3D生物打印兔肺成纤维细胞水凝胶结构体片段

目的通过三维(3D)生物打印兔肺成纤维细胞-海藻酸钠-明胶共混物,探讨3D生物打印技术构建肺成纤维细胞水凝胶结构体片段的可行性。方法用轻度Ⅳ型胶原酶消化结合组织块培养法分离纯化新生兔肺成纤维细胞,并对分离纯化的肺成纤维细胞进行原代和传代培养;制备海藻酸钠-明胶水溶胶,与兔肺成纤维细胞共混;用圆柱状微丝逐层交错堆积技术,进行兔肺成纤维细胞-海藻酸钠-明胶共混物的3D生物打印,获得三维结构体。用钙黄绿素-AM和碘化丙啶溶液对该结构体进行活/死细胞双荧光染色,评价打印后及培养后兔肺成纤维细胞的活性,计算细胞存活率。结果通过按照设计的参数,打印出含有兔肺成纤维细胞的网格状水凝胶结构体。该结构体的大小约为9 mm×9 mm×1.2 mm,微丝间的孔隙相互通连,孔隙大小约600μm×600μm。打印后的兔肺成纤维细胞在三维结构体中仍可增殖,活/死细胞荧光染色结果表明结构体中兔肺成纤维细胞的存活率约为84%±3%,兔肺成纤维细胞在结构体中分布均匀。结论本实验实现了兔肺成纤维细胞共混物结构体的3D生物打印,为构建类肺组织工程结构体片段提供新思路。