急性肾衰大鼠肾脏上皮钠通道和钠钾氯共转运蛋白的表达

目的:观察急性肾功能衰竭(ARF)时钠转运蛋白NKCC2和γENaC的水平及细胞定位,探讨ARF时水盐代谢障碍的机制。方法:ARF组大鼠肌注甘油建立ARF模型,对照组(Control)则给等量生理盐水;观察肾组织病理学改变,检测血清及尿液生化指标,应用免疫组化和蛋白印迹方法检测肾脏NKCC2和γENaC表达及胞内定位。结果:肌注甘油后第1、2和3天ARF组大鼠尿量分别为(35.2±8.7)、(47.9±11.0)和(43.2±17.0)mL.d-1,明显高于对照组(P<0.05),第4天开始逐渐恢复到对照组水平[(22.0±5.2)mL.d-1];ARF大鼠血肌酐和尿素氮分别为(53.8±12.2)和(9.5±1.2)mmol.L-1,明显高于对照组[分别为(38.9±9.1)和(7.9±1.5)mmol.L-1](P<0.05);ARF组大鼠肾小管管腔变小,上皮细胞发生脂肪变性,管周有炎细胞浸润;免疫组化检测ARF组大鼠NKCC2和γENaC表达增加;蛋白印迹光密度比值分析,肾小管上皮细胞膜NKCC2和γENaC蛋白增加比例(分别为2.54±0.27和1.83±0.23)明显高于细胞质(分别为1.53±0.17和1.21±1.18)(P<0.05)。结论:ARF时细胞膜及细胞质NKCC2和γENaC表达均增高,以细胞膜增高更为明显,提示AFR时肾组织相对正常肾单位代偿性功能增强,通过钠转运蛋白水平及细胞定位的变化参与水盐代谢的调节。

鞘内注射布美他尼对大鼠急性疼痛行为及钠钾氯联合转运蛋白1表达的影响

目的探讨鞘内注射布美他尼对大鼠术后痛觉过敏形成的作用机制,为临床研究及应用提供理论参考。方法采用随机数字表法将大鼠分为对照组、注药组、手术组及实验组。采用热辐射法(热痛敏)、von Frey细丝法(机械痛敏)及疼痛累计评分法(疼痛保护反应)观察、记录术前及术后2、4、6 h大鼠的行为学改变,采用免疫组化,荧光显微镜观察各组术后2、4、6 h背根神经节(DRG)的NKCC1表达,并行阳性细胞计数。结果手术组与实验组术后各时间点的热痛阈均降低(P<0.05);实验组热痛阈明显高于手术组(P<0.05)。注药组大鼠在注药后2 h的机械痛阈升高(P<0.05),手术组大鼠的机械痛阈明显低于实验组(P<0.05)。手术组与实验组术后疼痛累计评分均升高(P<0.05),但手术组明显高于实验组(P<0.05)。手术组及实验组在各时间点阳性细胞计数均明显增多(P<0.01);组间比较,实验组的阳性细胞计数明显少于手术组(P<0.01)。结论鞘内注射布美他尼能提高切口痛模型大鼠的热痛阈值及机械痛阈值,降低疼痛累计评分,减少切口痛模型大鼠DRG的NKCC1的表达,提示布美他尼对急性疼痛过敏的形成有抑制作用,其抗伤害作用可能与抑制NKCC1活动有关。NKCC1对急性痛觉过敏形成与维持起重要作用。

星形胶质细胞气压损伤后钠-钾-氯共转运体及促分裂原活化蛋白激酶对AQP4表达的影响

目的探讨大鼠星形胶质细胞气压损伤后,钠-钾-氯共转运体(NKCC)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)对水通道蛋白-4(AQP4)表达变化的影响和相关机制。方法原代培养SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞。实验分为正常对照组、气压损伤组、布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂(SB203580)处理组。布美他尼和p38-MAPK抑制剂均预处理星形胶质细胞30 min后再进行气压损伤。损伤后3 h观察细胞水肿情况,并对AQP4的表达情况进行Western blot检测。结果光学显微镜下观察到气压损伤后的星形胶质细胞较正常对照组细胞明显肿胀,布美他尼和p38-MAPK抑制剂处理组星形胶质细胞水肿较气压损伤组减轻。Western blot检测发现布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂处理组的AQP4表达均较气压损伤组低(P<0.05)。结论星形胶质细胞气压损伤后,AQP4表达上调受NKCC的影响,以及p38-MAPK信号途径的调节。通过抑制NKCC的活性和p38-MAPK信号途径的激活,可降低气压损伤引起的星形胶质细胞AQP4表达的上调,减轻细胞水肿。

高盐饮食对更年期焦虑小鼠海马钾离子-氯离子共转运体2、钠-钾-氯离子失转运体1表达的影响

目的研究高盐饮食对更年期焦虑症小鼠钾离子-氯离子共转运体2(KCC2)、钠-钾-氯离子共转运体1(NKCC1)表达的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、4%高盐饮食组、8%高盐饮食组。其中4%高盐饮食组、8%高盐饮食组经高盐饮食干预1个月后,HE染色观察脑部结构,免疫组织化学观察KCC2、NKCC1表达情况。结果高盐饮食使更年期焦虑小鼠海马区锥体细胞排列紊乱,神经元数目明显减少,细胞轮廓模糊,出现大量的空泡现象,细胞形态不规则,细胞间隙明显增大;模型组KCC2表达的阳性细胞明显减少,高盐饮食组阳性细胞极少;模型组NKCC1表达阳性细胞明显增多,高盐饮食组阳性细胞增多更明显。结论高盐饮食加重更年期焦虑症的发生可能与KCC2及NKCC1之间的动态平衡被打破有关。

促凝剂对钾、钠、氯离子及血尿素氮、肌酐、尿酸检查结果的影响分析

目的探讨血液促凝剂对临床钾离子(K)、钠离子(Na)、氯离子(CL)及血尿素氮(BUN)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)检查结果的影响。方法对2013年5月至2014年5月门诊360例患者血液标本进行钾离子(K)、钠离子(Na)、氯离子(CL)及血尿素氮(BUN)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)检查,采用真空静脉采血法,应用普通真空采血管和含有促凝剂的真空采血管对门诊360例患者进行采集血液,每位患者应用普通真空采血管和含有促凝剂的真空采血管各采集4 m L血液,比较两组血液样本中钾离子(K)、钠离子(Na)、氯离子(Cl)及血尿素氮(BUN)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)是否存在差异。结果在进行钾离子(K)、钠离子(Na)、氯离子(Cl)及血尿素氮(BUN)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)检查时,含有促凝剂的真空采血管组钾离子(K)、钠离子(Na)、氯离子(Cl)及血尿素氮(BUN)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)与普通真空采血管组无明显差异(P>0.05)。结论在临床进行钾离子(K)、钠离子(Na)、氯离子(Cl)及血尿素氮(BUN)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)检查时,使用血液促凝剂不会对检查结果产生影响,可缩短临床检验结果的报告时间,为临床诊断疾病赢得宝贵的时间,在临床疾病诊断中应用价值较高,含有促凝剂的真空采血管应广泛应用于临床检验。

美国汽巴-康宁644型钠钾氯分析仪常见故障维修

目的 :介绍美国汽巴—康宁 6 44型钠钾氯分析仪常见故障的原因及维修方法。方法 :从吸样故障、定标故障、测定故障、试剂质量故障 4个方面对故障的表现 ,故障的原因、维修的方法作了说明。结果 :用修复后的仪器测定高、中、低 Na+ 、K+ 、Cl-标准液或血清样本 ,其结果的准确性、重复性、线性均很满意。结论 :能简易、快速、廉价地修复美国汽巴 -康宁 6 44型钠钾氯分析仪 。

CX_3全自动生化分析仪钾、钠、氯试剂的配制

为提供ＳＹＮＣＨＲＯＮＣＸ３型全自动生化分析仪钾、钠、氯试剂，在对随机试剂的组成及理化特性进行分析的基础上，设计配方，并反复进行对比调整，最后选出各项参数及测定结果适合检测的配方。结果，自制试剂从理化特性、线性范围、相关回归、精密度、准确度、稳定性及临床应用等方面均与随机试剂相近。说明自制试剂可以替代随机试剂，满足临床需要。

体外细胞模型实验探讨钠钾氯同向转运体对血脑屏障渗透性的调控机制

背景钠钾氯同向转运体与血脑屏障的损伤密切相关,具体调节机制仍有待研究。目的利用体外模型探讨钠钾氯同向转运体对血脑屏障渗透性的调控机制。方法利用bEnd3小鼠脑微血管内皮细胞和BV2小鼠小胶质细胞在Transwell小室中建立血脑屏障模型。通过跨内皮细胞电阻(trans-epithelium electrical resistant,TEER)和荧光素钠渗透实验检测血脑屏障功能,Western blot检测炎症小体NLRP3蛋白含量,ELISA检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)的水平,免疫荧光评估血管内皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1的完整性。结果炎症环境下小胶质细胞的激活会破坏血脑屏障模型的完整性,降低TEER值,增加血脑屏障模型的通透性(P<0.05)。在共培养模型中,钠钾氯同向转运体特异性抑制剂显著改善了脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血脑屏障损伤(P<0.05),而在内皮细胞单培养构建的血脑屏障模型中未观察到此现象。钠钾氯同向转运体特异性抑制剂还降低了小胶质细胞炎症小体NLRP3的表达,抑制了小胶质细胞IL-1β和MMP-9的分泌(P<0.05),在共培养模型中,抑制NLRP3炎症小体改善了LPS诱导的血脑屏障损伤,增加了TEER值,降低了屏障的渗透系数(P<0.05)。结论钠钾氯同向转运体对血脑屏障渗透性的调节作用可能是通过小胶质细胞来源的NLRP3炎症小体介导的。

背根神经节中TRPV1激活对钠-钾-氯共转运体表达和功能的影响

目的:探讨在急性神经源性炎性痛模型中,用辣椒素激活瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)后对背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞钠-钾-氯共转运体(sodium-potassium-chloride co-transorter 1,NKCC1)及其磷酸化蛋白表达变化及功能的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为:正常组(n=24)、辣椒素组(n=36)和辣椒素+布美他尼组(n=6)。运用免疫荧光和Western blotting技术检测NKCC1和p-NKCC1的蛋白分布及其变化;运用膜片钳技术检测GABA激活电流大小;运用氯离子荧光探针检测DRG细胞内氯离子浓度变化。结果:免疫荧光结果显示TRPV1和NKCC1在正常大鼠DRG细胞共表达,辣椒素组NKCC1和p-NKCC1荧光强度高于正常组;行为学结果显示辣椒素组热缩足反射潜伏期减小、冷缩足反射潜伏期延长,给予NKCC1的抑制剂布美他尼预处理后,则能逆转该效果。Western blotting结果显示辣椒素组NKCC1和p-NKCC1的蛋白表达升高;膜片钳结果显示辣椒素组GABA激活电流明显增加,布美他尼可逆转此作用;荧光探针结果显示辣椒素组DRG细胞内氯离子浓度增加,给予布美他尼后DRG细胞中氯离子浓度降低。结论:外源性激活TRPV1后促进了NKCC1的表达增加和功能变化,提示NKCC1参与了激活TRPV1引起的疼痛。

荧光比色法与离子选择电极法测定血钾、钠、氯的实验对比分析

目的:对荧光比色法(OPTI)与离子选择电极法(ISE)测定血钾、钠、氯的准确性和稳定性对比分析。方法:利用配制不同比例钾、钠、氯溶液,观察ISE法和OPTI法线性范围;通过对定值质控血清和临床病人标本钾、钠、氯检测,观察两方法结果间的差异性和相关性。结果:实验结果表明:IST法和OPTI法线性范围良好,满足临床要求。两法测定定值质控血清、病人全血、血浆钾、钠、氯结果间均无明显差异(P>0.05)。且两法结果间具有良好相关性(平均相关系数大于0.9800)。两法质控血清钾、钠、氯测得值与理论值相符(P>0.05)。结论:AVL-OPTICAA血气分析仪使用荧光比色法检测血气和钾、钠、氯指标,结果快速准确可靠,能够为临床治疗酸碱平衡失调和电解质紊乱提供有价值的帮助。

低钾低钠低氯高纯仲钨酸铵制备工艺研究

随着产品工艺的发展,零级品的APT原料已不能满足高端硬质合金的生产要求。传统工艺在制取高纯仲钨酸铵时,一般使用零级品APT进行氨溶,再通过蒸发重结晶,以达到提纯的目的。研究根据离子交换法制取仲钨酸铵的原理,通过优化现有离子交换法制取仲钨酸铵工艺,过程主要包括配矿球磨、碱煮过滤、离子交换、除钼、蒸发结晶、烘干筛分等阶段,试验中通过严格控制离子交换、除钼、结晶洗涤、去离子水制备等工序的生产技术指标和所使用的各辅助材料中杂质的含量,从而达到制取低钾、低钠、低氯高纯仲钨酸铵的目的,所制取的高纯仲钨酸铵的总杂质能保证在7×10^(-5)以内,特别是ω(K)≤3×10^(-6)、ω(Na)≤2×10^(-6)、ω(Cl)≤1×10^(-5)。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者伴低钾钠氯血症65列临床分析

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)并发低钾、钠、氯血症的病因、临床特点及防治措施。方法选取我院呼吸科65例慢性阻塞性肺疾病急性加重期并发低钾、钠、氯血症患者的临床资料,对其进行回顾性分析。结果慢性阻塞性肺疾病急性加重期并发低钾、钠、氯血症时心、肺、脑功能障碍、内环境紊乱,使病情加重、复杂,易造成误诊误治,治疗难度加大。结论慢性阻塞性肺疾病急性加重期并发低钾、钠、氯血症时其临床表现特异性不高,在治疗原发病的同时应及时作血电解质、动脉血气血分析检查具有重要的临床意义。

缺血缺氧中心区星形胶质细胞死亡方式与钠钾ATP酶活性及NKCC1表达的关系

目的通过改良的糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型,探讨缺血缺氧中心区星形胶质细胞损伤后的细胞死亡途径与细胞膜损伤中钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)活性及钠-钾-氯共转运体1(Na+-K+-2Cl--cotransporter 1,NKCC1)表达的关系。方法取出生24h内的SD大鼠海马星形胶质细胞进行体外培养,鉴定其纯度,应用改良的OGD模型,将星形胶质细胞进行OGD(0、1、2、3、4、6h)处理后检测不同时间点细胞的胀亡率、凋亡率、ATP含量、钠钾ATP酶的活性及NKCC1的表达水平。结果星形胶质细胞存活率随OGD时间的延长而降低,OGD 3h后胀亡细胞率超过凋亡细胞率。ATP含量和钠钾ATP酶活性随OGD时间的延长而下降,NKCC1的表达随着OGD时间的延长先增加后减少,在OGD 3h后明显减少。结论缺血缺氧中心区星形胶质细胞死亡在OGD 3h内以凋亡为主,OGD3h后胀亡是细胞死亡的主要方式,这种转化或许与Na+,K+-ATPase活性及NKCC1表达的激活有关。

大鼠双侧输尿管梗阻后肾脏钠通道的改变

目的 :探讨泌尿系梗阻后肾脏功能的改变机制。方法 :2 0只大鼠随机分为实验组 (n =10 )及对照组 (n =10 )。实验组双侧输尿管梗阻 2 4h后解除梗阻 ,对照组手术同实验组 ,但不结扎。所有大鼠于术前 3d及术后 4d测量饮水量、食量、体重及尿量 ;术后 4d抽取动脉血化验 ,同时取出双侧肾脏 ;右肾全肾快速放入液氮冰冻备份 ,左肾分离出内髓 (IM)、外髓内带 (ISOM)、外髓外带加肾皮质 (OSOM +C) ,免疫杂交法检测 3型钠氢交换通道 (NHE3)、钠钾ATP酶 (Na -K -ATPase)和钠 -钾 - 2氯协同转运通道蛋白 (BSC - 1)。结果 :实验组输尿管梗阻 2 4h后引起肾脏水钠排泄异常 ,机体水电解质紊乱 ;肾脏不同部位NHE3、Na-K -ATPase及BSC - 1表达均较对照组降低 (P均<0 .0 1)。结论 :NHE3、Na-K -ATPase及BSC - 1水平降低可能是泌尿系梗阻后肾小管性钠回吸收障碍。

氯离子转运蛋白NKCC1在老年小鼠术后认知功能障碍中的作用

目的探讨氯离子转运蛋白钠离子钾离子氯共转运体1(NKCCl)在老年小鼠术后认知功能障碍(POCD)中的作用。方法选择老年雄性C57BL/6小鼠40只,18~20月龄,体重28~32 g。将小鼠随机分为四组:对照+生理盐水组(N组),对照+布美他尼(NKCC1抑制剂)组(B组),POCD模型+生理盐水组(M组)和POCD模型+布美他尼组(MB组),每组10只。采用异氟醚麻醉和剖腹探查术建立POCD动物模型,于术后3~7 d行旷场与条件恐惧实验评估认知功能;行为学结束后采用Western blot法检测海马组织NKCC1、钾离子氯离子共转运体2(KCC2)、脑源性神经营养因子(BDNF)及突触后密度蛋白95(PSD95)的蛋白含量,免疫组织荧光检测海马组织CA1、CA3、DG区NKCC1免疫荧光强度。结果与N组比较,M组场景僵直时间明显缩短(P<0.05),海马NKCC1蛋白含量明显升高(P<0.05),BDNF、PSD95蛋白含量明显降低(P<0.05),海马组织CA1、CA3、DG区NKCC1免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。N组和B组各指标差异均无统计学意义。与M组比较,MB组场景僵直时间明显延长(P<0.05),海马NKCC1蛋白含量明显降低(P<0.05),BDNF、PSD95蛋白含量明显升高(P<0.05),海马组织CA1、CA3、DG区NKCC1免疫荧光强度明显减弱(P<0.05)。结论NKCC1可能在老年小鼠POCD中发挥关键作用,其机制可能与突触相关蛋白BDNF与PSD95表达水平下调有关。

钠钾氯同向转运蛋白-1与脑水肿

脑水肿即水在大脑细胞内外病理性蓄积。脑水存在于脑室系统、蛛网膜下腔、细胞间隙、脑细胞4个相互影响的区域当中，大脑内环境轻微的变化就会使脑水重新分布或血脑屏障通透性发生变化而引起脑水肿。脑水肿在临床上非常常见，它作为继发于如缺血缺氧性脑病、颅脑创伤等疾病最常见的并发症之一，是致残及导致死亡的重要原因。

钠钾氯同向转运体2在新生小鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电产生中的作用

目的研究延髓面神经后核内侧区呼吸神经元钠钾氯同向转运体（NKCC2）对基本节律性呼吸的调控作用。方法制作包含面神经后核内侧区（mNRF）并保留舌下神经根的新生小鼠离体延髓脑片标本，灌流改良Kreb液（MKS），使用吸附电极记录其舌下神经根的呼吸相关节律性放电活动（RRDA）。依次使用含NKCC2阻断剂呋塞米0、0．125、0．250、0．500和1．000mmol／L的MKS灌流脑片，以呼吸周期（RC）、吸气时程（TI）和放电幅度积分（IA）为观察指标，研究阻断呼吸神经元细胞膜上NKCC2对RRDA的影响。结果在0—0．500mmol／L浓度范围内，呋塞米可缩短RRDA的RC（P〈0．05或0．01），且呈浓度依赖性，1．000mmol／L的呋塞米延长RC（F=25．623，P〈0．05）。随呋塞米浓度增加RRDA的TI逐渐延长（F=6．063，P〈0．05）。在0—0．500mmol／L浓度范围内，RRDA的IA随呋塞米浓度增加而增加（P〈0．05），1．000mmol／L的呋塞米可降低IA（F=6．778，P〈0．05）。在0～0．500mmol／L浓度范围内，呋塞米对RRDA有兴奋作用，1．000mmol／L的呋塞米对RRDA有抑制作用。结论延髓mNRF神经元细胞膜上存在NKCC2，参与新生小鼠延髓基本节律性呼吸的调控。