水牛角含巯基类成分解热效应评价研究

目的制备水牛角含巯基类成分(-SH active fractions,SHF),评价其解热效应。方法通过十二烷基硫酸钠-二硫苏糖醇(SDS-DTT)联合提取法制备水牛角SHF,并采用Ellman法测定游离巯基(-SH)浓度;基于nano LC-MS/MS分析表征水牛角SHF物质组成。采用脂多糖(LPS)建立大鼠发热模型评价水牛角SHF解热活性,采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒测定血浆中前列腺素E 2(PGE 2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,测定下丘脑环磷酸腺苷(cAMP)、PGE 2、TNF-α的水平;采用非靶向代谢组学的方法,探究水牛角SHF对发热大鼠血浆代谢物干预情况。结果SDS-DTT联合提取法可有效制备水牛角SHF,其中主要成分为含丰富半胱氨酸残基(Cysteine,Cys)的Ⅰ型、Ⅱ型角蛋白、角蛋白相关蛋白等,SHF的-SH占蛋白质比例较水牛角水提液提高了约20倍。发热大鼠给予水牛角SHF 0.5 h后大鼠体温显著下降(P<0.01),且解热效应持续4.5 h;同时显著降低血浆及下丘脑PGE 2、IL-1β、TNF-α、cAMP等水平。从空白组与模型组血浆样本中共鉴定出137个潜在差异代谢物,水牛角SHF可回调其中31个代谢物,包括溶血磷脂酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、甘油三酯、磷脂酰胆碱等,主要涉及甘油磷脂代谢通路。结论水牛角SHF解热效应确切,给药剂量为水提液的1/10即可显示与其相当的解热效应,为水牛角清热功效物质基础研究提供了方向和依据。

水牛角对血热出血模型大鼠的止血作用及机制

目的:探讨水牛角对血热出血模型大鼠的止血作用及机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组、出血模型组、云南白药组、水牛角高剂量组、水牛角中剂量组、水牛角低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用干姜水煎液结合5%乙醇给药复制血热出血模型。造模6 h后,云南白药组大鼠予云南白药溶液(0.5 g/kg)灌胃,水牛角高、中、低剂量组大鼠分别灌胃高(36 g/kg)、中(18 g/kg)、低(9 g/kg)剂量水牛角水煎液,正常对照组、出血模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。1次/d,连续14 d。末次给药1 h后检测各组大鼠体质量、饮水量、摄食量、尿量、粪便含水量、体质量增长率、肛温;腹主动脉取血检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白降解产物(FDP)、抗凝血酶(AT);HE染色观察肺、胃组织病理学变化。结果:出血模型组大鼠肛温高于正常对照组(P<0.01),体质量增长率、摄食量、饮水量、尿量、粪便量及粪便含水量均低于正常对照组(P<0.01);云南白药组大鼠肛温低于出血模型组(P<0.05),体质量增长率高于出血模型组(P<0.01);水牛角高、中剂量组大鼠肛温低于出血模型组(P<0.01或P<0.05),体质量增长率、摄食量、饮水量、尿量、粪便量及粪便含水量均高于出血模型组(P<0.01或P<0.05)。出血模型组大鼠PT、APTT均低于正常对照组,FIB、TT均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);云南白药组大鼠TT、FIB均低于出血模型组(P<0.05);水牛角高、中剂量组大鼠PT、APTT均高于出血模型组,FIB、TT均低于出血模型组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。出血模型组大鼠AT、FDP高于正常对照组(P<0.01);云南白药组大鼠FDP低于出血模型组(P<0.01);水牛角高、中剂量组大鼠AT、FDP均低于出血模型组(P<0.01)。正常对照组大鼠肺、胃组织基本正常;出血模型组大鼠肺、胃组织均出现炎症细胞浸润和出血变化;与出血模型组比较,云南白药组、水牛角高剂量组、水牛角中剂量组肺、胃组织的病理变化均有不同程度减轻;水牛角低剂量组大鼠以上各项指标和组织病理改变不明显。结论:水牛角可能通过调节凝血系统、纤溶系统,改善肺、胃组织病理变化而发挥止血作用。

水牛角主要药效学评价及解热活性物质基础研究

目的对水牛角的解热、镇静、促凝血等生物活性进行了评价研究,并针对其解热活性的物质基础开展了初步研究。方法采用皮下酵母致热法、光电管法、毛细管法评价了水牛角粉、热提液和冷浸液的解热、镇静、促凝血作用;采用凝胶柱层析法将水牛角热提液按分子量分为大、中、小3个部位,并以皮下酵母致热法评价了各部位的解热作用。结果水牛角粉、水牛角热提液和冷浸液均可降低酵母致热大鼠体温、降低小鼠自发活动次数、缩短小鼠凝血时间,其中热提液的作用强于冷浸液样品;水牛角热提液的大分子量和小分子量部位均能降低酵母致热大鼠体温,中分子量部位作用不明显。结论水牛角粉、水牛角热提液均具有明显的解热、镇静、促凝血作用,冷浸液解热作用较弱;水牛角解热作用的物质基础源于大分子和小分子部位的共同贡献。

犀角与水牛角药理作用的研究

犀角水煎液与水牛角浓缩粉水煎液均能明显降低大肠杆菌内毒素所致小鼠死亡率；缩短DIC模型大鼠血中的白陶土部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间和升高血小板数；能协同戊巴比妥钠延长小鼠睡眠时间．结果表明，犀角与水牛角以上作用相似．

水牛角水解物的止血作用研究

目的 研究水牛角水解物 (HydrolysateofBubalusBubalisL ,HBB)的止血作用、作用时效性与作用机制。 方法 采用小鼠断尾试验、玻管凝集试验及体外血小板聚集试验。 结果 在静脉给药药物浓度为 0 12 5至 2mg/kg时 ,小鼠断尾后的出血时间随剂量增加而显著缩短 (P <0 0 1) ,给药后即刻 (0分 )观察到止血作用 ,这种作用可持续至给药后 36 0min ;玻管凝集试验结果与断尾试验的结果平行 ,给药组凝血时间显著缩短 ,具有显著性 ;体外血小板聚集试验结果发现 ,本品具有很弱的血小板诱导聚集作用。 结论 水牛角水解物静脉给药具有快速止血作用 ,止血作用与诱导血小板聚集有关。

广角、水牛角和黄牛角中无机元素的比较研究

对广角、水牛角和黄牛角中的钙、镁、铁、锌、铜、锰、钴和铅进行了测试，结果显示３种角既有一定的相似性，又有差异性。

广角、水牛角和黄牛角的氨基酸比较研究

氨基酸测试结果表明，３种角的氨基酸总量有一定差异，而氨基酸组成及含量分布相似，同时，两种牛角的各部位氨基酸组成及含量也相似。

OPA-FMOC联用柱前衍生HPLC法测定水牛角药材中氨基酸含量

通过建立HPLC分析方法,测定水牛角药材中氨基酸,为水牛角药材质量标准的制订提供科学依据.通过OPA-FMOC柱前衍生化法,建立了同时测定水牛角药材中18种常见氨基酸的液相方法.色谱柱为Prevail-C18柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相A为0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（5mL/L四氢呋喃,40%氢氧化钠溶液调pH7.2）,流动相B为0.025mol/L磷酸二氢钠溶液∶甲醇∶乙腈（体积比为500∶350∶150,pH 7.2）,梯度洗脱;流速0.8mL/min;柱温25℃;检测波长：0~51min为338nm,51min以后为262nm.所测18种氨基酸在各自的高、低浓度范围内线性关系良好;10个批次水牛角药材中,氨基酸平均含量为60%.所建立的氨基酸定量方法结果准确可靠,重现性好,为控制水牛角药材的质量控制,制订水牛角药材质量标准具有参考意义.

水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用研究

目的:研究水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用。方法:通过观察小鼠对戊巴比妥钠催眠作用的反应、对脂多糖引起死亡的抵抗及用药后小鼠凝血时间、自发活动和对抗感染的影响和作用,研究水牛角不同相对分子质量酶解液的药理作用。结果:与生理盐水(NS)对照组比较,相对分子质量<3kD和10～30kD的酶解液有明显的镇静作用(P<0.01);相对分子质量<3kD酶解液有显著的抵抗脂多糖引起的死亡作用(P<0.05);相对分子质量>30kD酶解液有明显的止血作用(P<0.01);相对分子质量>5但<10kD酶解液有明显的抑制自发活动作用(P<0.01);相对分子质量>5但<10kD组和10～30kD组有明显的提高抗细菌感染作用(P<0.01)。结论:水牛角不同相对分子质量酶解液,药理作用不同。

草乌水牛角配伍的实验研究

草乌与犀角配伍属于中药的“十九畏”内容之一。实验用水牛角代替犀角与草乌配伍，在生理条件及免疫功能低下的条件下就二者配伍前后进行镇痛、抗炎、免疫、血液等药理指标的观察研究，结果表明：对镇痛、抗炎、白细胞、胸腺、凝血时间等指标，单用时有作用，合用后作用不如单味；对脾指数，单用合用均无影响；水牛角有一定的降温作用，与草乌合用后对体温均无影响。提示二药配伍可属中药七情中的“相恶”范畴。

水牛角与羚羊角的HPLC法鉴别

建立一种鉴别水牛角与羚羊角药材的质控方法。采用OPA柱前衍生反相高效液相色谱法,色谱柱为HP Hypersil ODS柱(125 mm×4.6mm×5μm),以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。流动相A:8.0 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2),含φ=0.3％四氢呋喃;流动相B:8.0 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)+甲醇+乙腈(50+35+15)。线性梯度洗脱;荧光检测器,Ex=340nm,Em=450 nm。结果水牛角与羚羊角药材在氨基酸的含量上有明显差异。本文所建立的方法简便,重现性好,可用于水牛角与羚羊角药材的鉴别。

制川乌、水牛角配伍的实验研究

川乌畏犀角属于中药“十九畏”的内容之一，实验以水牛角代替犀角，与制川乌配伍。实验结果表明在小鼠正常生理条件下，二药合用与单味时比较，对镇痛、抗炎、脾指数、常温下游泳的存活时间等均有不同程度的减弱或降低，提示二药配伍属“相恶”范畴。

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定水牛角中氨基酸的含量

以邻苯二甲醛和β-巯基乙醇为衍生化试剂，往前衍生，ODS（C18）柱分离；pH5．6醋酸盐缓冲溶液、甲醇二元梯度洗脱，荧光检测，在32min内分离测定了水牛角中12种氨基酸的含量。在一定浓度范围内，氨基酸的峰面积与其浓度呈现良好的线性关系，相关系数在0．9975－0．9994之间。对于12种氨基酸，标准加入回收率在94％－106％之间。

草乌、水牛角配伍的化学成分研究

草乌与犀角配伍属于中药“十九畏”的内容之一。犀角为禁用之品，临床多以水牛角代之。本文对水牛角、草乌提取物以薄层层析的方法，检测其有效成分的变化。结果表明二药配伍后，草乌生物碱类成分溶出率降低，支持二药配伍属中药七情中的“相恶”范畴。

水牛角治头痛作用初探

总结水牛角治疗头痛的作用机制与临床配伍运用。从中医辨证论治及现代医学药理两方面,对水牛角治疗头痛的疗效进行初步探讨。水牛角治疗头痛的机制为抗炎镇痛镇静、抑制过度免疫、维持脑血循环通畅、保护脑组织等。

水牛角提取液中谷氨酸含量的测定

目的测定水牛角提取液中谷氨酸的含量。方法采用氨基酸分析仪测定水牛角提取液中的谷氨酸含量。结果水牛角提取液中谷氨酸的含量为0.225%。结论本法稳定、可行,为评价水牛角药材质量提供依据。

正交实验优选水牛角酶解的提取工艺研究

目的:研究水牛角酶解的最佳提取工艺。方法:以蛋白质含量为指标,通过正交实验筛选水牛角的最佳酶解提取条件。结果:水牛角最佳酶解工艺为:胃蛋白酶,pH=2,加酶量700U/g,温度39℃,时间4h。结论:正交实验确定的条件可较好地应用于水牛角的酶解提取。

基于网络药理学的“水牛角-珍珠母”药对作用机制研究

目的:基于网络药理学,探讨"水牛角-珍珠母"药对的功效物质基础和配伍机制。方法:依托中药系统药理学分析平台检索水牛角和珍珠母的化学成分、作用靶点及相关疾病等信息,构建"药物-成分-靶标-疾病"网络,进行基因本体(gene ontology,GO)分类富集分析、基于京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)的通路富集分析,研究"水牛角-珍珠母"药对的作用机制。结果:"药物-成分-靶标-疾病"网络包含2个药物,6种活性成分,相应靶标765个,相关疾病595种。关键靶点涉及前列腺素内过氧化物合酶2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ等,关键疾病涉及精神分裂症、阿尔茨海默病和炎症等。GO富集分析包含GO条目1 285个,其中生物过程相关条目973个,主要涉及小分子代谢、细胞代谢等方面;分子功能相关条目196个;细胞组成相关条目116个。KEGG通路富集分析包含KEGG通路16条,主要涉及神经活性受体-配体相互作用、PPAR信号通路和谷氨酸能突触等。结论:本研究结果初步验证了"水牛角-珍珠母"药对的基本药理作用及其机制,并为进一步深入揭示其作用机制奠定了良好基础。

多目标决策-理想点法评价水牛角、黄牛角与犀角的无机元素组成相似性

以Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Mn、Co和Pb的含量为评价指标，用多目标决策-理想点法从整体上分析了水牛角、黄牛角与犀角在无机元素组成方面的综合相似性，为寻找理想的犀角代用品提供了科学依据。

丁樱教授配伍应用乌梅和水牛角治疗过敏性紫癜经验撷菁

丁樱教授临床用药机变灵活,在药物的配伍技巧方面具有丰富的经验。其潜心研究小儿过敏性紫癜数十年,总结病机以"热""虚""瘀"为主,治疗上初期强调清热解毒,活血化瘀贯穿始终,配伍应用水牛角、乌梅二药,取得了良好的临床疗效。