氯离子通道1过表达对小鼠肝癌细胞株Hca-P生物学行为的影响

背景与目的:氯离子通道l(chloride intracellular channel l,CLICl)是CLIC家族中的一员,研究表明CLIC1与肿瘤转移相关。本研究旨在探讨CLICl过表达在体外对小鼠肝癌低淋巴道转移细胞株Hca-P生长、体外迁移和侵袭能力的影响。方法:构建CLIC1过表达真核载体pcDNA3.1(+)-CLIC1表达质粒,将重组的pcDNA3.1(+)-CLIC1基因和空载体pcDNA3.1(+)转染Hca-P母系细胞,通过G418筛选获得稳定表达CLIC1基因的pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P细胞株和转染空载体的pcDNA3.1(+)-Hca-P细胞株,RT-PCR和ELISA鉴定CLIC1过表达水平,CCK-8法检测细胞活力和分裂增殖能力,Transwell实验检测细胞的体外迁移能力和侵袭能力。结果:成功建立了稳定表达CLIC1基因的细胞株pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P,与空载体对照组相比,pcDNA3.1(+)-CLIC1质粒转染入Hca-P细胞后CLIC1基因表达水平显著升高。pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P细胞增殖明显高于Hca-P母系细胞组和空载体对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且细胞增殖主要集中在72～96 h;Transwell检测各组肿瘤细胞迁移能力结果显示,pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P、pcDNA3.1(+)-Hca-P和Hca-P细胞株迁移到膜下和小室下室的平均细胞数分别为205.43±22.87、132.72±20.45和121.35±19.64。pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P与Hca-P、pcDNA3.1(+)-Hca-P细胞株比较差异有统计学意义(P<0.05);Transwell检测各组肿瘤细胞侵袭能力结果显示,pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P细胞穿过基膜的细胞数为(76.2±4.62)个,明显多于pcDNA3.1(+)-Hca-P的穿膜细胞数(48.34±3.45)个和Hca-P细胞的穿膜细胞数(49.8±5.51)个,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CLIC1过表达可以显著促进Hca-P细胞增殖、增强其侵袭能力。CLIC1有望成为临床治疗肝癌的基因治疗靶点之一。

氯离子通道蛋白1调控放射抵抗食管鳞癌细胞放射敏感性的机制

目的:探讨氯离子通道蛋白1(chloride intracellular ion channel 1,CLIC1)对食管鳞癌细胞获得性放射抵抗特性的影响及作用机制。方法:采用蛋白印记法及逆转录聚合酶链式反应法检测Eca109R50Gy细胞中CLIC1的表达水平。采用CLIC1小分子特异抑制剂IAA-94(indanyloxyacetic acid-94,IAA-94)抑制Eca109R50Gy细胞中CLIC1功能,通过克隆形成试验、流式细胞仪分析对比CLIC1功能抑制前后的细胞存活分数(SF)、细胞凋亡比率及细胞周期分布。结果:Eca109R50Gy细胞中CLIC1在转录水平及蛋白水平均呈现显著高表达(P<0.001);CLIC1功能抑制组Eca109R50Gy细胞克隆形成能力明显受抑(SF_(IAA-94vs) SF_(Control),P<0.001),而细胞凋亡比率显著增高(P<0.01)。CLIC1功能抑制组Eca109R50Gy细胞G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01)。结论:CLIC1在放射抵抗的食管鳞癌细胞中高表达并与其获得性放射抵抗特性有关,抑制CLIC1功能可增强放射抵抗的食管癌细胞对放射线的敏感性,其增敏机制与影响细胞周期分布有关。

氯离子通道蛋白1的细胞转染定位

目的 利用重组的胞内氯离子通道蛋白CLIC 1蛋白的过表达来了解该蛋白质在细胞中的定位。方法 用免疫荧光的方法观察CLIC 1蛋白在细胞中的定位。结果 荧光显微镜观察表明CLIC 1蛋白虽然在细胞核中分布较为集中 ,在细胞质中也有相当的分布。结论 实验结果为进一步的了解CLIC

氯离子通道蛋白1在心肌纤维化进程中的表达特征

目的探讨氯离子通道蛋白1(ANO1)在心肌纤维化进程中的表达特征,为抑制心肌纤维化寻找新的靶点。方法采用冠状动脉结扎法制作大鼠心肌梗死模型,1周后取心肌梗死组和假手术组大鼠左心室组织,采用免疫组织化学染色、免疫荧光双标记检测梗死区和正常组织ANO1表达的变化;体外分离培养心肌成纤维细胞,采用免疫荧光标记、Real-time PCR和Western blotting检测心肌成纤维细胞中ANO1表达情况。结果制造模型1周后心肌梗死区ANO1表达明显增强,并与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)共表达; ANO1蛋白明显表达于心肌成纤维细胞的核膜和胞质中,且表达强度和α-SMA具有相同的趋势;与刚分离贴壁心肌纤维细胞相比,ANO1在培养和48h后的心肌成纤维细胞中表达量明显增强。结论 ANO1在心肌成纤维细胞转化为成肌纤维细胞过程中表达量增加,提示ANO1可能在心肌纤维化进程中发挥重要调控作用。

人钙离子激活的氯离子通道在慢性鼻窦炎鼻窦黏膜中表达的研究

目的观察人钙离子激活的氯离子通道1(hCLCA1)在慢性鼻窦炎筛窦黏膜中的表达,探讨其在慢性鼻窦炎发病机制中的作用。方法取慢性鼻窦炎患者筛窦黏膜10例,另取10例正常筛窦黏膜作为对照。应用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组鼻窦黏膜中hCLCA1mRNA的表达,应用免疫荧光方法观察hCLCA1蛋白在各组鼻窦黏膜中的表达,比较hCLCA1mRNA及蛋白在各组中的表达情况。结果 hCLCA1表达于鼻窦黏膜上皮的杯状细胞。慢性鼻窦炎组hCLCA1mRNA表达水平及阳性细胞面积比(51.6%±4.5%)高于对照组(7.2%±5.1%),差异有统计学意义(P<0.01)。结论在基因和蛋白水平上,hCLCA1在慢性鼻窦炎鼻窦黏膜中均有明显表达,其在慢性鼻窦炎的发病机制中可能具有重要作用,可能与上皮杯状细胞的增生及黏液高分泌有关。

基于钙激活氯离子通道的Piezo1通道调节剂高通量筛选模型的构建

目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的FRT细胞株(简称FRT模型细胞),倒置荧光显微镜检测ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L在FRT模型细胞中的表达,加入ANO1激活剂离子霉素10μmol·L^-1,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1调节剂Jedi1(200μmol·L^-1),Jedi2(150μmol·L^-1),Yoda1(20μmol·L^-1)和Gd3+(20μmol·L^-1),应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1激活剂Jedi1,Jedi2和Yoda1,按0.2,1,5,10,25,50,75,100,200,300,400,500,600,700,800,900和1000μmol·L^-1设置浓度梯度,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值并绘制浓度依赖曲线。向FRT细胞中加入Yoda1,按同样的方法设置浓度梯度,通过Fura-2/AM荧光探针检测细胞内的钙信号随Yoda1浓度的变化,分析细胞内Ca^2+浓度与FRT模型细胞相对荧光强度变化值之间的关系。计算模型Z′因子及信噪比。结果RT-PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明,FRT细胞内源性表达Piezo1。ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L表达清晰,位置正确,并且ANO1-EGFP被离子霉素激活后模型荧光淬灭,证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性,FRT模型细胞构建成功。FRT模型细胞加入Jedi1,Jedi2和Yoda1荧光均淬灭,加入Gd3+后再加入Yoda1荧光不淬灭,证实模型可以用于筛选Piezo1通道调节剂;在FRT模型细胞中离子霉素的EC50为(7.76±0.53)μmol·L^-1,Yoda1的EC50为(17.27±1.21)μmol·L^-1,Jedi1的EC50为(200.60±4.46)μmol·L^-1,Jedi2的EC50为(158.10±4.65)μmol·L^-1。FRT模型细胞相对荧光强度变化值与细胞内Ca^2+浓度呈正相关,模型能敏感地反应细胞内钙信号变化。模型Z′因子为0.82,信噪比为13.29∶1,可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选。结论成功构建了可快速、准确、便捷筛选Piezo1通道激活剂和抑制剂的高通量筛选模型。

胞内氯离子通道蛋白1表达与胆囊癌侵袭转移的相关性研究

目的探讨胆囊癌组织胞内氯离子通道蛋白1（chloride intraeellular channel 1，CLICl）蛋白表达与胆囊癌侵袭转移的关系。方法应用免疫组织化学sP染色法及Westernblot技术，检测36例胆囊癌和相应癌旁组织中CLICl蛋白的表达。采用Spearman等级相关分析、x。检验对结果进行分析。结果免疫组化结果提示，CLICl蛋白高表达于胆囊癌组织，癌旁组织中CLICl蛋白表达较少，阳性表达率分别为81％（29／36）和44％（16／36），差异有统计学意义（P〈0．05）。胆囊癌组织CLICl表达与患者性别和年龄无关（P〉0．05），而与肿瘤的淋巴转移、浸润深度、TNM分期和分化程度相关（P〈0．05）。Westernblot结果显示，CLICl的特异性条带出现在Marker标准相对分子质量27000左右，CLICl在胆囊癌的阳性率高于癌旁组织（P〈0．05）。结论CLICl可能在胆囊癌的发生发展过程中发挥重要的作用，CLICl蛋白的高表达与胆囊癌的侵袭转移密切相关。

胞内氯离子通道蛋白1与结肠癌关系的研究进展

目的总结胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)与结肠癌关系的研究进展。方法综述近年来关于CLIC1与结肠癌关系研究进展的相关文献并对其进行分析。结果 CLIC1可作为氯离子通道发挥其生理功能,在组织中分布广泛,在多种肿瘤组织中高表达。CLIC1的异常表达可导致多种疾病,其也参与结肠癌的发生、发展、转移、治疗等许多过程。结论 CLIC1有望作为结肠癌早期诊断的生物标志物及基因治疗的靶点;对于调控其表达的关键基因、参与结肠癌发生、进展的信号转导具体途径以及与其他相关分子的相互作用等目前仍不清楚,有待更进一步的研究。

细胞内氯离子通道蛋白1与肿瘤

细胞内氯离子通道蛋白1（CLIC1），又称核氯离子通道蛋白27（NCC27），具有重要的生理功能。CLIC1的异常表达则可以引发各种疾病，尤其是肿瘤的发生。近年来研究表明，CLIC1参与肿瘤的发生、发展及治疗等诸多过程。

细胞内氯离子通道蛋白1蛋白表达与结直肠癌发生、发展及预后的关系

目的探讨细胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)蛋白在结直肠正常黏膜、腺瘤及癌组织中的差异性表达及其与结直肠癌发生、发展和预后的关系。方法采用免疫组化组织芯片方法检测150例结直肠正常黏膜组织、62例结直肠腺瘤组织以及187例结直肠癌组织中的CLIC1蛋白表达情况,并分析CLIC1蛋白表达与结直肠癌临床病理因素及预后的关系。结果 CLIC1蛋白在结直肠正常黏膜组织(26.00%,39/150)、腺瘤组织(66.13%,41/62)和癌组织(82.89%,155/187)中的表达阳性率依次升高,之间的差异均有统计学意义(P<0.001)。CLIC1蛋白表达与结直肠癌的TNM分期有关(P=0.007),而与患者性别(P=0.553)、年龄(P=0.206)、肿瘤直径(P=0.185)、肿瘤分化程度(P=0.062)及肿瘤部位(P=0.598)均无关。CLIC1蛋白阳性表达者术后中位生存时间为80个月,CLIC1阴性表达者术后中位生存时间为111个月。log-rank检验表明,CLIC1蛋白阳性表达患者生存率(66.40%)明显低于阴性表达者(80.00%),P=0.031。结论 CLIC1蛋白表达与结直肠癌的发生、发展及预后有关,CLIC1可能是一个潜在的肿瘤标志物。

子宫内膜样腺癌中CLIC1蛋白的表达及临床意义

目的探讨细胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)在子宫内膜样腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测100例子宫内膜样腺癌组织和50例正常子宫内膜组织中CLIC1蛋白的表达,并分析其表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系。结果 CLIC1蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率为63.0%,高于其在正常子宫内膜组织中的22.0%(P<0.05);CLIC1蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达与病理分期及淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、是否绝经、浸润深度和组织学分级无关(P>0.05)。结论 CLIC1蛋白过表达可能促进了子宫内膜样腺癌的发生、发展。

CLIC1在乳腺癌中的表达及预后价值

目的:评估细胞内氯离子通道1(chloride intracellular channel 1,CLIC1)在乳腺癌中的表达水平及对患者预后的影响。方法:通过免疫组织化学法分析116例乳腺癌组织芯片中CLIC1的表达及与临床病理参数的关系,Kaplan-Meier生存曲线及单因素与多因素Cox回归分析其对患者预后的影响。结果:免疫组化结果显示,CLIC1在乳腺癌组织中高表达,且与肿瘤大小(P=0.013)、TNM分期(P=0.006)、病理学分级(P<0.001)、淋巴结转移(P=0.025)和Ki67(P=0.011)相关。生存分析显示,CLIC1高表达的患者总体生存期较短(P<0.001),Cox回归分析显示,CLIC1是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素。结论:高表达的CLIC1与乳腺癌患者的不良预后密切相关,提示其可能作为乳腺癌潜在的生物学诊断指标。

CLCA1在结直肠癌中的表达及其基因集富集分析

目的探讨钙激活的氯离子通道辅助蛋白1(CLCA1)在结直肠癌(CRC)中的表达及其与临床病理特征和预后的关系,分析其基因集富集情况。方法通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库下载CLCA1 mRNA表达数据,应用GSEA软件进行CLCA1不同表型的基因集富集分析。分析CLCA1 mRNA在CRC组织与癌旁组织中的差异表达,并分析其与临床病理特征的关联性。采用免疫组织化学染色法分析CLCA1在CRC组织和癌旁组织中的差异。结果CRC组织中CLCA1表达较癌旁组织明显降低。CRC组织的免疫组织化学染色评分显著低于癌旁组织[(2.46±1.09)分vs(5.65±0.49)分;t=6.458,P=0.000]。癌旁组织的CLCA1 mRNA表达水平显著高于临床Ⅰ~Ⅱ期CRC组织和临床Ⅲ~Ⅳ期CRC组织(P<0.05),临床Ⅰ~Ⅱ期CRC组织的CLCA1 mRNA表达水平显著高于临床Ⅲ~Ⅳ期CRC组织(P<0.05)。CLCA1高表达组临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、N分期为N0期以及M分期为M0期的人数比例显著大于CLCA1低表达组(P<0.05)。CLCA1高表达组的生存预后显著优于CLCA1低表达组(χ2=8.200,P=0.004)。基因集富集分析结果显示,有19个基因集显著富集于CLCA1高表达表型,未发现有基因集显著富集于CLCA1低表达表型。结论CLCA1在CRC组织中表达下调,并且与患者的临床病理特征及预后有关,具有作为CRC诊断、治疗和预后预测标志物的潜力。

肺癌转移相关蛋白的比较蛋白质组分析与鉴定

采用比较蛋白质组技术对肺巨细胞癌高、低转移株的蛋白质表达谱进行双向电泳分离和MALDI TOF分析 ,并在蛋白质和mRNA水平进行进一步验证 ,成功鉴定了 11个肺癌转移相关蛋白 .其中 ,候选蛋白膜联蛋白1(ANX1)、细胞骨架蛋白 (CK18)、Rho GDP解离抑制剂 1(GDIR)、原肌球蛋白 3(TPMF)、蛋白谷氨酰胺γ 谷氨酰转移酶 (TGLC)和白介素 18(IL 18)在肺巨细胞癌高转移株显著高表达 ,而候选蛋白核氯离子通道蛋白 1(CLI1)、蛋白质二硫键异构酶 (ER6 0 )、肌酸激酶、硫氧还蛋白过氧化物酶 1(PDX1)和热休克蛋白 6 0(CH6 0 )在肺巨细胞癌高转移株显著低表达 .大多数的候选蛋白可通过调控肿瘤细胞的生长、迁移、粘附、凋亡和肿瘤免疫等环节来影响肿瘤细胞的侵袭和转移能力 .迄今为止 ,还未见候选蛋白CLI1和IL 18与肺癌转移相关的报道 。

CLIC1、IGFBP7在完全性葡萄胎中的表达及其临床价值

目的探讨细胞内氯离子通道1（CLIC1）和胰岛素样生长因子结合蛋白7（IGFBP7）在完全性葡萄胎（CHM）中的表达及其临床价值。方法采用免疫组织化学（IHC）染色法检测本院收治的77例葡萄胎（HM）患者的石蜡组织中P57KIP2的表达,筛选出CHM患者。采用IHC法检测CHM患者的石蜡组织中CLIC1和IGFBP7的表达。结果①77例HM中CHM 66例（85.71%）,其中14例（21.21%）进展为妊娠滋养细胞肿瘤（GTN）。②CHM恶变组中CLIC1的表达高于良性转归组（P=0.014）,恶变组中IGFBP7的表达明显低于良性转归组（P=0.002）。③Pearson相关分析显示CLIC1与IGFBP7的表达无相关性（P=0.761）。Logistic回归分析结果显示：IGFBP7低表达是CHM恶变的独立危险因素,P=0.005,OR=8.493〔95%置信区间（CI）：1.878~8.401〕;血清hCG〉5×105 mIU/mL是CHM恶变的独立危险因素,P=0.011,OR=11.251（95%CI：1.731~73.151）。④CLIC1的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.707,最佳截断点为10.5分,灵敏度为42.90%,特异度为94.20%。IGFBP7的AUC=0.764,最佳截断点为7.0分,灵敏度为64.30%,特异度为78.80%。将两个指标串联结合,预测CHM恶变的灵敏度21.42%,特异度100%;将两个指标并联结合,灵敏度85.71%,特异度71.15%。结论 CLIC1的表达上调、IGFBP7的表达下调在CHM的恶变中起重要作用,但两者的表达无明显相关性。并联结合两指标的IHC结果预测CHM的恶变的准确性较单一指标有所提高。结合临床高危因素,有望成为早期预测葡萄胎恶变的辅助指标。

二例先天性肌强直的CLCN1基因突变研究

目的探讨2例先天性肌强直患者的氯离子通道蛋白-1（chloride channel2，CLCN1）基因突变情况和临床特点。方法收集福建地区1个先天性肌强直家系的先证者和1例散发性先天性肌强直患者的临床资料并进行综合分析。用PCR扩增患者cLCN1基因的全部外显子，通过直接测序检测突变的情况。结果家系1先证者的CLCN1基因第8外显子存在C．1024G〉A的杂合性错义突变，散发性患者的CLCN1基因第11外显子发现了c．1292C〉T的杂合性错义突变。结论先天性肌强直症临床表现缺乏特异性，CLCN1基因突变检测是确诊该病的有效方法。

气道上皮hCLCA1与肺内源性ARDS炎症及预后相关性的初步研究

目的探讨气道上皮人钙激活氯离子通道1(hCLCA1)表达水平与肺内源性急性呼吸窘迫综合征(ARDSp)患者肺部炎症水平、临床预后的相关性。方法入选2017年1月至2018年6月空军军医大学西京医院住院或门诊的肺病患者,按照疾病分为3组:ARDSp组(26例)、社区获得性肺炎(CAP)组(26例)及正常对照组(28例)。检测各组患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、hCLCA1水平及中性粒细胞百分比。其中ARDSp组选择治疗前及治疗7 d后2个时间点。结果与正常对照组比较,ARDSp组、CAP组BALF中hCLCA1、TNF-α、中性粒细胞百分比均显著升高(P值均<0.01),ARDSp组BALF中hCLCA1、TNF-α、中性粒细胞百分比高于CAP组(P<0.05或P<0.01)。将ARDSp患者分为生存组(14例)和死亡组(12例),治疗前死亡组BALF中hCLCA1、TNF-α水平均高于生存组(P值均<0.05);与治疗前比较,治疗7 d后ARDSp死亡组BALF中hCLCA1、TNF-α、中性粒细胞百分比差异无统计学意义,生存组则表现为下降(P值均<0.05)。直线相关分析显示,ARDSp患者BALF中hCLCA1与TNF-α呈正相关(r=0.823,P<0.05),中性粒细胞百分比与TNF-α呈正相关(r=0.417,P<0.05),同时与hCLCA1也呈正相关(r=0.430,P<0.05)。结论ARDSp患者BALF中hCLCA1水平显著高于CAP及正常肺叶患者,ARDSp死亡组BALF中hCLCA1水平高于生存组。ARDSp患者BALF中hCLCA1与TNF-α及中性粒细胞百分比呈正相关。推测hCLCA1与ARDSp的肺组织炎症水平及预后可能存在相关性。

CLIC1通过干扰线粒体动力学平衡促进内皮细胞损伤的研究

该文通过研究H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中氯离子通道蛋白1(chloride intracellular channel 1, CLIC1)对线粒体动力学平衡的影响,探讨CLIC1在内皮细胞损伤中的作用及机制。体外培养HUVEC细胞,分别用CLIC1抑制剂IAA94(40μmol/L)、H2O2(0.9 mmol/L)、IAA94(40μmol/L)和H2O2(0.9 mmol/L)联合处理,荧光法检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量; JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;定量PCR技术检测CLIC1、线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1, Drp1)以及线粒体融合蛋白1(mitofusin 1, Mfn1)的mRNA表达;免疫印迹技术检测CLIC1、Drp1蛋白的水平。结果显示:与正常组相比, H2O2处理的内皮细胞中ROS、MDA含量增加(P<0.05), CLIC1表达量上调(P<0.05),三磷酸腺苷(ATP)含量减少(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.001),线粒体融合蛋白Mfn1表达显著降低(P<0.05),线粒体分裂蛋白Drp1表达显著升高(P<0.05);而IAA94预处理2 h后,内皮细胞中ROS、MDA含量减少(P<0.05),线粒体融合蛋白Mfn1表达显著增加(P<0.05),线粒体分裂蛋白Drp1表达显著降低(P<0.05),线粒体膜电位升高(P<0.001)。以上结果表明, CLIC1在H2O2诱导的内皮细胞线粒体损伤中发挥重要作用,其机制可能与CLIC1干扰线粒体动力学平衡有关。

顺铂耐药胃癌细胞株MGC803/顺铂的建立及其耐药机制

目的建立顺铂耐药胃癌细胞株MGC803/顺铂(DDP),探讨其耐药机制.方法采用顺铂体外诱导MGC803细胞耐药,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测耐药株的半数抑制浓度(IC50),蛋白质印迹法(Western blot)检测氯离子通道蛋白1(CLIC1)表达量,构建野生型CLIC1质粒及靶向CLIC1的短发卡RNA(shRNA)质粒,Lip03000转染胃癌细胞之后,检测胃癌细胞对顺铂的IC50改变,进而采用MQAE荧光探针检测细胞内Cl-浓度,应用SPSS 22统计软件分析.结果成功诱导顺铂耐药细胞株MGC803/DDP,IC50为(7.02±0.13)mg/L,而MGC803的IC50为(1.29±0.09)mg/L,(t=36.090,P<0.05);MGC803/DDP的CLIC1蛋白相对MGC803上调(2.27±0.15)倍,(t=7.841,P<0.05);沉默MGC803/DDP的CLIC1基因后,CON、CN、KD组的IC50分别为(6.96±0.09)mg/L、(6.93±0.15)mg/L、(3.02±0.20)mg/L,KD组明显降低(F=0.209,P<0.05);MGC803细胞过表达CLIC1基因后,CON、CN、OE组的IC50分别为(1.35±0.07)mg/L、(1.25±0.07)mg/L、(4.77±0.12)mg/L,OE组明显升高(F=0.508,P<0.05);MQAE检测Cl-浓度,MGC803、MGC803/OE、MGC803/DDP、MGC803/DDP-KD的相对荧光强度分别为(1.02±0.03)、(0.61±0.02)、(0.67±0.01)、(1.39±0.02),MGC803/OE细胞内的Cl-浓度较MGC803高(t=10.800,P<0.05);MGC803/DDP的Cl-浓度较MGC803及MGC803/DDP-KD高,KD组的Cl-浓度最低(F=0.229,P<0.05).结论CLIC1基因在体外可诱导胃癌细胞MGC803对顺铂耐受,其机制可能与CLIC1表达上调,导致细胞内的Cl-浓度升高有关.