纸片协同试验用于肠杆菌科细菌碳青霉烯酶检测的价值

目的评估纸片协同试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌(CPE)的应用价值。方法收集2015年1月至2018年12月瑞安市人民医院75株可疑产碳青霉烯酶非重复肠杆菌科细菌和10株非CPE。通过使用美罗培南(MEM)联合多种抑制剂[包括苯基硼酸(PBA)、氯唑西林、乙二胺四乙酸钠(EDTA)和替莫西林]的纸片扩散法等试验检测菌株产碳青霉烯酶的类型。以PCR扩增相关耐药基因为金标准,评估纸片协同试验对CPE的检测价值。结果75株可疑CPE经PCR扩增,66株确证产碳青霉烯酶(其中产KPC 46株、产NDM-118株、产IMP 1株、产VIM 1株,无产OXA-48基因型),6株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),3株未检测出基因;MEM联合PBA和氯唑西林协同试验检测KPC表型的灵敏度为100.0%,特异度为93.1%;MEM联合EDTA协同试验检测MBL表型的灵敏度和特异度均达到100.0%。10株非CPE均未检测出碳青霉烯酶耐药基因,且纸片协同试验均阴性。结论该表型检测方法对检测KPC、MBL类碳青霉烯酶有较高的灵敏度和特异度,并且操作简便、成本低,适合在临床微生物学实验室、医院感染管理科及疾病预防控制中心等单位普及应用。

三种AmpC酶表型检测方法比较

目的对革兰阴性菌产AmpC酶的检测方法进行评价，并寻找一种适合临床常规应用的AmpC酶检测方法。方法对39株耐头孢西丁的革兰阴性菌同时进行改良Hodge试验、三维试验、氯唑西林（CLO）双纸片协同试验和ampC基因聚合酶链反应（PCR）检测，比较4种方法的结果。结果39株革兰阴性杆菌中，改良Hodge试验、三维试验和CLO双纸片协同试验检出产AmpC酶的阳性率分别为38．5％、43．6％和28．2％，3种方法AmpC酶检出率的差异无统计学意义（P〉0．05）。与PCR结果比较，改良Hodge试验特异性为87％，敏感性为75％；三维试验的特异性为78％，敏感性为75％；CLO双纸片协同试验特异性为87％，敏感性为50％。PCR显示ampC基因阳性率为41％（16／39），对16株阳性菌进行ampC基因测序，测序结果与基因数据库内相应的ampC核酸序列比对发现，同源性均在98％～100％之间。结论改良Hodge试验可作为一种操作快速、简便的筛选试验检测革兰阴性菌产AmpC酶的情况，而CLO双纸片协同试验可作为一种操作简便的排除产AmpC酶试验应用于实验室，但在准确性上低于改良Hodge试验。

AmpC酶检测方法的探讨

目的建立简便检测肠杆菌科细菌中Amp C酶的方法。方法分别采用双纸片确证法和多剂量协同法检测35株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,并用三维试验和Amp C酶酶量直接测定法进行对比,同时检测这些菌产ESBL的情况。结果双纸片确证法检测出12株Amp C酶,不受ESBL的干扰,与直接酶量检测法完全一致,敏感性高于三维试验,多剂量协同法敏感性较差。结论双纸片确证法可作为临床检测AmpC酶的方法。

69株大肠埃希菌耐药性分析

目的:了解海岛居民大肠埃希菌对抗菌药物的耐药情况,指导临床合理用药。方法:应用全自动细菌鉴定/药敏分析仪,结合双纸片协同试验法和K-B法,对2004年度收集的69株大肠埃希菌进行药敏试验和产ESBLs细菌的检测。结果:所检菌株对氨苄西林、复方新诺明、哌拉西林耐药率达70%以上;对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦耐药率在50%～59.1%;检出产ESBLs菌株21株,检出率为30.4%,产ESBLs菌株的耐药性明显高于非产ESBLs菌株(P<0.05)。结论:大肠埃希菌产ESBLs率高,产ESBLs大肠埃希菌多重耐药严重,对于产ESBLs菌株感染的治疗建议选用美罗培南和阿米卡星。

评价三种检测AmpC酶的方法及临床应用

目的:比较三种检测AmpC酶的方法,以找出一种能简便、准确、适合临床常规应用的检测AmpC酶的方法。同时了解我院临床分离菌株AmpC酶的产生情况。方法:采用酶提取物三维试验、头抱西丁三相试验及氯唑西林双纸片协同法同时检测75株阴沟肠杆菌和55株鲍曼不动杆菌的AmpC酶产生情况。结果:用酶提取物三维试验检测到所试阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌的AmpC酶阳性株分别为22株(占29.3%)和10株(占18.2%)、头孢西丁三相试验及氯唑西林双纸片协同法与酶提取物三维试验的符合率分别为70.8%(92/130)和94.6%(123/130)。结论:头孢西丁三相试验检测AmpC酶存在严重的假阳性,而氯唑西林双纸片协同法结果可靠、方法简便,适合于临床常规应用。