乙酰唑胺对水孔蛋白-1表达的抑制与细胞内pH及Ca^(2+)的关系

为明确乙酰唑胺对水孔蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)基因表达的抑制是否与其对细胞内pH和Ca2 + 浓度的影响有关 ,采用激光共聚焦扫描显微镜的技术观察不同培养条件下 (培养液中含或不含NaHCO3) ,10 - 5mol·L- 1 乙酰唑胺对原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞内pH和Ca2 + 浓度的影响 ,同时用免疫荧光法观察给药 1d、3d、7d后AQP1表达的变化。结果显示在含NaHCO3组 ,乙酰唑胺处理 7d后 ,使细胞内的H+ 探针的荧光强度由 91 81± 5 4 4降至 39 5 8± 3 10 ,Ca2 + 探针荧光强度由 18 2 3± 1 0 2降至 11 5± 1 0 3,AQP1蛋白荧光强度由 4 4 4± 1 86减少到2 5 91± 1 97;在不含NaHCO3组 ,细胞内pH和Ca2 + 浓度均无明显变化 ;但AQP1蛋白的荧光强度由 4 3 15± 2 97明显减少到 2 3 85± 1 92。结果表明乙酰唑胺对细胞内pH和Ca2 + 浓度的调节依赖于细胞外液HCO3- 的存在 ,而它对AQP1表达的抑制与细胞内pH和Ca2 +

高浓度葡萄糖上调人血管内皮细胞水孔蛋白-1的表达

目的 观察高浓度葡萄糖对人血管内皮细胞水孔蛋白-1(AQP1)表达的影响。方法 用高浓度葡萄糖和高渗透压分别刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)6、24、48、72 h,观察其对AQP1蛋白和mRNA表达的影响,以未添加葡萄糖或甘露醇培养组为对照组。结果 培养6 h后,各组AQP1蛋白和mRNA的表达量无明显差别(P>0.05);培养24 h后,4.25％葡萄糖组与对照组相比,AQP1表达量明显增加(P<0.05);继续培养AQP1表达量的增加更为明显。与甘露醇培养基组比较,AQP1表达量在蛋白质水平和mRNA水平均无明显差别(P>0.05)。结论 提示体外高浓度葡萄糖可上凋人血管内皮细胞AQP1的表达,其上凋作用可能主要通过高渗透压作用介导。

罗格列酮对人腹膜间皮细胞和脐静脉内皮细胞水孔蛋白-1的影响

目的探讨体外条件下核受体Peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPAR-gamma)激动剂罗格列酮(RosiglitazoneRGZ)对人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells HPMCs)、人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVECs)水孔蛋白-1(aquaporin 1 AQP1)增殖以及基因水平的影响。方法以HPMCs和HUVECs为研究对象,将实验分成四组:对照组、RGZ组(10uMRGZ)、GW9662组(peroxisome proliferator-activated receptor gamma antagonist 20uMGW9662)以及GW9662+R组(20uMGW9662提前作用1H后加入10uMRGZ)。应用比色法(CCK-8)观察RGZ等对HPMCs和HUVECs增殖的影响。应用Realtime-PCR方法检测罗格列酮等对水孔蛋白-1基因水平表达的影响。结果①GW9662+R组与对照组相比,可以明显抑制HPMCs增殖(P<0.01),其他组对HPMCs增殖没有明显影响(P>0.05)。而对HUVECs,RGZ组、GW9662组以及GW9662+R组都可以促进其增殖(P<0.01);②罗格列酮上调这两种细胞AQP1基因水平的表达。结论在体外,罗格列酮可影响HPMCs和HUVECs水孔蛋白质1基因水平的表达。其作用机制可能是通过激活PPAR-gamma从而影响上述两种细胞的AQP1的表达。

水孔蛋白-1在人腹膜组织表达及腹膜透析对其表达的影响

据CMJ报道,上海第二医科大学附属仁济医院的方炜、钱家麒等医师采用Western blot、免疫组化和RT-PCR等技术观察了水孔蛋白-1(Aquaporin-1,AQP1)在人腹膜组织的表达以及腹透对其表达的影响。结果发现人腹膜表达AQP1,除了毛细血管和小静脉内皮细胞外,腹膜间皮细胞也表达AQP1。各组AQP1蛋白质和基因水平的表达量均没有显著差别。研究结果支持AQP1是腹膜转运超小孔的分子结构,提示腹膜间皮细胞可能也参与了腹膜跨细胞的水转运。进一步深入研究AQP1结构或分布的改变,以及与腹膜超滤的关系可能对探讨腹膜透析超滤衰竭的发生机制具有一定意义。

水孔蛋白1在人腹膜组织的表达及腹膜透析对其表达的影响

目的观察水孔蛋白1(aquaporin-1,AQP1)在人腹膜组织的表达以及腹膜透析(腹透)对其表达的影响,以期探讨长期腹透后腹膜超滤功能下降的可能机制。方法采用Western blot、免疫组织化学(组化)以及RT-PCR等技术观察正常对照者、尿毒症非透析患者以及腹透患者的腹膜活检标本AQP1在蛋白质和基因水平表达。结果各组腹膜均有AQP1表达,除了毛细血管和小静脉内皮细胞外,腹膜间皮细胞也表达AQP1。半定量分析表明各组.AQP1蛋白和mRNA的表达量差异均没有显著性意义。结论本研究支持AQP1是腹膜转运超小孔的分子结构。研究结果提示腹膜间皮细胞可能也参与了腹膜跨细胞的水转运。腹透对腹膜AQP1的表达量没有明显影响,因此进一步深入研究AQP1结构或分布的改变,以及与超滤衰竭的关系可能对探讨腹膜超滤衰竭的发生机制具有一定意义。