水稻黄矮病毒的纯化和病毒蛋白质及RNA组分的分析

从人工接种水稻黄矮病毒(Rice yellow stunt virus,RYSV)的水稻茎杆中提取到部分纯化的RYSV制品。分析了RYSV的蛋白质组分,表明它的结构蛋白含有L(170k)、G(84k)、N(60k)、M1(31k)、M2(29.5k)和一个分子量为42k的蛋白,并测定了G蛋白氨基末端的部分氨基酸序列。经测定,RYSV RNA的分子量约为12kb。

水稻黄矮病毒基因2的核苷酸序列

从水稻黄矮病毒（ＲＹＳＶ）基因组的ｃＤＮＡ文库中，获得了包含邻接核衣壳蛋白基因的基因２的克隆，并测定了其核苷酸序列。ＲＹＳＶ基因２的５′端起始序列推测为５′－ＡＡＣＡＣ－３′，该起始序列与ＲＹＳＶ其他基因及其他弹状病毒基因的５′端起始序列高度同源。通过测定感病水稻体内ＲＹＳＶ基因２的转录物的３′端序列，精确地定位了ＲＹＳＶ基因２的３′端终止位点。由此确定ＲＹＳＶ基因２全长１２１１个核苷酸，它含有４２个核苷酸的５′端非翻译区，９６９个核苷酸的蛋白质编码区（包括一个终止密码子）及２００个核苷酸的３′端非翻译区。ＲＹＳＶ基因２编码的蛋白质的氨基酸序列与其它弹状病毒基因２编码的磷酸化蛋白（ＶＳＶ的Ｐ蛋白，ＲＶ的Ｍ１蛋白和ＳＹＮＶ的Ｍ２蛋白）相比，缺乏广泛的同源性，但尚存在一个长约３０个氨基酸的序列保守区域。而且ＲＹＳＶ基因２编码的蛋白中含有７个可被ＣａｓｅｉｎｋｉｎａｓｅⅡ磷酸化的位点（Ｓ／Ｔ－Ｘ－Ｘ－Ｄ／Ｅ），有可能它也是一个磷酸化蛋白。因此推测ＲＹＳＶ基因２编码ＲＹＳＶＮＳ蛋白。

应用Dot-ELISA快速检测黑尾叶蝉体内水稻黄矮病毒研究

本文给出了应用膜上斑点免疫吸咐试验(Dot—ELISA)检测黑尾叶蝉体内水稻黄矮病毒的方法,试验研究表明:使用该方法检测比ELISA法不仅操作简便、使用抗原少,而且快速、灵敏度更高并可长期保存结果。因此,作者认为该法可作为基层单位测报时应用。

越南水稻黄矮病毒多克隆血清抗体的制备（英文）

【目的】制备用于检测水稻黄矮病毒(RYSV)的多克隆抗体,为水稻和黑尾叶蝉上的病毒诊断提供技术支持。【方法】利用两种不同来源的RYSV抗原免疫家兔,一种是从受感染的水稻病叶组织纯化获得RYSV病毒粒子;另一种是从越南RYSV分离株克隆出完整N蛋白编码基因,然后将其连接至pET-28a载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中进行诱导表达获得N蛋白抗原。其中,N蛋白抗原又以两种形式(洗脱纯化N蛋白和N蛋白条带聚丙烯酰胺切片匀浆)对家兔进行免疫。最后,采用PTA-ELISA分析评估家兔抗体血清(多克隆抗体)对水稻叶片和黑尾叶蝉RYSV的特异性和敏感性。【结果】分离自越南RYSV分离株的N基因由1542个核苷酸组成,与来自我国和日本RYS分离株N基因序列进行比对,其核苷酸序列同源性分别为98.1%和97.9%,对应的推导氨基酸序列同源性为83.4%和99.4%。以RYSV病毒粒子、洗脱纯化N蛋白和N蛋白条带聚丙烯酰胺切片匀浆3种抗原免疫家兔获得的多克隆抗体均能有效检测出水稻植株中的RYSV,其中,感病植株的OD405分别为1.449、2.337和1.649,健康植株的OD405分别为0.375、0.294和0.283。PTA-ELISA检测结果表明,获得的多克隆抗体能从单个带病毒黑尾叶蝉中检测出RYSV,且该结论在RT-PCR检测中得到进一步验证。【结论】制备获得的多克隆抗体对RYSV具有较高特异性和敏感性,可用于水稻和黑尾叶蝉上的病毒诊断,同时表明以含有病毒植物蛋白的聚丙烯酰胺切片直接注射免疫模型动物制备多克隆抗体具有可行性。