SWE检查联合氯离子通道蛋白-3在诊断宫颈癌中的应用

本文探究实时剪切波弹性成像(SWE)联合氯离子通道蛋白-3(ClC-3)诊断宫颈癌的价值。选取疑似宫颈病变的105例患者作为研究对象,包括50例良性病变患者(良性病变组)和55例宫颈癌患者(宫颈癌组),选取同期50例体检健康者作为对照组。通过SWE检查所有受试者的弹性模量最大值、弹性模量平均值。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血清ClC-3 mRNA水平。以临床病理诊断为金标准,通过ROC曲线评价弹性模量最大值、弹性模量平均值、血清ClC-3 mRNA诊断宫颈癌的价值。与对照组和良性病变组相比,宫颈癌组患者弹性模量最大值、弹性模量平均值、血清ClC-3 mRNA水平升高(P<0.05)。弹性模量最大值和弹性模量平均值均与ClC-3 mRNA显著正相关(r=0.447,P<0.001),与单一检查相比,弹性模量最大值、弹性模量平均值、ClC-3 mRNA联合诊断宫颈癌的AUC和敏感度升高(P<0.05)。SWE成像参数与血清ClC-3 mRNA变化与宫颈癌发生具有一定相关性,SWE联合血清ClC-3 mRNA检查具有较高的宫颈癌诊断价值。

氯通道蛋白-3在透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞中的表达

目的研究透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞氯通道蛋白-3(chloride channel protein 3,CLC-3)的表达。方法随机收集40例老年性白内障手术患者和5例透明晶状体(来自晶状体脱位患者)的晶状体前囊膜,采用免疫组织化学染色和免疫荧光技术检测晶状体上皮细胞CLC-3的表达。结果CLC-3阳性表达于晶状体上皮细胞的细胞膜。老年白内障组40张切片中,CLC-3表达均为阳性。而透明晶状体组5张切片中,4张阴性,1张可疑阳性。计算机图像分析结果,透明晶状体组平均吸光度(A)值明显低于老年白内障组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年性白内障患者晶状体上皮细胞CLC-3表达阳性,CLC-3可能参与老年性白内障的形成。

氯离子通道蛋白-3对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的:观察氯离子通道蛋白-3(ClC-3)对胶质瘤BT-235细胞增殖和侵袭的影响的子机制。方法:采用siRNA技术构建ClC-3表达沉默的人胶质瘤BT-235细胞株,设为siClC-3组,并设置空白对照组和空载体组;采用Western bolting检测3组细胞中ClC-3的表达,CCK8法检测细胞增值活性,ranswell实验用于测定细胞侵袭能力,通过测量细胞容积检测细胞调控性容积下降率,流式细胞术用于测定细胞周期;采用Western bolting检测cyclin D1、MMP-2和MMP-9的表达。结果:相对于空白对照组,siClC-3组ClC-3表达明显降低(P<0.01),细胞增殖活性明显降低(P<0.01),细胞迁移率明显降低(P<0.01);空白对照组细胞调控性容积下降率为(79.35±2.31)%,而siClC组仅为(19.46±1.76)%,差异有统计学意义(P<0.01);培养48 h的空白对照组BT-235细胞G0/G1期占比率为(57.2±3.1)%,而siClC-3组G0/G1期占比率提升至(71.3±4.0)%,产生明显的G0/G1期阻滞,差异有统计学意义(P<0.01);相对于空白对照组,siClC-3组G1期调控蛋白cyclin D1、侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9表达水平明显降低(P<0.01)。结论:ClC-3能明显增强胶质瘤BT-235细胞增殖和侵袭能力,其作用机制与增加细胞调控性容积下降率,诱导cyclin D1、MMP-2和MMP-9表达有关。

氯通道蛋白-3和水通道蛋白-1在大鼠半乳糖性白内障晶状体中表达水平的变化

目的研究大鼠半乳糖性白内障晶状体中氯离子通道蛋白-3(CLC-3)和水通道蛋白-1(AQP-1)表达水平的变化,探讨CLC-3和AQP-1与白内障发病的关系。方法健康清洁级Wistar大鼠88只随机分为空白对照组(8只)、生理盐水组(40只)和半乳糖性白内障模型组(Gal组)(40只)。生理盐水组和Gal组根据处理时间不同各亚分为5个亚组,每个亚组8只大鼠。Gal组单侧眼球后注射D-半乳糖生理盐水注射液,生理盐水组同期单侧眼球后注射等体积无菌生理盐水,每日裂隙灯下观察大鼠晶状体混浊的动态变化,并参照Kador等的分级标准分期记录。分别于第1次给药后第3、7、14、21、30天在全身麻醉下处死各组实验大鼠,摘出晶状体,应用实时荧光定量PCR法检测各组晶状体中CLC-3mRNA和AQP-1mRNA含量的变化。结果透明晶状体和半乳糖性白内障晶状体中均有CLC-3mRNA和AQP-1mRNA的表达;生理盐水组各时间点CLC-3mRNA和AQP-1mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);Gal组于3、7、14d时CLC-3mRNA表达逐渐增高,均高于同期生理盐水组,到14d时约达正常水平的7倍,21d、30d时又有所下降,均低于同期生理盐水组(P<0.01);各时间点晶状体CLC-3mRNA含量两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01);模型组于3d时AQP-1mRNA表达已下降,与同期生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05),且随着白内障的进一步发展,AQP-1mRNA含量逐渐降低,均低于同期生理盐水组(P<0.01);各时间点晶状体AQP-1mRNA含量两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论晶状体中CLC-3和AQP-1表达的变化可能与白内障的发生发展有着密切的联系。

腹腔注射去甲肾上腺素小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3表达变化及其意义

目的观察腹腔注射去甲肾上腺素(NE)小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3(Cl C-3)表达变化,并探讨其意义。方法将C57BL/6小鼠分为NE组、酚妥拉明(Phe)+NE组、对照组; NE组每天腹腔注射NE(2 mg/kg); Phe+NE组每天先腹腔注射Phe(8 mg/kg),2 h后再腹腔注射NE(2 mg/kg);对照组每天腹腔注射等量生理盐水。所有药物连续注射7 d后,测算各组小鼠心脏指数并观察心肌组织形态学变化,Real-time PCR法检测各组小鼠心肌组织中Cl C-3和心房钠尿肽(ANF) mRNA,Western blotting法检测各组小鼠心肌组织中Cl C-3蛋白。结果 NE组、Phe+NE组、对照组小鼠心脏指数分别为5. 22±0. 46、4. 80±0. 23、4. 61±0. 25,NE组与Phe+NE组、对照组相比,P均<0. 05; NE组小鼠心肌细胞和心肌肌束排列异常,心肌细胞及细胞核异常肥大、变形,细胞核聚集,出现明显的心脏重构、心肌细胞增大现象。NE组、Phe+NE组、对照组小鼠心肌组织中Cl C-3 mRNA的相对表达量分别为0. 50±0. 10、1. 16±0. 38、1. 00±0. 00,ANF mRNA的相对表达量分别为2. 95±1. 78、1. 96±0. 75、1. 00±0. 00,Cl C-3蛋白的相对表达量分别为0. 46±0. 02、0. 68±0. 02、0. 69±0. 04,NE组与Phe+NE组、对照组相比,P均<0. 05。结论 NE可诱导小鼠心肌肥厚,其机制可能与其抑制Cl C-3 mRNA和蛋白的表达有关。

过表达氯离子通道蛋白3对异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚的预防作用与机制

目的探讨氯离子通道蛋白3(ClC-3)基因过表达对异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌肥厚的预防作用及机制。方法运用腺相关病毒9(AAV9)感染方法构建ClC-3过表达小鼠模型和原代心肌细胞模型,采用蛋白质印迹法与qRT-PCR检测小鼠心脏组织和原代心肌细胞中ClC-3的表达以确定模型是否建立成功。32只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,每组8只。对照组连续7 d腹腔注射生理盐水,ISO组连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1,AAV9-bv+ISO组用空白载体AAV9病毒颗粒感染小鼠4周后连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1,AAV9-ClC-3+ISO组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒感染小鼠4周后连续7 d腹腔注射ISO 7.5 mg•kg^-1•d^-1。采用心脏超声检查小鼠心功能变化,计算心脏体重指数,采用qRT-PCR检测心肌组织中心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)的mRNA表达水平,H-E染色观察左心室形态学变化,苦味酸-天狼星红(PSR)染色观察心脏组织胶原纤维变化。取乳鼠摘出心脏,体外培养原代心肌细胞并分为4组,对照组未予任何干预,ISO组用0.1μmol/L ISO干预48 h,AAV9-ClC-3组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒感染细胞48 h,AAV9-ClC-3+ISO组用携带ClC-3基因的AAV9病毒颗粒和0.1μmol/L ISO共同干预48 h。采用芯片膜片钳技术检测小鼠原代心肌细胞的容积激活性氯电流(ICl,vol)。结果蛋白质印迹法和qRT-PCR检测结果均表明ClC-3过表达小鼠和原代心肌细胞模型成功建立。AAV9介导的ClC-3过表达能缓解ISO诱导的小鼠心脏体重指数、收缩末期室间隔厚度、收缩期左室后壁厚度和舒张期左室后壁厚度的增加,改善心脏组织形态学异常和心脏纤维化,减少心脏组织中ANP、BNP mRNA表达的增加,并能体外抑制ISO导致的心肌细胞ICl,vol降低。结论ClC-3过表达可预防ISO诱导的小鼠心肌肥厚,其机制可能与心肌细胞ICl,vol激活有关。

氯离子通道蛋白-3在胶质瘤免疫逃逸中的作用及其机制

近些年来免疫逃逸在肿瘤发生、发展中所起的作用受到越来越多学者的关注。胶质瘤起源于神经上皮组织,是最常见的原发性颅内恶性肿瘤,其复发率高、预后差。究其原因,高度侵袭性和免疫逃逸是导致胶质瘤患者预后不良的原因之一。氯离子通道蛋白-3(chloride channel-3,Cl C-3)作为氯通道家族一员,在胶质瘤中高表达并广泛参与细胞容积调节、增殖、迁移及凋亡等多种生理过程;但其是否介导胶质瘤的免疫逃逸目前未见报道。

硫化氢激活H9c2心肌细胞容积调节性氯通道

目的观察硫化氢(H2S)对H9c2心肌细胞容积调节性氯通道(VRCC)的影响。方法培养大鼠H9c2心肌细胞,用H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理H9c2心肌细胞。分别应用Western blot和全细胞膜片钳技术分析蛋白的表达和VRCC的开放和关闭。结果等张灌流液处理的H9c2心肌细胞可记录到微弱的背景氯电流。低张灌流液处理可明显增加H9c2心肌细胞的氯电流(P<0.01),高张灌流液处理则可减弱这种增强作用(P<0.05)。Western blot检测显示H9c2心肌细胞上存在ClC-3氯通道蛋白的表达。用400μmol/L NaHS处理0～30 min可激活H9c2心肌细胞上的氯通道,高张灌流液处理抑制NaHS处理诱导的氯通道激活。400μmol/L NaHS处理0～30min对H9c2心肌细胞ClC-3氯通道蛋白的表达无明显影响(P>0.05)。结论 H9c2心肌细胞存在VRCC和ClC-3氯通道蛋白的表达,H2S处理可激活VRCC而不影响ClC-3氯通道蛋白的表达。

CLC3蛋白在肝细胞中的表达及亚细胞定位研究

目的:观察CLC氯通道/转运蛋白家族(CLC3)氯离子通道蛋白在不同细胞系中的表达,明确CLC3蛋白在人肝实质细胞内的表达及亚细胞定位,为阐明CLC3在非酒精性脂肪肝中的作用及可能机制提供理论依据。方法:培养不同来源的细胞株,包括小鼠和人的肝实质细胞株,Western blot方法检测CLC3蛋白在肝细胞的表达;免疫荧光和蔗糖密度梯度离心方法检测CIC3在肝细胞内的表达定位。结果:在不同来源的细胞株中均见CLC3蛋白的表达且肝实质细胞有较大表达量;梯度密度离心分离肝细胞亚细胞组分,发现内吞体蛋白和CLC3蛋白峰值同时出现;免疫荧光发现CLC3蛋白与内吞体双染。结论:CLC3蛋白在肝实质细胞相对高表达并主要定位于内吞体。

ClC-3基因过表达对小鼠骨量和骨结构的影响

目的:研究过表达电压门控氯通道家族蛋白成员3(voltage-gated chloride channel family protein 3,ClC-3)基因对小鼠骨骼的影响。方法:3月龄雄性FVB小鼠用鼠尾基因检测法确定基因型后分为2组:野生型(WT)组和ClC-3过表达(ClC-3 transgene)组,每组各8只。分别测量2组小鼠体重,右侧胫骨长度和重量。取胫骨上段和中段进行脱钙,石蜡包埋,切片,HE染色后,采用骨形态计量学分析胫骨上段松质骨的骨小梁面积百分数(percent trabecular area,%Tb.Ar)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁宽度(trabecular width,Tb.Wi)、骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)和胫骨中段皮质骨的骨组织总面积(total tissue area,T.Ar)、皮质骨面积(cortical area,Ct.Ar)、皮质骨面积百分数(percent cortical area,%Ct.Ar)、骨髓腔面积(marrow area,Ma.Ar)、骨髓腔面积百分数(percent marrow area,%Ma.Ar)。结果:小鼠经鼠尾基因检测后确认为野生型或ClC-3过表达型。与WT组相比,ClC-3 transgene组小鼠体重及胫骨长度重量均减小(P<0.05);松质骨的%Tb.Ar和Tb.Wi均减小(P<0.05),Tb.Sp增大(P<0.05),Tb.N的变化无统计学意义;皮质骨的T.Ar、Ct.Ar和%Ct.Ar均减小(P<0.05),%Ma.Ar增大(P<0.05),Ma.Ar的变化无统计学意义。结论:ClC-3过表达导致小鼠的皮质骨和松质骨骨量减少,骨结构变差,提示ClC-3可能参与了骨形成和/或骨吸收。

唾液腺黏液表皮样癌中CLIC3的表达及意义

目的 :探讨细胞内氯离子通道蛋白3(chloride intracellular channel protein 3,CLIC3)在唾液腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组织化学和Western免疫印迹方法检测MEC细胞株M3SP2和MC3中CLIC3的表达情况。应用免疫组织化学方法检测49例大唾液腺和18例小唾液腺MEC组织中CLIC3的表达,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:CLIC3在黏液表皮样癌组织中的阳性表达率为83.6%,正常唾液腺组织中无阳性表达(P<0.01)。CLIC3的高表达与唾液腺MEC的临床病理参数之间无显著相关性(P>0.05)。黏液表皮癌细胞株M3SP2和MC3均阳性表达CLIC3蛋白。结论:CLIC3可能在MEC的发生与发展中发挥一定作用。

ClC-3在糖尿病大鼠主动脉平滑肌、肾脏及脑组织中的表达及其变化

【目的】在糖尿病发展的不同时期探讨容积依赖性氯通道蛋白-3(ClC-3)的表达及其变化。【方法】用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病模型后,在第2、4、8、12和16周,用蛋白印记法检测主动脉、肾脏(皮质、髓质)及脑组织上ClC-3蛋白的表达。【结果】各组织上均检测到内源性ClC-3蛋白的表达,分子量在80KDa-110KDa之间;与对照组相比,糖尿病时大鼠主动脉平滑肌及脑组织上ClC-3蛋白的表达在第8周后显著性升高(P<0.05),肾髓质上ClC-3蛋白的表达显著性降低(P<0.05),而肾皮质上ClC-3蛋白的表达未见显著性差异。【结论】除肾皮质外,在糖尿病第8周开始,ClC-3蛋白在主动脉平滑肌及脑组织上表达显著性增加,而肾髓质表达显著性降低。

体外培养的牛角膜内皮细胞氯离子通道-3分子的检测

目的检测氯离子通道蛋白3(chloride channel 3,ClC-3)在体外培养的牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cell,BCECs)k中的表达和定位。方法应用免疫荧光法测定ClC-3在体外培养BCECs的所在部位,RT-PCR和Wester印迹法检测ClC-3mRNA和蛋白的表达。结果在体外培养的BCECs,RT-PCR可以扩增出长度为602bp的ClC-3的cDNA产物。Western印迹可见到约85ku的发光条带,细胞膜和部分细胞浆可见到ClC-3的表达。结论体外培养的BCECs在转录和翻译水平均有内源性ClC-3基因表达,表达产物存在定位于细胞膜和内质网部分细胞浆。

肾上腺素对新生大鼠心肌细胞体积的影响及其作用机制

目的观察肾上腺素(Adr)对新生大鼠心肌细胞体积的影响,并探讨其机制。方法原代培养新生大鼠心肌细胞,分为观察组和对照组,观察组加入Adr(1μmol/L),对照组加入等体积PBS,培养48 h。采用Count Star自动细胞计数仪测量各组心肌细胞体积变化;荧光显微镜观察心肌细胞氯通道蛋白3(Cl C-3)荧光强度,在所有拍摄条件相同尤其是曝光时间相同的条件下对心肌细胞拍照,用Image Pro Plus分析软件定量分析心肌细胞Cl C-3的平均光密度(AOD);Western blotting法检测心肌细胞Cl C-3。结果观察组及对照组心肌细胞体积分别为(964.80±60.00)、(716.28±57.49)μm3,心肌细胞Cl C-3的AOD分别为0.037±0.012、0.062±0.009,心肌细胞Cl C-3的相对表达量分别为0.372±0.027、1.040±0.210,两组比较,P均<0.05。结论 Adr能诱导新生大鼠心肌细胞肥大,其机制可能与下调Cl C-3表达有关。

加入去甲肾上腺素培养的心肌细胞株H9c2体积变化

目的观察去甲肾上腺素(NE)对H9c2心肌细胞体积的影响,并探讨其作用机制。方法取处于对数生长期H9c2细胞分为观察组和对照组,分别加入终浓度为2μmol/L的NE、等体积PBS,继续培养48 h。Countstar自动细胞计数仪测算细胞体积,Real Time-PCR法检测细胞心房钠尿肽(ANF)mRNA,免疫荧光法检测细胞氯通道蛋白3(Cl C-3)。结果实验组、对照组细胞体积分别为(2 446.0±193.3)和(1 736.0±265.6)μm3,二者比较,P<0.05。实验组、对照组ANF mRNA分别为1.63±0.14和1.00±0.13,二者比较,P<0.05。实验组、对照组细胞Cl C-3的AOD值分别为0.261±0.062和0.660±0.107,二者比较,P<0.05。结论 NE可导致H9c2细胞体积增大,可能与其上调ANF mRNA表达、抑制Cl C-3蛋白表达有关。

气道上皮细胞紧密连接在小鼠哮喘中的病理学改变

目的探讨小鼠支气管哮喘(哮喘)中气道上皮紧密连接的病理学改变。方法 10只小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组5只。哮喘组于第0、7天腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)溶液,在第14、15、16天以雾化的OVA熏诱小鼠,1 h/次、1次/d;对照组用PBS溶液替代OVA;2组小鼠在第18天回收肺组织,采用免疫荧光染色法评价小鼠哮喘模型的有效性,荧光定量PCR检测紧密连接相关蛋白基因Claudin 1、Claudin 3、Claudin 4、Claudin 5、Claudin 7、Clau-din 10在肺组织中的表达。结果哮喘组Claudin 3、Claudin 4、Claudin 10 m RNA水平较对照组低(P<0.05),而Clau-din 1、Claudin 5、Claudin 7 m RNA水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论哮喘病理过程中气道上皮细胞紧密连接松散,提示气道上皮屏障破坏。

CLC-3和AQP-1在大鼠半乳糖性白内障晶状体中表达水平的变化

目的：通过研究大鼠半乳糖性白内障晶状体中氯通道蛋白-3（chloride channel protein．3，CLC-3）和水通道蛋白-1（aquaporin-1，AQP-1）表达水平的变化，探讨CLC-3和AQP-1与白内障发病的关系。方法：将半乳糖注射Wistar大鼠单侧眼球后，裂隙灯下观察晶状体混浊情况，分别在造模后不同时间点摘取模型组和对照组大鼠的眼球，取出晶状体，运用实时荧光定量PCR方法检测各组晶状体中CLC-3 mRNA和AQP-1 mRNA含量的变化。结果：透明晶状体和半乳糖性自内障晶状体中均有CLC-3 mRNA和AQP-1 mRNA的表达；生理盐水对照组各时间点CLC-3 mRNA和AQP-1 mRNA表达无统计学差异；模型组于3、7、14d时CLC-3 mRNA表达逐渐增高，均高于同期对照组（P〈0．01），到14d时约达正常水平7倍，21、30d时又有所下降，均低于同期对照组（P〈0．01）；各时间点晶状体CLC-3 mRNA含量两两比较，差异均有极显著意义（P〈0．01）；模型组于3d时AQP-1 mRNA表达已下降，与同期对照组比较差异有显著性意义（P〈0．05），且随着白内障进一步发展，AQP-1 mRNA含量逐渐降低，均低于同期对照组（P〈0．01）；各时间点晶状体AQP-1 mRNA含量两两比较，差异均有极显著意义（P〈0．01）。结论：晶状体中CLC-3和AQP-1表达的变化可能与白内障的发生发展有着密切的联系。