口蹄疫、水泡性口炎和猪水泡病多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的建立同时检测口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒的多重荧光RT-PCR检测方法。方法根据口蹄疫病毒3D蛋白编码基因、水泡性口炎病毒N蛋白编码基因和猪水泡病病毒VP1蛋白编码基因的高保守区设计特异性引物和探针,对3种动物病毒进行多重荧光定量RT-PCR扩增。结果经过扩增,可以同时检测口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒,而其他参试病原均无扩增信号,显示其良好的特异性。对口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒、猪水泡病病毒的最低检测限分别达到101、102、102个质粒拷贝浓度。结论本方法灵敏度高,特异性良好,可实现多种病毒混合感染的同时检测。

印第安纳型水泡性口炎病毒实时荧光RT-LAMP检测方法的建立

利用ESE-Quant tube scanner监测平台,建立了一种基于实时荧光RT-LAMP技术的印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IN)快速检测方法。根据VSV-IN的G基因序列,设计6条特异性引物,在63℃条件下,进行核酸扩增,反应时间为45 min。在扩增前加入SYBRGreenⅠ染料作为反应的指示剂,以SYBRGreenⅠ染料的荧光强度作为结果判定标准。结果表明,建立的实时荧光RT-LAMP方法操作简单、反应快速、灵敏度高、特异性好,能快速检测VSV-IN,并可以区分新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ)。

SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测水泡性口炎病毒方法的建立

本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IN)和新泽西型水泡性口炎病毒(VSVNJ)的G基因,然后将其连接到克隆载体pMD19-T上,构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G和pMD-VSV-NJG。根据GenBank中VSV-IN和VSV-NJ的G基因保守序列设计引物,利用SYBR GreenⅠ法进行实时荧光定量RT-PCR,建立标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果,在拷贝数6.82~6.82×10^(8)copies/μL范围内,C;值与质粒拷贝数的对数值呈良好的线性关系,pMD-VSV-IN-G标准曲线的R;值为0.99812,p MD-VSV-NJ-G标准曲线的R^(2)值为0.99748;检测其他病毒均无特异性扩增曲线,特异性良好。pMD-VSVIN-G的检测灵敏度为6.82 copies/μL,pMD-VSV-NJ-G的检测灵敏度也为6.82 copies/μL,是普通RTPCR方法的10倍。用该方法对实验室保存的VSV-IN和VSV-NJ各5份攻毒小鼠样品进行检测,检测结果与普通RT-PCR检测一致。上述结果表明,本检测方法的建立对快速、灵敏鉴别诊断IN型和NJ型水泡性口炎病毒具有重要的应用价值。

重组病毒载体疫苗研究进展

近年来,重组病毒载体疫苗受到了广泛的重视,它是将外源保护性抗原基因插入到病毒基因组内获得重组病毒,免疫机体后表达出相应的目的蛋白,从而诱导免疫应答的一类载体疫苗。重组病毒载体疫苗具有插入外源基因长、接种途径多、能诱导体液免疫和细胞免疫反应及易生产制备等优点,且能克服传统疫苗的某些弊端,能极大地提高疾病的预防性,已在疫苗研制中得到了广泛的应用。以重组病毒作为表达载体制成的预防性疫苗已开展多项临床试验,本文综述了重组病毒载体疫苗当前的最新研究进展,并分析了其发展趋势,为进一步研制新型重组病毒疫苗提供参考。