电压门控氯离子通道7基因致综合征性耳聋相关骨硬化症机制的研究进展

电压门控氯离子通道7(chloride voltage-gated channel 7,CLCN7)基因突变可使陷窝内酸化不能,造成骨溶解障碍,从而导致以全身骨密度增高为特征的骨硬化症及溶酶体储积疾病等。而硬化骨压迫损伤神经、中耳负压及耳硬化等均可导致耳聋。该文将介绍CLCN7基因及CLCN7蛋白结构功能、骨溶解过程(包括破骨细胞简介和骨溶解机制)、骨硬化症、CLCN7基因突变致骨硬化症的机制及其治疗以及骨硬化症与综合征性耳聋,以期为临床诊断及治疗提供依据。

前列腺癌组织钙离子激活氯离子通道蛋白7的表达及其与术后生化复发的关系探讨

目的探讨前列腺癌组织钙离子激活氯离子通道蛋白7(ANO7)的表达及其与术后生化复发的关系。方法回顾性选取空军军医大学第一附属医院于2014年3月至2018年4月收治的168例行根治性切除术治疗的前列腺癌患者作为研究对象。采用免疫组化法检测患者的前列腺癌组织与癌旁组织ANO7的表达情况,并根据根治术后3年内生化复发情况将患者分为生化复发组(n=30)与未生化复发组(n=138),分析前列腺癌组织ANO7的阳性表达与患者术后生化复发的关系。结果前列腺癌组织ANO7的阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);生化复发组前列腺癌组织ANO7的阳性表达率低于未生化复发组(P<0.05);临床分期、术前血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、标本Gleason评分、手术切缘是否阳性,有无包膜侵犯、精囊侵犯、神经周围侵犯、血管侵犯,以及前列腺癌组织ANO7表达均是前列腺癌患者术后生化复发的影响因素(P<0.05)。结论前列腺癌组织ANO7呈低表达,且ANO7阳性表达是前列腺癌患者术后发生生化复发的保护因素。

一例Ⅱ型常染色体显性骨硬化症患者氯离子通道蛋白7基因突变分析

目的检测1例Ⅱ型常染色体显性骨硬化症患者氯离子通道7（chloride channel7，CLCN7）基因的突变情况，探讨其分子发病机制。方法收集1例骨硬化症患者及100名健康成年人的血液标本，提取基因组DNA，PCR扩增CLCN7基因外显子并对所有外显子及其旁侧内含子序列进行DNA测序分析。结果患者CLCN7基因第25外显子存在c．2460delA缺失突变，导致CLCN7基因784位及其后所有密码子移码突变（Arg784GlyfsX29）。该突变为一新突变，正常人均未检测到该突变。结论CLCN7基因Arg784GlyfsX29移码突变是导致该骨硬化症患者发病的原因。

钙离子激活氯离子通道蛋白7在前列腺癌核因子-κB信号通路的表达及其临床意义

目的探讨钙离子激活氯离子通道蛋白7(ANO7)在前列腺癌核因子-κB(NF-κB)信号通路的表达及其临床意义.方法利用Tribbles同源蛋白1(TRIB1)过表达前列腺癌细胞株构建NF-κB信号通路激活细胞和动物模型,NF-κB信号通路抑制剂构建NF-κB信号通路抑制细胞模型.用蛋白质印迹法(Western blot)、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫组织化学(IHC)分析前列腺癌中NF-κB信号通路对ANO7表达的调控影响,分析临床数据中ANO7表达与前列腺癌临床病理特征之间的关系.结果在NF-κB信号通路激活细胞和动物模型中可见ANO7表达上调;在NF-κB信号通路抑制细胞模型中可见ANO7表达下调.组织芯片中ANO7在肿瘤组织和癌旁组织中高表达率分别为45.8%、85.7%,差异有统计学意义(χ^2=7.258,P<0.01).ANO7表达与Gleason评分、病理分级显著相关(χ^2=19.797,19.797,P<0.01),癌症基因组图谱(TCGA)与泰勒(Taylor)数据库得到相似的结果.运用Kaplan-Meier分析发现在Taylor数据库中ANO7与患者的预后明显相关(P<0.01).最后采用Cox回归模型进行多因素综合分析发现在影响前列腺癌预后的队列中,ANO7(P<0.05)、Gleason评分(P<0.01)和病理分级(P<0.01)都是前列腺癌的独立预测指标.结论NF-κB信号通路调控前列腺癌ANO7表达,且ANO7的表达与前列腺癌明显相关.

晚期糖基化终末产物可通过调节V-ATPase a3与ClC-7影响破骨细胞的泌酸功能

背景:晚期糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响存在争议,作者的前期研究表明晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制骨吸收功能,但关于其对破骨细胞泌酸功能的影响尚不明晰。目的:探究晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸功能的影响及其机制。方法:以15μg/L的RANKL对破骨细胞前体RAW 264.7进行定向诱导(正常组),实验组中另加入50-400 mg/L不等的晚期糖基化终末产物及对照用牛血清白蛋白(100 mg/L)。通过骨吸收实验验证晚期糖基化终末产物对骨吸收的抑制效应,并以吖啶橙染色观察晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸功能的影响;进一步检测质子泵V-ATPase a3及氯离子通道ClC-7的表达情况,分析晚期糖基化终末产物影响破骨细胞泌酸的相关机制。结果与结论:(1)晚期糖基化终末产物组的骨吸收面积较正常组显著减少(P<0.05);(2)吖啶橙染色显示晚期糖基化终末产物组的红色荧光(620 nm)强度较正常组显著减少(P<0.05),抑制程度随着刺激浓度的增高而加重;(3)免疫细胞化学染色、蛋白质免疫印迹及PCR发现,晚期糖基化终末产物组的V-ATPase a3及ClC-7表达量均较正常组显著下降(P<0.05);(4)综上结果表明,晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制破骨细胞的泌酸功能,其机制可能与晚期糖基化终末产物抑制了质子泵V-ATPase a3及氯离子通道ClC-7的表达相关。

一例Ⅱ型常染色体显性骨硬化症患者CLCN7基因突变分析

目的探讨1例Ⅱ型常染色体显性遗传骨硬化症(autosomal dominant osteopetrosis,ADO)患者的氯离子通道7基因(chloride channel 7,CLCN7)的突变情况。方法纳入1例骨硬化青年女性患者。采用骨密度检测、X线成像等临床手段对其临床表现进行分析;并对患者及其父亲的CLCN7基因进行外显子测序,从正常人DNA样本库中随机挑选50个样本进行CLCN7基因外显子测序来对比分析测序结果。结果X线片显示椎体骨密度增加,成“夹心饼”样;髋部和股骨骨密度增加,盆骨出现“骨中骨”现象。骨密度结果显示腰椎1-4 Z值为13,股骨颈Z值为7.8,全髋Z值为10,患者骨骼呈骨硬化表现,测序结果显示9号外显子上发生错义突变(纯合突变),导致c.746C>T(p.Pro249Leu);其父亲和50个对照样本均无此突变。结论此患者为CLCN7基因c.746C>T(p.Pro249Leu)纯合错义突变的ADOⅡ型常染色体显性骨硬化症。

Ⅱ型常染色体显性遗传骨硬化症一个家系的临床和遗传学分析

目的检测常染色体显性遗传性骨硬化症一个家系氯离子通道7(chloride channel 7,CLCN7)基因的突变情况。方法收集一骨硬化症家系中2例患者及先证者父母共4人的血液标本,提取基因组DNA,用PCR扩增CLCN7外显子并对所有外显子进行测序分析。结果 2例患者及先证者父亲均存在CLCN7第10号外显子856位核苷酸C变成T,导致286位的精氨酸(Arg)被色氨酸(Trp)代替(R286W),为一已知突变;先证者母亲无此突变。存在CLCN7突变的3人临床表现不同,提示该遗传疾病存在外显不全。结论 CLC7 R286W突变是导致该家系骨硬化症的致病原因。

MITF在破骨细胞中的作用研究进展

MITF(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)是小眼畸形相关转录因子,它在破骨细胞中的作用成为近几年骨科领域的研究热点。不断有研究证实,MITF调节破骨细胞中众多功能相关基因的转录,包括抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistant acid phosphatase,TRAP),组织蛋白酶K(Cathepsin K),破骨细胞相关受体(osteoclast-associated receptor,OSCAR),氯离子通道-7(chloride channel-7,Clcn7),骨硬化相关跨膜蛋白-1(osteopetrosis-associated transmembrane protein 1,Ostm1)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)等。无论在MITFmi/mi突变的小鼠模型还是来源于MITFmi/mi突变的小鼠体外培养的破骨样细胞中,我们都能检测到上述与破骨细胞众多功能相关基因的表达都会受到明显抑制,导致破骨细胞功能异常,小鼠患有严重的骨硬化病。因为小鼠和人类的MITF基因序列具有很高的同源性,所以理解MITF调控系统对小鼠破骨细胞的作用也将有助于我们阐明妇女绝经后的骨质疏松症、骨硬化病或者发生在多发性骨髓瘤患者身上的溶骨性骨质破坏和高钙血症等人类疾病的分子作用机制。现就MITF在破骨细胞中的作用做一综述。

抗人CLC-7多克隆抗体的制备

目的制备抗氯离子通道蛋白(chloride channel 7,CLC-7)多克隆抗体.方法将表达载体pEGFP-CLC-7导入感受态大肠杆菌DH-5α,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalacto-side,IPTG)诱导细菌表达CLC-7蛋白;经SDS-PAGE电泳后切胶获得纯化的CLC-7蛋白,与免疫佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,免疫5次后,经心脏采血获取抗血清,用Western blot检测抗血清特异性及效价.结果与市售的CLC-7抗体比较,所获抗CLC-7抗血清可识别细菌及HeLa细胞表达的CLC-7蛋白,表明抗血清有较好的特异性;1:4000倍稀释抗血清时,Western blot实验仍可获得清晰的反应带,表明所制备的抗CLC-7多克隆抗体有较高的效价.结论利用原核表达的CLC-7蛋白作为抗原免疫动物,获得了高效价且特异性好的抗人CLC-7蛋白多克隆抗体,该抗体可用于后续研究.

常染色体显性遗传骨硬化症Ⅱ型的2例家系报道及文献复习

目的分析两例常染色体显性骨硬化症(autosomal dominant osteopetrosis,ADO)患者的临床特点,对先证者及其家系的致病基因突变进行研究。方法收集两例骨硬化症患者的的临床特征及实验室检查资料进行总结分析,并复习相关文献对该病的诊治思路进行归纳总结。结果基因检测显示先证者1的氯离子通道蛋白7(chloride channel protein 7,CLCN7)基因第24外显子新的错义突变,即p.Gly765Cys,先证者2的CLCN7的第10外显子发现了一个已知的错义突变,即p.Arg286Trp,两位先证者均有骨量异常增高表现,椎体呈“夹心饼”样改变,且两者均表现为血钙、磷和碱性磷酸酶水平正常,而乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平升高。结论ADO患者主要表现为骨密度异常增高、骨脆性增加及容易骨折等,目前该疾病多采取对症治疗,严重时可导致贫血、血小板减少伴出血、频发感染、肝脾肿大等,通过文献复习进一步总结ADO的临床表现和诊疗特点。