氨基酸的咔唑-9-乙基氯甲酸酯柱前衍生高效液相色谱分析

采用一种新型氯甲酸酯类荧光衍生试剂咔唑_9_乙基氯甲酸酯(CEOC)对氨基酸进行柱前衍生,并通过荧光检测的方法进行高效液相色谱 (HPLC)分析 ;在HypersilBDSC18 柱上对19种氨基酸衍生物进行了分离 ,衍生物的激发和发射波长分别为λex=293nm ,λem=365nm ,当衍生化缓冲液pH为9.0,衍生试剂总量 (摩尔数)为氨基酸总量的4倍时 ,衍生化产率最大 ,平均检出限可达22.8fmol。

咔唑-9-乙基氯甲酸酯柱前衍生胺类化合物高效液相色谱分离

采用一种新的氯甲酸酯类荧光衍生试剂咔唑 9 乙基氯甲酸酯进行柱前衍生胺类化合物并通过荧光检测的方法进行高效液相色谱 (HPLC)分析。衍生物的荧光激发和发射波长为λex λem =2 93 36 5nm。色谱柱 :HypersilBDSC1 8柱 ,柱温 :35℃ ;流速 :1mL min ;流动相A为水 乙腈 (2 0 80 ,V/V) ,流动相B为乙腈 水 (95 5 ,V/V)。衍生试剂用量 (mol)是胺类化合物总量的 3～ 4倍时 ,衍生化产率最大且恒定。该方法具有检测灵敏度高 ,衍生化反应简单、快速、不受样品基质盐分的干扰 ,尤其适合天然生物样品 ,食品及饲料中的胺类化合物的分析.

氯甲酸2-(9-咔唑)乙基酯柱前衍生化HPLC法用于环境水中脂肪胺测定

利用一种新型的衍生化试剂氯甲酸2_(9_咔唑)乙基酯柱前衍生10种脂肪胺 ,建立了脂肪胺类化合物的梯度洗脱高效液相色谱分离分析方法 ,在紫外254nm条件下检测 ,线性检测范围为50～500μmol/L ,检出限 (S/N=3)为9.5～25μmol/L;对海水及河水中脂肪胺的试验结果表明 ,建立的方法快速、灵敏度高 ,可以满足环境检测等方面的需要。

氯甲酸-9-芴甲酯柱前衍生脂肪胺类化合物的反相高效液相色谱分析

采用荧光检测的方法对氯甲酸-9-芴甲酯柱前衍生的18种脂肪胺类化合物进行反相高效液相色谱分析。衍生物的荧光激发和发射波长分别为265nm和310nm。实验结果表明,通过向衍生体系中加入氨水的方法,可以有效地消除过量衍生试剂对分离的干扰。以乙胺为基准物质考察该方法的重复性。6次衍生产物保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.57％和2.9％。此外,18种脂肪胺的浓度与峰面积呈较好的线性关系,检出限为29.3～56.4 nmol/L。对海水分析的结果表明该方法不受样品中盐的干扰,适合实际样品中脂肪胺类化合物的检测。

咔唑-9-乙基氯甲酸酯柱前衍生氨基酸胶束电动色谱分离

采用一种新型紫外、荧光衍生试剂咔唑 9 乙基氯甲酸酯对9种氨基酸(丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸)进行柱前衍生,采用胶束电动色谱模式在14min内完成分离。分离条件:以pH9 0的20mmol/L硼酸盐 30mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)溶液(含3%(体积分数)乙腈)为缓冲溶液,柱温25℃,分离电压18kV,紫外检测波长214nm。该方法的线性范围为0 025～0 25mmol/L,检出限为2 15～2 46μmol/L。

柱前衍生化法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅱ)中氨基酸的含量

目的建立复方氨基酸注射液(18AA-Ⅱ)的柱前衍生化含量分析方法。方法以邻苯二甲醛联合9-芴甲基氯甲酸酯(OPA-FMOC)进行在线衍生,采用Zorbax Eclipse-AAA柱,以40 mmol/L NaH_(2)PO_(4)溶液(pH7.8)为流动相A,乙腈-甲醇-水(45:45:10)为流动相B,梯度洗脱,检测波长338、262 nm,柱温40℃。结果各氨基酸之间分离度良好,线性相关系数均不小于0.9994,平均回收率99%~103%,重复性RSD均小于2%。结论该法稳定、准确、高效,可为复方氨基酸注射液的含量测定和质量评估提供参考,并首次报道了OPA-FMOC衍生分析法中赖氨酸峰面积重复性不佳的优化方法。

柱前衍生-高效液相色谱法检测魔芋飞粉中的神经酰胺

建立了一种柱前衍生-高效液相色谱测定魔芋飞粉中神经酰胺的方法。将神经酰胺与氢氧化钾乙醇溶液在高温条件下进行脱酰基反应,再与9-氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)衍生化试剂反应,高效液相色谱分离后,采用紫外或荧光检测器检测。考察并确定了脱酰基以及衍生化反应的最佳条件,在110℃条件下用0.5 mol/L氢氧化钾乙醇溶液对神经酰胺标品或样品处理1.5 h,然后用10 mg/mL的FOMC-Cl对其进行在线衍生。采用Waters Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm, 5μm)分离,甲醇/水/磷酸(体积比10/90/0.05)-甲醇为流动相进行梯度洗脱,荧光检测器的激发波长和吸收波长分别为266 nm和305 nm;紫外检测器波长为262 nm。在神经酰胺浓度为20~500μg/mL范围内方法的线性关系良好,其中紫外检测器检测的相关系数(R^(2))为0.9978,荧光检测器检测的R2为0.9978,回收率为97.3%~103.6%,相对标准偏差<1.64%。所建立方法采用紫外和荧光检测器测定目标物的检测限分别为0.48μg/mL和0.0082μg/mL,定量限分别为1.6μg/mL和0.027μg/mL。

柱前衍生-超高效液相色谱-串联质谱测定茶叶中草甘膦、草铵膦及主要代谢物氨甲基膦酸残留

采用柱前衍生-超高效液相色谱-串联质谱测定茶叶中草甘膦、草铵膦及其主要代谢物氨甲基膦酸残留。利用正交试验方法,系统研究了提取与净化等前处理条件对茶叶中草甘膦、草铵膦和代谢物氨甲基膦酸检测的影响。实验结果表明,最优的前处理方案为茶叶样品经纯水旋涡提取,阳离子交换柱净化,0.5%(v/v)甲酸水溶液洗脱和9-芴甲基氯甲酸酯衍生,C_(18)色谱柱分离,超高效液相色谱-串联质谱定量分析(电喷雾正离子)。结果表明:在1~100μg/L范围内,草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸呈现良好的线性关系,相关系数(R^2)均大于0.991,该方法检出限为0.016 0~0.030 0 mg/kg,定量限为0.053 0~0.100 mg/kg。在0.050 0、0.400和1.20 mg/kg 3个添加水平下,草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的平均回收率为78.3%~108%,相对标准偏差为5.46%~9.63%。利用该方法检测837份茶叶中草甘膦、草铵膦和氨甲基磷酸残留,检出率分别为3.46%、0.24%和4.42%,超标率为0.24%。该方法简单、快速、灵敏、准确,能够满足大批量茶叶中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸残留的检测需要。

柱前衍生-高效液相色谱法测定保健食品中16种氨基酸的含量

目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定保健食品中16种氨基酸的含量。方法优化GB/T5009.124-2003的前处理方法,样品经稀释或置于顶空瓶中直接酸水解;并采用OPA/FMOC柱前衍生法,色谱柱为Thermo ODS Hypersil,以醋酸钠缓冲液（含三乙胺、四氢呋喃）和醋酸钠缓冲液（含乙腈、甲醇）为流动相进行梯度洗脱,在338 nm和262 nm检测波长下进行高效液相色谱法检测。结果 16种氨基酸在4-250μg/mL范围内呈现良好线性关系,在10μg/mL水平下加标回收率为85.8%-115.2%,RSD为0.1%-9.1%（n=6）,检出限在0.2-4.6 ng范围内。结论本方法操作简便、灵敏度高,可应用于实际样品的测定。

柱前衍生反相高效液相色谱法快速测定3,5-二氯苯甲酰氯

以无水甲醇作柱前衍生试剂,建立了反相高效液相色谱法间接测定3,5-二氯苯甲酰氯的新方法。实验结果表明,在流动相:甲醇-水(85:15),流速:1.0mL/min,检测波长:288nm的条件下,定量校正曲线具有良好的线性关系,相关系数(r)为0.9999。方法用于样品中标题物质的测定,RSD=0.19%(n=6),加标回收率为99.9%～105%。

OPA-FMOC在线柱前衍生高效液相色谱法测定不同产地燕窝中氨基酸含量

通过邻苯二甲醛-9-芴甲基氯甲酸酯(O-phthalaldehyde-9-fluorenylmethyl chloroformate,OPA-FMOC)柱前衍生高效液相色谱法,优化得到快速检测燕窝氨基酸的方法,并对10种不同来源燕窝中的氨基酸进行了定性和定量分析。结果表明,该法在14 min内可完成对22种氨基酸的分析,且在5~200 nmol/m L浓度范围内决定系数R2均大于0.998,检出限0.4~4 nmol/m L,回收率80%以上。该方法简便快速,灵敏度高,对高蛋白质食品中氨基酸的快速测定具有借鉴作用。

柱前在线衍生-反相高效液相色谱法测定羊胎盘枸杞胶囊中16种氨基酸的含量

目的建立一种采用反相高效液相色谱法测定羊胎盘枸杞胶囊中16种氨基酸的含量。方法样品中的蛋白质在6 mol/L盐酸溶液中水解为氨基酸,其中一级氨基酸用邻苯二甲醛(OPA)、二级氨基酸用9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)进行柱前在线衍生;用Agilent Hypersil AA-ODS柱分离;用流动相(0.16%醋酸钠)进行梯度洗脱;经荧光检测器(FLD)检测(激发波长:340 nm,发射波长:450 nm;15 min时,激发波长:266 nm,发射波长:305 nm)。结果 16种氨基酸在5~250 pmol/μL浓度范围内呈现良好的线性关系(r:0.99959~1.00000,n=5),平均加标回收率为91.6%~104.1%(n=9),相对标准偏差(RSD)为0.9%~3.7%,最低检测限为0.4~1.2 pmol。结论该方法灵敏度高,具有良好的精密度与准确度,可以有效地控制产品质量。

小肽不同高效液相色谱柱前衍生化反应的实验研究

分别用氯甲酸-9-芴基甲酯（9-fluorenylmethylchloroformate，FMOCCl）、9-芴基甲氧基甲酸琥珀酰亚胺类酯（9-fluorenylmethoxy carbonyl succinimide，FMOC-OSU）和丹磺酰氯（1-dimethylaminonaphthalene-5-sulfonyl-chloride，Dns-Cl）为衍生化试剂对小肽进行了衍生化反应.研究和比较了各种衍生试剂用量、衍生缓冲体系pH条件、衍生化时间等因素对衍生反应的影响及衍生产物的稳定性.结果发现，FMOC-Cl对肽的衍生反应速度快，衍生反应完全，衍生产物稳定.

反相高效液相色谱柱前衍生荧光检测法测定游离多胺

合成新型荧光试剂1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-异丙基氯甲酸酯(BCIC)作为柱前衍生化试剂,在Eclipse XDB-C8色谱柱上,通过梯度洗脱对5种多胺进行了分离和在线质谱定性。在乙腈中,以硼酸钠缓冲液(pH9)为催化剂,40℃下衍生反应10min后获得稳定的荧光产物。激发和发射波长分别为λex=333nm,λem=390nm。采用大气压化学电离源(APCI)正离子模式,实现了人尿中游离多胺的定性及定量测定。多胺的线性相关系数大于0.9996,检出限为5.3～9.9fmol。

新型荧光试剂柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法测定醇类化合物

采用新型的紫外、荧光衍生试剂咔唑 9 乙基氯甲酸酯 ,对 15种脂肪醇柱前衍生的反应条件 ,包括反应温度、催化剂的选择、衍生化时间等 ,进行了考察。结果表明 :催化剂选用吡啶 ,反应温度 80℃ ,时间 15min ,衍生化具有最大且恒定的检测响应。利用高效液相色谱对衍生产物进行分析 ,同时对衍生物的分离进行了优化选择 ,达到了较好的基线分离。检测限为 13.3～ 93.5nmol L。

三种柱前衍生化法测定乳粉中牛磺酸含量的方法比较

采用三种不同的衍生试剂单磺酰氯、9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)和邻苯二甲醛(OPA),利用高效液相-紫外检测方法对乳粉中牛磺酸的质量浓度进行柱前衍生法测定。结果表明,使用甲醇-0.02 mol/L乙酸铵缓冲溶液(p H=4)为流动相,C18柱为分离柱,在各自的检测波长下,相对标准偏差分别为1.30%,0.84%,0.62%;检出限分别为0.3,0.5,0.4 mg/L。三种方法不仅简单、快捷,而且所需成本较低,准确度高,适合于乳粉中牛磺酸的测定。

柱前衍生化HPLC法测定注射用帕米膦酸二钠含量

目的：建立9-氯甲酸芴甲酯（9-fluorenyl methyl chloroformate,FMOC-Cl）柱前衍生化高效液相色谱法（HPLC）测定注射用帕米膦酸二钠含量的方法。方法：碱性条件下供试品与FMOC衍生化反应,采用Linksil HPLC ODS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,乙腈-0.4%EDTA（p H=7.2）（25∶75）为流动相,流速1 m L·min-1,检测波长为264 nm。结果：帕米膦酸二钠浓度在2-35μg·m L-1范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9995）,检测限为0.5μg·m L-1,平均回收率101.2%（n=9）。结论：本法简单、准确、灵敏,适用于注射用帕米膦酸二钠的含量测定。

柱前衍生HPLC法测定草铵膦铵盐含量

建立一种经济、方便测定草铵膦铵盐的高效液相色谱检测方法。在碱性条件下草铵膦与氯甲酸-9-芴甲酯(FMOC-Cl)反应,对衍生物进行液相色谱分离和测定。以甲醇+乙腈+水=25+25+50为流动相,C18为分离柱,在波长265nm下检测。本法衍生反应快,衍生产物稳定,铵离子不影响,在0.010 18-0.203 6mg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 9)。方法的标准偏差为0.555,变异系数为0.768%,添加回收率98.9%-100.6%,检测限为0.4μg/mL。本方法使用C18柱较耐用,检测灵敏度高,适合于草铵膦原药及制剂的测定。

柱前衍生HPLC测定草铵膦含量研究

建立并优化了高效液相色谱测定草铵膦含量的检测方法。在碱性条件下草铵膦与氯甲酸-9-芴基甲酯(FMOC-CL)反应,对衍生物进行液相色谱分离和测定,以乙腈、甲醇、磷酸水溶液作为流动相,使用Diamonsil Plus 5μm C18柱为分离柱,在206nm波长下检测。本方法衍生反应时间快,有效成分与杂质能够得到很好的分离,衍生产物稳定。三个样品的加标回收率分别为99.93%、99.61%、99.39%;相对标准偏差分别为0.03、0.02、0.03;变异系数分别为0.17%、0.09%、0.02%。本方法使用C18柱较耐用,检测灵敏度高,适用于各种草铵膦微量以及痕量的样品检测。

OPA-FMOC联用柱前衍生化法测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量

目的:建立氨基酸含量的柱前衍生化HPLC的定量测定方法。方法:采用OPA-FMOC柱前衍生化法测定复方氨基酸注射液中各个氨基酸的含量并用内、外标法进行了方法比较。结果:表明2种方法在0.025～2.5μmol.mL-1范围内线性关系良好,相关系数在0.9994～1.000之间,平均回收率96.2%～103.6%,RSD<1.4%(n=6),重复性RSD为0.08%～2.82%(n=6),最低定量限0.2～1.1ng。结论:该方法准确、灵敏、简便。内、外标法均适用于各个氨基酸的含量测定。