾小管上皮细胞内 ,在CRF大鼠肾脏中 ,HO 1表达及活性降低 ;Hemin组血清及肾组织EPO含量明显高于CRF组。结论 :HO 1通过上调血清及肾组织中EPO含量 。

血红素加氧酶-1的表达对实验性肝硬化内毒素血症大鼠的影响

目的:探讨血红素加氧酶-1(HO-1)的表达对实验性肝硬化内毒素血症大鼠的影响。方法:32只健康雄性wistar大鼠,随机分为4组,正常+脂多糖(LPS)(对照组)、肝硬化+生理盐水对照组(TAA组)、肝硬化+LPS组(TAA+LPS组)、肝硬化+LPS+hemin(氯化高铁血红素)(HM组)。用硫代乙酰胺(TAA)诱导肝硬化模型时间共计10周,对照组自由饮清水。于模型造成后,向对照组、TAA+LPS组、HM组大鼠腹腔内注入LPS3 mg/kg;TAA组大鼠腹腔内注入等量的生理盐水;HM组于注射LPS 12 h前,腹腔注射HM(40 mg/kg),并在注入LPS 6 h后,各组动物经腹主动脉穿刺采全血观察血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基酸转移酶(AST)、一氧化氮(NO)及丙二醛(MDA)的表达。留肝组织用免疫组织化学法观察HO-1的表达。结果:对照组、TAA组、TAA+LPS组、HM组血浆中的ALT/AST、MDA、NO依次升高差异有显著性(P<0.05),对照组、TAA、TAA+LPS、HM组各组大鼠的灰阶值显著依次降低,且有明显差别(P<0.05)。结论:在实验性的肝硬化内毒素中尽管HO-1的表达增加,但它未起到保护作用,它与内毒素对机体的损伤有关。

血红素亚铁片的制备工艺优选

目的:优化血红素亚铁片的制备工艺条件。方法:以崩解时限和脆碎度为指标,采用单因素试验考察稀释剂、崩解剂;选取糊精蔗糖质量比、羧甲基淀粉钠及聚乙烯吡咯烷酮(PVP)质量分数为考察因素,通过单因素试验和正交试验优选血红素亚铁片的制备工艺。结果:最佳制备工艺条件为糊精-蔗糖0.6∶1,PVP质量分数15%,羧甲基淀粉钠质量分数3%。结论:优选的工艺合理可行,制备的血红素亚铁片具有良好的脆碎度和崩解时限。

缺血后处理对大鼠缺血-再灌注肺损伤血红素加氧酶-1表达的影响

目的观察缺血后处理（IPO）对大鼠肺缺血-再灌注损伤（IRI）期间血红素加氧酶-1（HO-1）表达的影响，探讨其保护机制。方法48只成年SD大鼠，随机（随机数字法）分成6组（n=8）,假手术组（S组）；缺血-再灌注组（I/R组）：夹闭左肺门缺血45min,再灌注105min；缺血后处理组（IPQ组）：缺血后再灌注30s,停灌30s，反复3次，再恢复灌注102min;氯化高铁血红素（Hemin）＋缺血-再灌注组（ZnPPIX＋IPO组）：术前连续2d腹腔注射Hemin40junol/（kg·d）,余同I/R组；锌原卟啉K＋缺血后处理组（ZnPPK＋IPO组）：术前24h腹腔注射ZnPPIX20mg/（kg·d）,余同IPO组；氯化高铁血红素＋假手术组（HM＋S组）。测定各组肺组织HO-1蛋白表达水平、动脉血氧分压（Pa02）、肺组织湿/干质量比（W/D）和血清丙二醛（MDA）含量，观察肺组织病理变化。组间比较采用单因素方差分析，组内比较采用配对＊检验。结果1/R组肺组织HO-1蛋白表达（0.177±0.015）与S组和HM＋S组相比差异具有统计学意义（P〈0.01,P〈0.05）,但与IPO组（0.194士0.017）及HM＋I/R组（0.209±0.013）相比差异具有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）o各实验组Pa02均显著低于S组（90±11）mmHg,IPO组和HM＋I/R组PaO2与1/11组相比较，差异具有统计学意义（P〈0.01）;I/R组较S组肺组织W/D、血清MDA含量升高，肺组织病理损伤严重，而IPO组和HM＋I/R组上述改变差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论早期短时程缺血后处理能明显减轻在体大鼠肺IRI,其作用机制与其上调HO-1蛋白表达及抑制脂质过氧化的损伤作用有关。

Hemin诱导K562细胞红系分化过程中BCR/ABL表达的变化

目的:观察氯化高铁血红素(Hemin)在诱导K562细胞红系分化过程中融合基因BCR/ABL表达的变化。方法:分别应用不同浓度的Hemin刺激K562细胞24 h后,光学显微镜下观察Hemin诱导前后细胞的形态变化,采用CCK8法检测0、10、20、30、40、50μmol/L的Hemin诱导24 h后细胞的增殖活性,并通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹分析分别从基因和蛋白水平检测各组BCR/ABL融合基因的表达。结果:经过不同浓度的Hemin诱导24 h后,细胞增殖活性降低,BCR/ABL融合基因的表达下调,且随着Hemin浓度的升高融合基因的表达量逐渐减低。结论:Hemin明显抑制BCR/ABL融合基因的表达,作用随着Hemin浓度的加大逐渐增强。

Hemin对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑保护作用的研究

目的观察氯化高铁血红素(Hemin)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织中脑红蛋白(Ngb)表达的影响,探讨Hemin的脑保护作用及机制。方法将7 d龄新生SD大鼠90只随机分为假手术组、HIBD组、HIBD+Hemin组共3组。采用结扎左颈总动脉、低氧诱导(8%氧气,32℃)2 h方法建立HIBD模型。HIBD建模后2 h,HIBD+Hemin组腹腔注射Hemin(50 mg/kg),假手术组与HIBD组腹腔注射生理盐水。24 h后处死取脑,分别行脑梗死体积百分比测定、荧光定量(RT-PCR)检测Ngb mRNA表达、免疫组化分析Ngb表达。结果 HIBD组和HIBD+Hemin组脑梗死体积百分比、Ngb mRNA和Ngb表达均较假手术组显著上升(P<0.01);与HIBD组比较,HIBD+Hemin组Ngb mRNA和Ngb表达均增加,而脑梗死体积百分比明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Hemin可减轻新生鼠的缺氧缺血性脑损伤,其机制可能是通过上调Ngb的表达发挥作用。