LC-MS/MS法测定人血浆中氯吡格雷活性代谢物衍生物浓度的不确定度评定

目的:评定液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法测定人血浆中氯吡格雷活性代谢物衍生物(CAMD)浓度的不确定度。方法:对LC-MS/MS法测定人血浆中CAMD浓度的整个过程进行分析,对测定过程中的测量重复性、称量、工作液配制、生物样品制备、回收率、仪器允差和标准曲线拟合等因素引起的不确定度分别进行了评定,最后计算合成不确定度并进行扩展。结果:血浆CAMD低(0.107ng/ml)、中(4.467ng/ml)、高(155.667ng/ml)质量浓度质控的扩展不确定度分别为0.010 2、0.188、6.413ng/ml(k=2,P=95%)。结论:LC-MS/MS法测定人血浆中CAMD的不确定度在低浓度时主要由曲线拟合引入,在中浓度和高浓度时主要由生物样品配制、萃取过程、对照品配制和仪器允差引入。

氯吡格雷活性代谢产物测定方法研究进展

对近年来国内外报道的氯吡格雷活性代谢产物测定方法的相关文献进行检索并分析和总结。结果表明,氯吡格雷活性代谢物的测定方法研究经历了3个阶段,包括直接分析氯吡格雷活性代谢物的浓度,分析氯吡格雷活性代谢物衍生物的混合物浓度及分析氯吡格雷活性代谢物衍生物的浓度。氯吡格雷活性代谢产物测定方法的研究进展将推动其药物代谢动力学和临床研究。

液质联用法同时测定人血浆氯吡格雷活性和非活性代谢物浓度

目的建立快速测定人血浆中氯吡格雷活性和非活性代谢物浓度的LC-MS/MS法。方法乙醚液液萃取法,采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱。以正离子多反应离子监测方式进行检测。结果氯吡格雷羧酸代谢物、卡马西平、氯吡格雷活性代谢物衍生物分离良好,氯吡格雷羧酸代谢物的线性范围良好。两种代谢产物日内、日间RSD小于12%。在不同贮存条件下代谢物稳定性良好。结论该方法操作简便快速,重复性好,灵敏度高,适用于氯吡格雷代谢产物血药浓度的测定。

雷贝拉唑对不同CYP2C19基因型健康志愿者体内氯吡格雷及其活性代谢物药动学的影响

目的:探讨雷贝拉唑对不同CYP2C19代谢型健康志愿者体内氯吡格雷及其活性代谢物药动学特征的影响。方法:选择健康志愿者为对象,根据其CYP2C19基因型按随机数字表法挑选快代谢型、中间代谢型和慢代谢型受试者各8例分组,采用单剂量、随机、开放、两周期的交叉试验设计,各组患者在试验周期内分别单次口服硫酸氢氯吡格雷片300 mg或硫酸氢氯吡格雷片300 mg+雷贝拉唑钠肠溶片20 mg,清洗期为7天。采用超高效液相色谱-串联质谱法检测受试者血浆中氯吡格雷及活性代谢产物H4(MP-H4)的质量浓度,通过DAS 2.0软件计算药动学参数并比较。结果:3种代谢型受试者年龄、身高、体质量、肝酶、血肌酐等一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与单用氯吡格雷者比较,联用雷贝拉唑的快代谢型组受试者体内氯吡格雷的达峰浓度(c_(max))和药-时曲线下面积(AUC_(0-t))分别上升了36%和27%,MP-H4的c_(max)和AUC0_(0-t)分别下降了34%和28%(P<0.01);中间代谢型受试者氯吡格雷的c_(max)和AUC0_(0-t)分别上升了19%和18%,MP-H4的c_(max)和AUC0_(0-t)分别下降了19%和16%(P<0.05或P<0.01);而慢代谢型受试者联用雷贝拉唑后体内氯吡格雷及MP-H4的c_(max)、AUC0_(0-t)以及各代谢型受试者体内氯吡格雷及MP-H4的tmax与单用氯吡格雷者比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:在CYP2C19快代谢型和中间代谢型受试者中,联用雷贝拉唑可明显增加氯吡格雷的暴露量并降低其活性代谢产物MP-H4的暴露量;而这种联用对CYP2C19慢代谢型受试者体内氯吡格雷及其活性代谢产物的影响并不显著。

LC-MS/MS法测定比格犬血浆中氯吡格雷活性代谢物

建立了一种定量测定比格犬血浆中氯吡格雷活性代谢物(active metabolize,AM)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法。采血管中加入酯酶抑制剂敌敌畏,采样后立即离心处理,取上层血浆,加入2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(MPB)进行衍生化,反应完成后直接加入含0.1%甲酸的冰乙腈沉淀蛋白,取上清液,测定氯吡格雷活性代谢物的衍生化产物(MP-AM)。以乙腈-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,API4000电喷雾离子源,多反应监测(MRM)模式扫描。在优化的实验条件下,获得了峰宽较窄且对称的色谱峰;MP-AM的线性范围为1~1 000μg/L,相关系数大于0.995;生物基质效应较小,提取回收率在92.8%~95.1%之间,相对标准偏差小于8.27%。该方法的准确度和精密度均符合国家食品药品监督管理总局(China Food and Drug Administration,CFDA)的相关要求,适用于比格犬血浆中氯吡格雷的药代动力学研究。

LC-MS/MS法同时测定人血浆中氯吡格雷及其羧酸代谢物的浓度

目的建立快速测定人血浆中氯吡格雷及其羧酸代谢物SR26334含量的LC-MS/MS法。方法乙醚-正己烷(4:1,V:V)2次液-液提取法(中性和酸化条件下),采用Teknokroma C_(18)色谱柱,以那格列奈和吡格列酮为内标,同时测定血浆中氯吡格雷和SR26334的浓度。流动相:甲醇-0.1%甲酸(80:20,V:V);流速:0.2mL·min^(-1);以多反应离子监测方式检测:氯吡格雷[M+H]^+,m/z 322.1→212.1;那格列奈[M+H]^+,m/z 318.3→166.2;氯吡格雷羧酸代谢物SR26334[M+H]^+,m/z 308.1→q98.1;吡格列酮[M+H]^+,m/z 357.2→134.2。结果氯吡格雷和内标那格列奈的保留时间分别在4.4和3.7min,SR26334和内标吡格列酮的保留时间分别在1.3和1.7min,氯吡格雷的线性范围为5～5000ng·L^(-1);SR26334的线性范围为20～2500μg·L^(-1)。提取回收率大于75%,方法回收率大于90%,日内、日间RSD小于10%(n=5)。结论本方法简便快速,适用于氧吡格雷制剂的新药临床研究和临床长期治疗病人血药浓度的常规监测。

离体大鼠肝脏灌流法制备氯吡格雷活性巯基代谢物

目的建立氯吡格雷活性巯基代谢物(CATM)的制备方法,为顺式CATM的合成提供参考。方法以(S)-2-氧氯吡格雷为底物,采用离体大鼠肝脏灌流法和ChromCore 120 C18制备柱制备并分离纯化CATM。采用质谱和核磁共振氢谱鉴定目标产物,对比人体内活性构型(顺式CATM)保留时间确认目标产物中活性构型的占比。结果目标产物的转化率为11.71%,质谱和核磁共振氢谱鉴定目标产物为CATM。CATM的峰2~峰5为4个立体异构体,保留时间分别为21.3、22.3、26.5、27.3 min,峰面积占比分别为7.13%、7.23%、63.52%、14.97%。根据人体内CATM活性构型的保留时间为26.3 min,确定目标产物CATM中活性顺式异构体占比为63.52%。结论本方法成本低、步骤简单,可制备出活性构型占比较高的CATM。

氯吡格雷及其羧酸代谢物高效液相色谱-串联质谱法快速检测

目的建立高效液相色谱-串联质谱法快速定量检测人血浆中氯吡格雷及其羧酸代谢物的方法。方法氯吡格雷样本用乙腈沉淀蛋白后,选用Eclipse XDB-C18柱（150.0 mm×4.6 mm×5.0μm）,以乙腈-1mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱。氯吡格雷羧酸代谢物样本用乙腈沉淀蛋白后,选用Kromasil-C18色谱柱（50.0mm×4.6mm×5.0μm）,以乙腈-1 mmol/L乙酸铵溶液（60∶40v/v）为流动相等度洗脱。选用3200QTrap型液相色谱-串联质谱仪的多重反应监测（MRM）扫描方式进行检测。结果氯吡格雷线性范围为：0.01~5.00ng/mL,定量下限为0.01ng/mL。氯吡格雷羧酸代谢物线性范围为：10.0~5 000ng/mL,定量下限为10.0ng/mL。准确度与精密度结果显示方法日间、日内变异系数均小于15%,相对偏差-2.00%~2.65%,稳定性较好。结论本研究建立了快速、灵敏、专属性强、重复性好的方法,适用于临床药代动力学和生物等效性研究。

氯吡格雷羧酸代谢物SR26334对人脐静脉内皮细胞全基因表达谱的影响

本研究探讨氯吡格雷无抗血小板活性的羧酸代谢成分SR26334对体外培养人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)基因表达谱的影响及其对内皮细胞作用的分子机制。SR26334 10μmol/L与人脐静脉内皮细胞共培养48h;运用Affymetrix HU133 plus2.0全基因组表达芯片检测氯吡格雷羧酸代谢物对人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响,用分子注释系统MAS3.0软件进行聚类分析。用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证基因表达谱。结果表明:氯吡格雷羧酸代谢物SR26334 10μmol/L作用内皮细胞48 h后,基因芯片分析筛选出差异表达大于1.5倍的基因235个,其中上调基因176个,下调基因59个,包括DNA依赖的转录调节、转录、从RNA聚合酶Ⅱ启动子开始转录的正调节、细胞周期、细胞分割、蛋白氨基酸去磷酸化等相关基因,RT-PCR检测结果与基因芯片结果一致。结论:氯吡格雷羧酸代谢物SR26334在基因水平通过多条通路调节内皮功能。

阿托伐他汀与氯吡格雷对急性冠状动脉综合征患者氯吡格雷羧酸代谢物血浓度的影响

目的测定急性冠状动脉综合征(ACS)患者氯吡格雷羧酸代谢物血浓度,观察阿托伐他汀和氯吡格雷有无相互作用。方法对照组为25例健康受试者,ACS组为66例ACS患者。口服阿司匹林100mg/d和氯吡格雷75mg/d,并加阿托伐他汀20mg/d,自身前后对照。采用液相色谱串联质谱法测量氯吡格雷羧酸代谢物血浓度。结果对照组在双联抗血小板治疗加阿托伐他汀治疗和双联抗血小板治疗氯吡格雷羧酸代谢物血浓度分别为(5.76±0.87)ng/dL和(5.67±0.88)ng/dL,两者间差异无统计学意义(P=0.351)。ACS组在双联抗血小板治疗加阿托伐他汀治疗和双联抗血小板治疗氯吡格雷羧酸代谢物血浓度分别为(5.96±0.87)ng/dL和(5.86±0.97)ng/dL,两者间差异无统计学意义(P=0.115)。结论未检测到血氯吡格雷原药成分,氯吡格雷和阿托伐他汀未见相互作用。

氯吡格雷与质子泵抑制剂是非曲折的这些年

氯吡格雷是噻吩类血小板聚集抑制剂。氯吡格雷本身不具有抗血小板活性，但它能通过在肝脏内的CYP450酶系（主要是CYP2C19）氧化水解成活性代谢产物产生抗血小板作用。而质子泵抑制剂（PPIs）在肝脏中氧化代谢也是由CYP450酶系（主要是CYP2C19、CYP3A4）催化。由于二者代谢都通过CYP2C19酶，所以理论上同时使用氯吡格雷和PPIs会产生竞争性抑制。

替格瑞洛与氯吡格雷如何替换?

抗血小板治疗是冠心病管理的基石。双联抗血小板治疗,即阿司匹林联合一种P2Y12受体拮抗剂是急性冠状动脉综合征(ACS)和(或)经皮冠状动脉介入患者的标准治疗方案。目前国内常用的口服P2Y12受体抑制剂包括氯吡格雷和替格瑞洛。氯吡格雷是噻吩吡啶类药物,是一种前体药物,需通过肝细胞色素酶P450(cytochrome P450,CYP)氧化生成活性代谢产物,与P2Y12受体不可逆结合,从而发挥抗血小板作用。

氯吡格雷抵抗的研究进展

氯吡格雷是一种不可逆抑制血小板聚集的噻吩吡啶类化合物，其活性代谢产物可与血小板膜表面ADP受体（P2Y12）结合，从而阻断ADP介导的血小板聚集。抗血小板药物现已经广泛应用于ACS和PCI治疗的抗血栓治疗，但是，氯吡格雷并不能使所有的患者都能获益。近年来有报道表明，有些患者有氯吡格雷抵抗现象，即由于血小板未能得到充分抑制导致严重支架内血栓形成等不良心血管事件发生。因此，识别和预防氯吡格雷抵抗具有重要的临床意义。

阿司匹林联合氯吡格雷治疗短暂性脑缺血发作的效果及安全性分析

目的探讨阿司匹林联合氯吡格雷治疗短暂性脑缺血发作(TIA)的临床效果及安全性。方法将2012年10月至2015年2月收治的72例TIA患者分为观察组(36例)和对照组(36例)进行对比分析,观察组使用阿司匹林联合氯吡格雷治疗,对照组单独给予阿司匹林治疗,比较两组患者的治疗效果、凝血指标和不良反应情况。结果治疗后观察组总有效率为83.33%,明显高于对照组的61.11%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组PT、APTT明显高于对照组,Fib低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组发生不良反应2例,对照组3例,两组不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用阿司匹林联合氯吡格雷治疗TIA疗效明显,不良反应小,值得在临床推广应用。

吸烟者应慎用氯吡格雷

氯吡格雷是临床用来抑制血小板聚集的常用药物，但需经过肝脏细胞色素P450代谢后转化为活性代谢产物才能发挥药理作用。已有体外实验的数据证明，吸烟可以诱导与氯吡格雷代谢活化相关的细胞色素P4501A2（CYPIA2）的激活，增强氯吡格雷对血小板聚集的抑制作用。

FDA要求增加氯吡格雷药品安全黑框警示

近日，FDA要求氯吡格雷（clopidogrel，Plavix）产品的药品说明书中以黑框警示的形式增加安全信息，提醒患者和医护人员，对于体内无法将氯吡格雷代谢转化为具有生物活性形式的患者，该药可能无效。FDA刚时强调患者未经医生许可，不应擅自停药。有任何疑虑应立即与医生保持联系。

分析急性冠状动脉综合征患者体内氯吡格雷活性代谢产物的影响因素

目的分析影响急性冠状动脉综合征(ACS)患者体内氯吡格雷活性代谢产物血浆浓度的主要因素。方法105例ACS患者均给予阿司匹林100 mg·d^(-1)及氯吡格雷75 mg·d^(-1),连续口服4 d;第5天晨起空腹给药1 h后,抽取静脉血4 m L,用乙二胺四乙酸抗凝。其中2 m L立即加入500 mmol·L^(-1)的2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(MPB)溶液20μL,用于检测氯吡格雷活性代谢产物的浓度;另2 m L用于荧光检测细胞色素P450 2C19*2(CYP2C19*2)、*3和氧磷酶1(PON1)基因型。用单因素分析探索二分类变量及等级资料对氯吡格雷活性代谢产物血药浓度的影响,用Spearman分析探索氯吡格雷活性代谢产物血药浓度与连续性变量的相关性。结果糖尿病、高脂血症、PON1携带、进行经皮冠状动脉介入手术后与氯吡格雷活性代谢产物血药浓度呈负相关(P<0.05),β受体阻滞药、他汀类药物、血清白蛋白(ALB)与氯吡格雷活性代谢产物的浓度呈正相关(P<0.05)。结论糖尿病、高脂血症、PON1携带及进行经皮冠状动脉介入手术后等可减少氯吡格雷活性代谢产物血药浓度,而ALB以及合用β受体阻滞药或他汀类药物可增加其血药浓度。

人血浆中氯吡格雷及其活性代谢物的LC-MS/MS法测定

建立了液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的氯吡格雷（1）及其活性代谢物（2）。以2-溴-3＇-甲氧基苯乙酮（MPB）作为衍生化试剂,以噻氯匹定（3）为内标,使用Diamonsil C_（18）色谱柱,流动相为乙腈∶1 mmol/L乙酸铵水溶液（含0.01%甲酸）（80∶20）。使用电喷雾电离源（ESI）,正离子模式、多反应监测（MRM）监测离子对m/z 322.2→m/z 212.0（1）、m/z 504.4→m/z 354.1（2）和m/z 264.2→m/z 154.1（3）。血浆中的1和2衍生物在0.53~52.50 ng/ml和2~200 ng/ml范围内线性关系良好,最低定量限（LLOQ）为0.53和2.00 ng/ml,日内和日间RSD均小于10%。