水牛α-乳清蛋白基因部分序列的测定与分析

根据奶牛α-乳清蛋白基因序列设计引物,用PCR方法扩增并克隆了包含水牛(Bubalusbubalis)α-乳清蛋白基因的5′侧翼序列(709bp)和第1外显子(160)、第1内含子(337bp)和部分第2外显子(73bp)的序列。将该序列与牛的相应序列进行比较表明,尽管具有非常高的同源性(97.6%),但仍然存在一些碱基差异,这些碱基差异导致了一些转录调控因子识别序列的产生或消失以及转录调控因子识别位点之间的距离的变化,这可能是导致这两个物种中该基因表达存在明显表达差异的原因之一。

水牛α-乳清蛋白基因的克隆及序列分析

根据报道的奶牛α-乳清蛋白基因核苷酸序列设计和合成4对引物,采用PCR扩增的方法克隆并测定了水牛α-乳清蛋白全基因的核苷酸序列。结果表明,克隆的水牛α-乳清蛋白基因全长3 038 bp,包括5′侧翼区,3′侧翼区,3个内含子和4个外显子(该序列已被成功提交到GenBank,序列接收号为EU422984)。核苷酸序列比对结果表明,水牛α-乳清蛋白基因与报道的奶牛该基因的核苷酸序列同源性为97.53%。水牛α-乳清蛋白成熟肽的氨基酸序列与奶牛相比有两个氨基酸的差异。与奶牛相比,水牛α-乳清蛋白基因5′调控区发生了多处插入突变和碱基替换突变,这些插入和替换突变可能与水牛乳汁中α-乳清蛋白的高水平表达有关。

牦牛α-乳清蛋白基因的克隆与序列分析

根据奶牛α 乳清蛋白基因序列设计引物 ,用PCR方法扩增并克隆了牦牛 (Poephagensgrunnieus)α 乳清蛋白基因的全序列。结果表明 ,牦牛α 乳清蛋白基因长 2 999bp ,其中 1～ 670bp为 5′侧翼序列 ,2 690～2 999bp为 3′侧翼序列 ,在 671～ 2 689bp之间 ,共有 4个外显子和 3个内含子 ,牦牛α 乳清蛋白基因共编码 14 2个氨基酸 ,其中第 1～ 19氨基酸之间的短肽为信号肽序列。牦牛的α 乳清蛋白基因有较高水平的表达可能与基因内非编码序列碱基突变引起的回文结构消失有关。该基因 5′侧翼序列在结构上牦牛和牛基本相同 ,只有MGF因子识别位点稍有差别。且牦牛的该序列更符合Groenen等 1994年总结的该因子识别位点的模式序列 ,因此牦牛的该基因

水牛α-清蛋白基因3′端调控区的PCR克隆及序列分析

对水牛α-乳清蛋白基因的3′端调控区进行了PCR扩增及重组质粒的酶切鉴定,比较了水牛和牦牛该基因的核苷酸序列同源性。序列分析结果表明:水牛α-乳清蛋白基因3′端序列与牦牛该基因在641 bp的序列中存在34 bp的差异,同源性为94.69%。