基于特异性聚合酶链式反应方法鉴别九味羌活丸中水稻源性成分掺伪

目的通过DNA条形码技术和建立特异性聚合酶链式反应(PCR)方法,有效鉴别九味羌活丸中的水稻源性成分掺伪问题。方法通过建立特异性PCR技术对九味羌活丸中掺伪的水稻源性成分样品的GOS9序列进行扩增,并对PCR反应体系与程序、方法学和系统适用性进行考察,从而对掺伪水稻源性成分进行鉴别。结果该引物体系只针对水稻源性成分DNA进行扩增,与中成药中其他药味的DNA均无交叉扩增,最低能检测到1/1000掺伪的水稻源性成分DNA。将其应用于3厂家8批次样品中检测,以2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,掺伪水稻源性成分的批次在68 bp附近处有一清晰条带,而阴性样品无条带。结论通过特异性引物PCR扩增、电泳检测和克隆测序的方法,可以有效鉴别九味羌活丸中的水稻源性成分掺伪问题。该方法具有快速、特异、灵敏的优点,为水稻源性成分掺伪的分子生物学鉴定方法提供了参考。

风寒咳嗽丸添加水稻源性成分检测方法的研究

目的:采用化学分析及基因检测等技术建立风寒咳嗽丸中水稻源性成分的检测方法,制定相应的新标准,以规范药品生产企业的非法行为,保障用药安全。方法:采用高效液相色谱法对不同来源的风寒咳嗽丸中的成分进行比对,并对其淀粉含量进行测定;采用PCR方法对不同来源的样品进行基因筛查,并优化样品前处理方法和DNA提取过程,对方法的检出限、精密度和重复性进行考察。结果:不同来源的样品指纹图谱明显不同,淀粉含量差异很大。PCR方法证明了问题样品掺入了水稻源性成分,该方法检测限为1 g·kg^(-1),精密度及重复性良好;实验结果表明2批次问题样品和1批次问题混合粉均掺入了水稻源性成分。结论:建立了风寒咳嗽丸中掺伪水稻源性成分的PCR检验检测标准,弥补了此类掺伪手段在监管中的漏洞。